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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室东北农业大学生命科学学院

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只扩增出CHD1-Z。结论这种PCR方法可作为SPF动物育种过程中有效的鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：李思琪尹海畅陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室牡丹江师范学院生命科学与技术学院

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别... 详细信息

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF细胞总RNA,进行反转录后,采用荧光定量PCR的方法,检测鸭IFNγ及干扰素刺激因子的表达量变化情况。结果显示:鸭IFNγ及干扰素刺激因子Mx、DDX50、OASI在mRNA水平上调。实验表明,DEV感染DEF细胞能够诱导鸭IFNγ产生及其相关信号通路的激活。本研究为进一步探索DEV感染DEF细胞激活Ⅱ型干扰素的机制提供理论基础,进而为水禽病的防控、净化提供思路。

关键词：鸭肠炎病毒鸭胚成纤维细胞干扰素干扰素刺激因子上调表达

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禽流感病毒B类等位基因NS1蛋白的原核表达、纯化及热稳定性分析

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农业生物技术学报 2016年第10期24卷 1482-1490页

作者：罗维玉胡永浩张杰王金光朱鹏阳梁立滨周圆李呈军姜丽陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

A型流感病毒的非结构蛋白基因(non-structural protein,NS)在进化上可以分为等位基因A和B,两者之间同源性低于70%;NS1是流感病毒对抗宿主免疫系统的主要毒力因子之一。本研究在序列比对分析的基础上,表达、纯化了本实验室保存的4株B类... 详细信息

A型流感病毒的非结构蛋白基因(non-structural protein,NS)在进化上可以分为等位基因A和B,两者之间同源性低于70%;NS1是流感病毒对抗宿主免疫系统的主要毒力因子之一。本研究在序列比对分析的基础上,表达、纯化了本实验室保存的4株B类等位基因禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/duck/Hunan/S1256/12(H3N8),A/environment/Hunan/S4484/11(H12N7),A/duck/Guangdong/07/00(H5N1)和A/duck/Shanghai/08/01(H5N1))的NS1蛋白,并对其进行稳定性分析。首先从感染的鸡胚尿囊液中提取病毒总RNA,利用特异引物Uni12反转录获得c DNA,以其为模板PCR扩增得到NS1全长片段,利用Bam HⅠ和NotⅠ双酶切将其定向插入p GEX6P-1载体,大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中诱导表达。该蛋白在纯化过程中稳定性差,沉淀析出。为此,进一步构建NS1蛋白截短突变体(1M-202A,R38A/K41A),并在BL21菌株中诱导表达,经过GE health Glutathione sepharose 4B亲和层析、Source Q阳离子交换柱层析和Hitrap Superdex75分子筛凝胶层析逐步纯化,然后进行SDS-PAGE凝胶纯度分析,并测定OD320,进行蛋白热稳定性分析。结果表明,经进化分析,4株病毒均属于禽流感病毒B类等位基因群,4株病毒NS1蛋白经过全长野生型、全长突变体及截短突变体的逐步优化表达,截短突变体NS1蛋白表达质量相对较高,最终经过逐步纯化获得纯度达到90%以上的蛋白样品,且4株病毒中A/duck/Hunan/S1256/12(H3N8)NS1蛋白的稳定性最好。研究结果为进一步研究其分子结构与功能提供了基础资料。

关键词：禽流感病毒 NS1蛋白原核表达纯化热稳定性

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表达欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的重组新城疫病毒候选疫苗的构建及拯救

表达欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的重组新城疫病毒...

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会

作者：张赫南福龙田明尧鲁会军步志高金宁一中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林大学动物医学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室

引言猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是严重危害全球养猪业经济发展的病毒性疾病之一。目前,疫苗免疫仍是该病的主要防控措施。由于碱基突变率高和自我修复能力不足,该病毒不断变异,毒力变... 详细信息

引言猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是严重危害全球养猪业经济发展的病毒性疾病之一。目前,疫苗免疫仍是该病的主要防控措施。由于碱基突变率高和自我修复能力不足,该病毒不断变异,毒力变化明显,现有的疫苗不能产生完全有效的免疫保护。研制安全有效的新型疫苗成为该病的研究热点。新城疫病毒LaSota株作为疫苗载体具有可诱导体内

关键词：重组新城疫病毒欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 候选疫苗

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组...

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩牡丹江师范学院生命科学与技术学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队

目的在前期高通量测序分析的基础上,本实验进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况,为进一步探讨它们可能与MD抗性/易感性相关的分子机制研究... 详细信息

目的在前期高通量测序分析的基础上,本实验进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况,为进一步探讨它们可能与MD抗性/易感性相关的分子机制研究奠定基础。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同。结论尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关。

关键词： miR-200b 马立克氏病(MD) 抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4传代致弱株HuN4-F30感染性克隆的构建及拯救病毒致病性分析

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 532-536页

作者：常亚飞刘永刚李爱东陶冶王刚张冲李海蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株传代致弱株Hu N4-F30感染性克隆,本研究利用高保真DNA聚合酶,分6个片段进行病毒全基因组序列扩增,并通过点突变在其基因组10 808位引入Mlu I作为分子标记。通过重叠延伸PCR在5&#... 详细信息

为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株传代致弱株Hu N4-F30感染性克隆,本研究利用高保真DNA聚合酶,分6个片段进行病毒全基因组序列扩增,并通过点突变在其基因组10 808位引入Mlu I作为分子标记。通过重叠延伸PCR在5'端上游引入CMV启动子,3'端引入丁型肝炎病毒(HDV)核酶基因和牛生长素多聚腺苷酸化信号(BGH)。将各片段依次连接克隆于改造的p Belo BAC11载体中,构建含有全长HP-PRRSV致弱株c DNA感染性克隆p Belo BAC11-Hu N4-F30,并将全长质粒直接转染Marc-145细胞拯救出病毒。通过核酸鉴定与测序、分子标记鉴定、间接免疫荧光试验和动物致病性试验等进行鉴定。结果表明,拯救的病毒能够通过Mlu I酶切与亲本鉴别,拯救病毒的间接免疫荧光与亲本病毒一致,拯救病毒表现出低致病性。HP-PRRSV Hu N4-F30感染性克隆的构建与病毒的拯救,为进一步研究HP-PRRSV传代致弱机制奠定了基础。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4-F30株感染性克隆致病性

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多... 详细信息

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析。结果:四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度，物种多样性无显著差异（P＞0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门（Bacteroidetes)丰度占95％以上;乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属（Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属，不同时期丰度差异达显著水平（P＜0.05)。结论:四个生长阶段菌群组成多样，且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词：实验用鸡肠道菌群物种多样性品质评定健康监测安全性

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 249-251页

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只出现CHD1-Z。结论本文建立的方法可作为禽类性别的有效鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 244-248页

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件... 详细信息

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同。结论尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关。

关键词： miR-200b 马立克氏病(MD) 抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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我国部分省份猪群中流感病毒血清学抗体的调查

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 11-14页

作者：隋金钰杨大为杨焕良陈艳许榜丰尹航乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，本研究分别对2013年11～12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2198份以及2014年3～4月期间采自于广东和湖南两省的3654份猪血清样品进行了血凝抑制（HI）抗体的检测。选取欧亚类禽型... 详细信息

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况，本研究分别对2013年11～12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2198份以及2014年3～4月期间采自于广东和湖南两省的3654份猪血清样品进行了血凝抑制（HI）抗体的检测。选取欧亚类禽型猪H1N1（EAH1N1）、2009甲型H1N1（2009／H1N1）、H3N2亚型猪流感病毒（SIV）、H5N1禽流感病毒（AIV）、H9N2AIV及H7N9流感病毒制备的HI标准抗原作为检测抗原。结果显示，2013年我国猪群中EAH1N1、2009／H1N1、H3N2SIV、H5N1AⅣ、H9N2AIV及H7N9流感病毒平均抗体阳性率分别为49，73％、11．87％、1．71％、0、0、1．36％：2014年分别为48。52％、12．10％、1．04％、0、0、2．05％。检测结果表明2013年～2014年间我国猪群中H1N1亚型SIV感染比较普遍，H3N2、H9N2流感病毒抗体阳性率较低，未检测到H5N1、H7N9流感病毒抗体。

关键词：流感病毒血清学抗体猪血凝抑制试验

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