检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 448-452页

作者：祖述龙宋继军邵钰刘任强温志远周微微王雪莲葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV... 详细信息

莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV GP蛋白嵌合型VSV(r VSV△G*GFP-REBOV-GP),并对其生物学特性进行分析,评估其作为REBOV活疫苗的安全性和有效性。激光共聚焦和western blot试验显示REBOV GP蛋白在嵌合病毒中获得正确表达;病毒生长动力学结果显示,r VSV△G*GFP-REBOV-GP与亲本株具有不同的生长特性;将r VSV△G*GFP-REBOV-GP接种小鼠,未引起小鼠发病,体重增长趋势与对照组一致,表明嵌合病毒具有良好的安全性;中和试验结果表明该嵌合病毒能够诱导小鼠产生针对REBOV GP的高滴度中和抗体。本研究制备的r VSV△G*GFP-REBOV-GP为进一步的动物免疫实验奠定了基础。

关键词：水泡性口炎病毒莱斯顿型埃博拉病毒 GP蛋白

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Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 226-229页

作者：梁伟峰周国辉刘文铭李超斯刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验... 详细信息

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验特异性鉴定,2E10为FMDV型特异型MAb。其抗体亚类为Ig G1/资,杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1颐256和1颐104,相对亲和力常数为2.5 mol/L。在此基础上,以本实验室前期制备的MAb 2D8为包被抗体,以HRP标记的MAb 2E10为检测抗体建立了检测Asia1型FMDV抗原的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法针对FMDV细胞毒的最低检出量为103TCID50,对O型FMDV、A型FMDV、牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒及牛传染性鼻气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究建立的Asia1型FMDV DAS-ELISA方法为Asia1型FMD病原学诊断试剂盒的研发奠定了基础。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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不同接种途径对禽腺病毒在鸡胚中增殖的影响

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 275-278页

作者：邱丽叶李慧昕王娟刘胜旺东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为评价不同接种途径对禽腺病毒(FAdV)在鸡胚中的增殖能力及病毒的主要分布组织,本研究将FAdV分别采用卵黄囊、尿囊膜和尿囊腔3种途径接种SPF鸡胚,利用荧光定量PCR方法对FAdV在鸡胚组织中的病毒载量进行测定。结果显示,FAdV在鸡胚各组织... 详细信息

为评价不同接种途径对禽腺病毒(FAdV)在鸡胚中的增殖能力及病毒的主要分布组织,本研究将FAdV分别采用卵黄囊、尿囊膜和尿囊腔3种途径接种SPF鸡胚,利用荧光定量PCR方法对FAdV在鸡胚组织中的病毒载量进行测定。结果显示,FAdV在鸡胚各组织中均有不同程度增殖。FAdV经卵黄囊途径和尿囊腔途径接种SPF鸡胚,病毒主要嗜性组织为肝脏,经尿囊膜途径接种FAdV,病毒主要嗜性组织为尿囊膜。经卵黄囊途径接种,FAdV在肝脏、尿囊膜和尿囊液中的病毒载量分别为1.38×108拷贝/mg、2.78×107拷贝/mg及1.32×104拷贝/mg。经尿囊膜途径接种,FAdV在肝脏、尿囊膜和尿囊液中的病毒载量分别为1.83×104拷贝/mg、1.08×105拷贝/mg及4.53×104拷贝/mg。经尿囊腔途径接种,FAdV在肝脏、尿囊膜和尿囊液中的病毒载量分别为1.65×105拷贝/mg、7.08×104拷贝/mg及1.26×104拷贝/mg。以上结果表明,不同接种途径对FAdV在SPF鸡胚中的增殖影响较大,其中经卵黄囊途径接种SPF鸡胚,FAdV增殖能力最强。

关键词：禽腺病毒鸡胚接种途径组织分布病毒增殖

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蛋白激酶R的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

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甘肃农业大学学报 2016年第1期51卷 7-12页

作者：张涛罗维玉姜水涛朱鹏阳李呈军陈化兰孙晓林姜丽甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21... 详细信息

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度0.5mmol/L IPTG诱导表达GST-PKR融合蛋白,SDS-PAGE分析表明融合蛋白获得稳定表达.表达产物经Glutathione-sepharose 4B亲和层析初步纯化后,用凝血酶切除GST标签,而后经离子交换层析及分子筛在AKTA Explorer上进一步纯化,得到高纯度无标签的PKR蛋白.以纯化后的PKR蛋白为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,斑点杂交试验检测其效价达到1∶50 000以上,Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明制备的多抗与PKR蛋白的反应具有高度特异性.【结论】PKR蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多克隆抗体可用于PKR蛋白的检测,从而为研究PKR在病毒感染过程中的作用提供了重要的工具.

关键词： PKR 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

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猪肺炎支原体168株感染诱导差异表达蛋白的筛选及鉴定

猪肺炎支原体168株感染诱导差异表达蛋白的筛选及鉴定

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江苏省畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：王宏恩邵国青冯志新熊祺琰于岩飞张映辛九庆刘茂军江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起猪支原体肺炎Mycoplasma pneumoniae of Swine,MPS)的主要致病菌.毒力相关因子在支原体的感染与致病中扮演着十分重要的角色,但目前对毒力因子知之甚少.本研究通过对感染前后猪肺炎支... 详细信息

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是引起猪支原体肺炎Mycoplasma pneumoniae of Swine,MPS)的主要致病菌.毒力相关因子在支原体的感染与致病中扮演着十分重要的角色,但目前对毒力因子知之甚少.本研究通过对感染前后猪肺炎支原体168 强毒株进行差异蛋白质组学分析,筛选出一些可能的毒力因子.试验首先用猪肺炎支原体168 强毒株体外感染猪气管上皮细胞(STEC),根据上清支原体含量来筛选出适宜的感染时间.结果显示,与其他感染条件相比,感染剂量为1×108,感染时间为48h 时上清中支原体含量最多.根据筛选出的感染剂量及感染时间进一步感染,利用双向电泳技术(Two-dimensionalElectrophoresis,2-DE)对感染前后的全菌蛋白进行分离,PDQuest V8.0 软件对扫描所得图像进行分析(T 检验法,差异＞1.5 倍),强毒株感染组与对照组蛋白点进行比对分析后,发现了11 个差异蛋白,经过质谱鉴定7 个为支原体蛋白,其中3 个只出现在感染组中,4 个在感染后表达上调.从这些差异蛋白点中选择了甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)进行了Western-blot 验证,结果显示,GAPDH 蛋白在强毒株感染后表达上调,与双向电泳结果一致.

关键词：猪肺炎支原体168株双向电泳差异蛋白 Western-blot

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我国牛传染性鼻气管炎研究现状及防控展望

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中国奶牛 2016年第6期 39-43页

作者：薛飞朱远茂马磊中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

牛传染性鼻气管炎（IBR）,或称为传染性脓疱性外阴阴道炎（IPV）,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的牛的一种急性接触性传染病,在临床上表现多种病型,如上呼吸道黏膜炎症、结膜炎、乳房炎、脓疱性外阴阴道炎或龟头包皮炎、幼牛脑... 详细信息

牛传染性鼻气管炎（IBR）,或称为传染性脓疱性外阴阴道炎（IPV）,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的牛的一种急性接触性传染病,在临床上表现多种病型,如上呼吸道黏膜炎症、结膜炎、乳房炎、脓疱性外阴阴道炎或龟头包皮炎、幼牛脑膜脑炎和流产等,可以认为是由同一种病原引起多种病症的疫病。世界动物卫生组织将IBR列为B类动物疫病。IBR于1953年在美国加利福尼亚州首次被报道,其后引起了全球重视。

关键词：外阴阴道炎牛疱疹病毒龟头包皮炎脑膜脑炎乳房炎接触性传染病上呼吸道黏膜病型基因缺失疫苗病毒中和试验

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我国牛病毒性腹泻/黏膜病研究进展及防控策略

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中国奶牛 2016年第11期 25-29页

作者：薛飞朱远茂马磊中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本文从病毒分离及基因分型、血清流行病学、诊断方法、免疫研究四个方面介绍了我国牛病毒性腹泻黏膜病的研究进展情况,并提出了防控策略。

关键词：牛病毒腹泻/黏膜病研究进展防控策略

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传染性法氏囊病病毒感染鸡脾脏病理变化的研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 279-283页

作者：孙德君丁国杰藏玉婷宋扬何希君周建华李继昌东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡的临床诊断主要检测法氏囊组织的病理变化,包括分析感染组和对照组的法氏囊重量与体重比值(囊重指数)。本研究采用IBDV强毒株BC6-85感染22日龄SPF鸡3 d后,对其免疫器官法氏囊、脾脏及胸腺的重量和组织病... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡的临床诊断主要检测法氏囊组织的病理变化,包括分析感染组和对照组的法氏囊重量与体重比值(囊重指数)。本研究采用IBDV强毒株BC6-85感染22日龄SPF鸡3 d后,对其免疫器官法氏囊、脾脏及胸腺的重量和组织病理变化等进行检测。研究显示,与健康对照组相比,感染组的法氏囊虽然呈现明显病理变化,但平均囊重指数无显著减少。此外,鸡感染IBDV后脾脏也发生了明显的外观和组织学病理变化,特别是其重量与体重的比值增加极其显著(p<0.01),并且感染组内各样本的脾脏重量与对应体重显著相关(r=0.695,p=0.026)。IBDV感染鸡的胸腺未发现明显病理改变。以上虽然仅为IBDV特定病毒株的结果,且样本数量有限,但提示作为重要的B淋巴细胞和单核/巨噬细胞器官,脾脏在IBDV感染鸡的重量与体重比,(脾重指数,本研究为1.66)可以考虑成为临床和现地快速诊断法氏囊病的参考指标之一。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒法氏囊脾脏囊重指数

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1型和4型马疱疹病毒VHS蛋白在HeLa细胞中的表达与定位

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黑龙江畜牧兽医 2016年第1期 145-147,261页

作者：曲娟娟胡晓亮顾海东张春苗冉多良相文华东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 新疆农业大学动物科技学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-b... 详细信息

为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-blot验证该蛋白在HeLa细胞中的表达情况,并以激光共聚焦显微成像技术确定VHS蛋白在真核细胞中的分布及亚细胞定位。结果表明:重组质粒p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4在HeLa细胞中获得了表达,且主要聚集于细胞浆。说明VHS蛋白能够在外源真核细胞HeLa中表达,蛋白主要位于HeLa的细胞浆中。

关键词：马疱疹病毒 HeLa细胞 VHS蛋白表达定位免疫印迹

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猪戊型肝炎病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 322-325页

作者：闫蕾涂亚斌李海张交儿王刚刘永刚陈志宝蔡雪辉黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为建立猪戊型肝炎病毒(SHEV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针,并对PCR反应条件进行优化。结果表明,该方法扩增的相关系数可达0.999,在102拷贝/μL^109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环... 详细信息

为建立猪戊型肝炎病毒(SHEV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针,并对PCR反应条件进行优化。结果表明,该方法扩增的相关系数可达0.999,在102拷贝/μL^109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病毒的RNA或DNA进行检测,结果均为阴性。该方法可以检出最低拷贝数为10拷贝/μL。重复性试验结果表明该方法的批内和批间变异系数均小于3.0%。本研究使用该荧光定量PCR检测方法对黑龙江省临床收集的131份样品(肝脏45份、粪便86份)进行检测,总阳性率为11.45%,其中肝脏阳性率为22.22%,粪便阳性率为5.81%。该方法的建立为SHEV的快速检出及绝对定量奠定了良好的基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR TaqMan探针应用

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