检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 116-119页

作者：王林柏孙久鹤郭东春曹培丽刘家森刘春国刘大飞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(***)流行情况,本研究以36株***为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌的荚膜血清型分为A... 详细信息

为了解国内部分地区不同动物多杀性巴氏杆菌(***)流行情况,本研究以36株***为研究对象,通过多重荚膜PCR、多位点序列分型(MLST)和脂多糖多重PCR(LPS-m PCR)对其荚膜型和基因型进行鉴定。采用多重荚膜PCR方法将36株细菌的荚膜血清型分为A、B和D 3种,其中禽源***主要以A为主;以LPS-m PCR方法将***分为L1、L2、L3和L6 4种LPS基因型,禽源***主要为L1型;通过MLST技术将***分为ST-129、ST-8、ST-58、ST-5、ST-13、ST-50和ST-122 7种ST型,禽源***主要为ST-129型。本研究为***的流行病学监测和基因多样性提供了技术支撑。

关键词：多杀性巴氏杆菌多位点序列分型脂多糖多重PCR LPS基因型

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稳定表达马TRIM5α蛋白的HEK293细胞系的建立及其抗病毒活性初步研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 294-297,311页

作者：王翠辉那雷苏朝姚秋成蔡伟刚王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为建立稳定表达马TRIM5α(eqTRIM5α)的HEK293细胞系,并检测马TRIM5α(eqTRIM5α)的抗病毒功能,本研究将eqTRIM5α克隆于慢病毒表达载体pLPCX中,构建重组质粒pLPCX-eqTRIM5α-HA,同时构建恒河猴的pLPCX-Rh TRIM5α-HA作为阳性对照。利用... 详细信息

为建立稳定表达马TRIM5α(eqTRIM5α)的HEK293细胞系,并检测马TRIM5α(eqTRIM5α)的抗病毒功能,本研究将eqTRIM5α克隆于慢病毒表达载体pLPCX中,构建重组质粒pLPCX-eqTRIM5α-HA,同时构建恒河猴的pLPCX-Rh TRIM5α-HA作为阳性对照。利用VSV-G包装慢病毒,感染HEK293细胞,并利用嘌呤霉素筛选、纯化,建立了稳定表达eqTRIM5α和Rh TRIM5α的HEK293细胞系。经western blot和流式细胞术鉴定,该细胞系传代至20代后,仍然能够检测到eqTRIM5α和RhTRIM5α的稳定表达。将该细胞系应用于抗马传染性贫血病毒(EIAV)活性研究中,结果显示eqTRIM5α同RhTRIM5α一样均能够抑制病毒复制,表明eqTRIM5α是一种对EIAV具有较强限制作用的宿主蛋白。该细胞系的建立为进一步评价和研究eqTRIM5α的抗病毒作用和机制奠定了基础。

关键词：马TRIM5α HEK293细胞系抗病毒作用马传染性贫血病毒

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携带BAC质粒DNA序列的重组伪狂犬病病毒变异株的构建和鉴定

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中国兽医科学 2016年第12期46卷 1575-1581页

作者：丛鑫夏水利向广韬杜明亮李丹丹刘艳周末仇华吉李影孙元吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

本研究旨在以当前流行的伪狂犬病病毒变异株(TJ株)为基础,构建携带红色荧光蛋白(RFP)标记细菌人工染色体质粒的重组伪狂犬病病毒(PRV)。通过同源重组和Cre/lox P特异性位点重组的方法构建了重组病毒r PRVTJ-del TK-BAC-RFP株。PCR鉴定... 详细信息

本研究旨在以当前流行的伪狂犬病病毒变异株(TJ株)为基础,构建携带红色荧光蛋白(RFP)标记细菌人工染色体质粒的重组伪狂犬病病毒(PRV)。通过同源重组和Cre/lox P特异性位点重组的方法构建了重组病毒r PRVTJ-del TK-BAC-RFP株。PCR鉴定和测序分析结果表明,在重组病毒r PRVTJ-del TK-BAC-RFP株的基因组中已插入RFP标记的BAC质粒DNA序列;动力学参数分析表明,重组病毒的生长特性与PRV TJ株相似,尽管复制能力稍有降低,但与亲本株相比并无显著性差异;电镜检测结果显示,重组病毒与亲本病毒PRV TJ株的病毒粒子极其相似,均有囊膜,核心约为80 nm,核衣壳清晰可见。这为进一步研究PRV的变异机制奠定了基础。

关键词：伪狂犬病病毒变异株TJ 细菌人工染色体

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母源抗体对腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 484-488页

作者：雷建林杜明亮孙元夏水利王异民向广韬胡永浩仇华吉甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期构建了具有标记特征的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,效力评价结果表明该嵌合疫苗的免疫原性与C株相当,并且能够完全提供对猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株的攻毒保护。为进一步确定该疫苗的免疫效力是否受其... 详细信息

本实验室前期构建了具有标记特征的腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,效力评价结果表明该嵌合疫苗的免疫原性与C株相当,并且能够完全提供对猪瘟病毒(CSFV)强毒石门株的攻毒保护。为进一步确定该疫苗的免疫效力是否受其母源抗体(MDA)的干扰及制定合理有效的免疫程序,本研究将rAdV-SFV-E2疫苗株免疫妊娠期的母猪后检测其抗体诱导水平,然后将该疫苗株免疫具有其母源抗体的30日龄新生仔猪及无母源抗体仔猪(n=4),攻毒后,监测所有仔猪的抗体水平、临床症状、病毒血症、病理学等。结果显示,有无母源抗体的仔猪均能够产生高水平的特异性E2抗体及抗CSFV的中和抗体,而且攻毒后未出现猪瘟特异性临床症状,包括发热、食欲减退、腹泻及死亡等;对照组仔猪均出现了明显的临床症状,其死亡率为100%。本研究证明rAdV-SFV-E2疫苗的免疫效力未受其母源抗体的显著干扰,免疫30日龄的仔猪后能够完全抵抗致死性CSFV强毒石门株的攻击。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗免疫效力母源抗体

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类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及特性分析

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中国兽医科学 2016年第4期46卷 491-495页

作者：杨大为隋金钰吴运谱许榜丰杨焕良陈艳乔传玲陈化兰东北农业大学黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为获得类禽型H1N1猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（McAb）,选取病毒A/swine/Zhejiang/245/2013（H1N1）,经增殖、纯化后作为免疫原,3次免疫BALB/c小鼠,取其脾与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,利用ELISA方法进行筛选,克... 详细信息

为获得类禽型H1N1猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（McAb）,选取病毒A/swine/Zhejiang/245/2013（H1N1）,经增殖、纯化后作为免疫原,3次免疫BALB/c小鼠,取其脾与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,利用ELISA方法进行筛选,克隆得到4株杂交瘤细胞株,分别命名为5H7、2H3、2G4、8D7。4株单克隆抗体的腹水ELISA效价为1×10^9以上,HI效价高于8 log2。Western-blot试验与间接免疫荧光试验结果表明,4株McAbs均可与病毒HA蛋白发生特异性的反应。本研究将为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及开展HA蛋白表位的研究奠定基础。

关键词：猪流感病毒单克隆抗体类禽型H1N1

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猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达、纯化及抗原性分析

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黑龙江畜牧兽医 2016年第3期 14-19页

作者：杨莹莹刘永刚郝立沙王刚涂亚斌佟杰田丽红蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040

为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型（PCV-2）重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化*** BL21（DE3）,在SDS-PAGE分析基础上,结合Image J和Graphpad ... 详细信息

为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型（PCV-2）重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-2 ORF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒p ET-30a-Cap,转化*** BL21（DE3）,在SDS-PAGE分析基础上,结合Image J和Graphpad prism 5.0软件的分析,对重组菌*** BL21（p ET-30a-Cap）表达条件进行了优化,诱导产物纯化后,经SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定其抗原性。结果表明：重组Cap蛋白的最佳表达条件是当菌体浓度（OD600值）达到1.0~1.5时,加入终浓度为0.2 mmol/L的IPTG,37℃恒温摇床175 r/min振荡培养5 h;纯化获得高纯度的重组Cap蛋白,且该蛋白具有良好的反应原性。说明表达的重组Cap蛋白具有良好的抗原性,能为检测PCV-2抗体的间接ELISA试剂盒的研制提供诊断抗原。

关键词： PCV-2 ORF2 Cap蛋白大肠杆菌优化表达 ImageJ软件抗原性

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玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展

玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：刁晨曦张圆圆周妍陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队牡丹江师范学院生命科学与技术学院东北农业大学生命科学学院

玉米赤霉烯酮是由镰刀菌产生的类雌激素样真菌毒素。本文结合了国内外的最新研究成果,对玉米赤霉烯酮的检测方法及研究进展进行了综述,为真菌毒素如玉米赤霉烯酮的检测方法的探索起到重要作用。

关键词：玉米赤霉烯酮检测方法研究进展

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同时接种伪狂犬病活疫苗Bartha-K61株对嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2免疫效力的影响

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中国预防兽医学报 2016年第8期38卷 642-645页

作者：夏水利孙元雷建林杜明亮丛鑫杜恩岐仇华吉西北农林科技大学动物医学学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期研究中构建了一种新型的猪瘟标记疫苗—腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗(rAdV-SFV-E2),并证实该疫苗具有与C株猪瘟疫苗相同的免疫效力。为评价该疫苗与伪狂犬病疫苗(Bartha-K61)联合免疫是否存在相互干扰现象,本研究... 详细信息

本实验室前期研究中构建了一种新型的猪瘟标记疫苗—腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗(rAdV-SFV-E2),并证实该疫苗具有与C株猪瘟疫苗相同的免疫效力。为评价该疫苗与伪狂犬病疫苗(Bartha-K61)联合免疫是否存在相互干扰现象,本研究将这两种疫苗联合免疫健康仔猪(n=5),同时设立单独免疫对照和阴性对照,免疫后利用CSFV强毒石门株进行攻击,并通过抗体反应、临床症状、病毒血症、病理学及组织病理学变化等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果显示,rAdV-SFV-E2和Bartha-K61联合免疫后与单独免疫rAdV-SFV-E2均能够对致死性CSFV强毒的攻击提供完全保护(5/5存活),表现为无猪瘟特异性临床症状、无病毒血症、无病理变化和组织病理学变化。该研究证实,rAdV-SFV-E2和伪狂犬病疫苗Bartha-K61同时免疫对rAdV-SFV-E2的免疫效果无干扰现象。

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗伪狂犬病疫苗联合免疫评价

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表达新城疫病毒F基因重组鸭肠炎病毒的构建

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 92-95页

作者：张苗苗李慧昕韩宗玺刘怀然王玉龙邵昱昊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-E... 详细信息

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-EGFP基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞。经过反向蚀斑筛选,获得表达NDV F基因的r DEV-US10-F。对重组区域US10基因测序结果表明,F基因正确插入至US10基因编码区内。将重组病毒传至15代,F基因仍能够稳定表达,表明重组病毒具有稳定的遗传特性,并且与亲本病毒株具有相似的生长曲线。本研究为研发NDV-DEV活载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 F基因鸭肠炎病毒重组病毒

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湖南洞庭湖区12株H9N2亚型AIV全基因序列的进化分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年第3期44卷 1-10页

作者：黄建龙谭丹王昌建张朝阳何世成朱春霞汪洪冰邓国华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制... 详细信息

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。【结果】12株H9N2亚型禽流感毒株HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性病毒。12株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因进化比较同步,均处于DK/HK/Y280/97分支,而6个内部基因(M、PB2、PB1、PA、NA、NS)与高致病性禽流感H5亚型毒株呈现不同程度重组现象,且与H7N9亚型毒株基因的核苷酸同源性很高,很有可能为其提供内部基因。【结论】湖南省洞庭湖地区H9亚型禽流感病毒的遗传演化较为复杂,存在广泛的基因重组现象。

关键词： H9N2亚型禽流感遗传进化洞庭湖区湖南省

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