检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 199-202页

作者：李华芳曹俊刘松艳陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细... 详细信息

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细胞)互作,通过激光共聚焦显微镜观察到蛋白对细胞的特异性粘附。为进一步验证该试验结果,将rv0394c基因克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒p MV262中,将重组质粒电转化于非致病性的耻垢分枝杆菌中进行表达。构建的重组菌与A549细胞进行互作,结果表明重组菌可以粘附于A549细胞表面,而且这种粘附能够被RV0394c重组蛋白所阻断,这些结果表明RV0394c蛋白具有粘附细胞的能力,属于该菌的粘附蛋白之一。RV0394c蛋白粘附特性的鉴定为进一步研究该蛋白在致病性中的作用提供了实验依据。

关键词：结核分枝杆菌 rv0394c基因 pMV262 耻垢分枝杆菌粘附

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异...

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150009 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150009 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

目的我们前期在MDV超强毒株Md5攻毒实验和高通量测序分析发现miR-200b-3p和miR-200b-5p均仅在易感鸡(B19单倍型)感染后20dpi的法氏囊组织显著上调表达，本实验将利用荧光定量PCR技术进一步验证高通量测序结果并分析miR-200b-3p和miR-20... 详细信息

目的我们前期在MDV超强毒株Md5攻毒实验和高通量测序分析发现miR-200b-3p和miR-200b-5p均仅在易感鸡(B19单倍型)感染后20dpi的法氏囊组织显著上调表达，本实验将利用荧光定量PCR技术进一步验证高通量测序结果并分析miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况，为迸一步探讨它们可能与MD抗性/易感性相关的分子机制奠定基础。方法通过经过优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件，进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致，但差异显著性分析结果不完全相同，而来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p在MDV感染后表达相似。结论两种检测技术在检测miRNA表达上下调情况具有一致性，但差异显著性分析结果不完全一致，然而高通量测序和荧光定量结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关，但具体机制尚需进一步深入研究。

关键词： miR-200b-3p miR-200b-5p 马立克氏病抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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miR-146b-5p在B19与B21单倍型SPF鸡感染MDV后不同免疫器官表达规律分析

miR-146b-5p在B19与B21单倍型SPF鸡感染MDV后不同免疫器官表达规...

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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：易诚廉传江王瑞琪韩凌霞杨春文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

目的:比较分析miR-146b-5p 在马立克氏病(MD)易感(B19单倍型)与抗性(B21单倍型)SPF鸡感染马立克氏病病毒过程中不同免疫器官的差异表达情况,为进一步探讨其可能与MD 抗性/易感性相关的分子机制奠定基础. 方法:在MDV超强毒株Md5攻毒... 详细信息

目的:比较分析miR-146b-5p 在马立克氏病(MD)易感(B19单倍型)与抗性(B21单倍型)SPF鸡感染马立克氏病病毒过程中不同免疫器官的差异表达情况,为进一步探讨其可能与MD 抗性/易感性相关的分子机制奠定基础. 方法:在MDV超强毒株Md5攻毒实验和前期高通量测序分析发现miR-146b-5p 在法氏囊组织高表达且显著差异表达的基础上,进一步利用实时荧光定量PCR技术检测miR-146b-5p在B19和B21单倍型鸡感染后5dpi、10dpi 和21dpi 的法氏囊、胸腺和脾脏组织(实验组)以及相应未感染组(对照组)的表达变化情况. 结果:miR-146b-5p在5dpi、10dpi和21dpi实验组和对照组的表达量明显不同,在不同免疫器官中miR-146b-5p 的表达量存在组织特异性,不同鸡系之间在感染前后也存在一定的差异. 结论:miR-146b-5p可能与MD抗性/易感性相关,但具体机制尚需进一步深入研究.

关键词：鸡马立克氏病病毒感染免疫器官微小核糖核酸146b-5p 基因表达

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新疆地区2011～2012年马病毒性动脉炎的血清学调查

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新疆畜牧业 2016年第1期31卷 37-38,33页

作者：阿依吐拉.肉孜赵世华盛卓君美热木古丽居马别克王文阿孜古丽相文华新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830063 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 奇台县动物疾病控制中心新疆奇台831800

本实验采用法国进口马病毒性动脉炎间接ELISA诊断试剂盒对来自新疆4个地区的435份马血清样品进行检测,结果显示,有2份血清检测为阳性,阳性率为1.26%。其中伊犁种马场、昭苏种马场和哈密伊吾县送检血清均为阴性,巴州和静县检出2份阳性血... 详细信息

本实验采用法国进口马病毒性动脉炎间接ELISA诊断试剂盒对来自新疆4个地区的435份马血清样品进行检测,结果显示,有2份血清检测为阳性,阳性率为1.26%。其中伊犁种马场、昭苏种马场和哈密伊吾县送检血清均为阴性,巴州和静县检出2份阳性血清。目前该病在我国还没有分离到病毒的相关报道,本次流行病学调查研究,对于该病在我国新疆地区的流行现状具有重要的指导意义。

关键词：新疆马病毒性动脉炎血清学调查

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传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选

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中国畜牧兽医 2015年第2期42卷 317-323页

作者：王念陈玉明张礼洲高立卢珍高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白... 详细信息

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白与宿主细胞的相互作用,本研究将IBDVVP4基因克隆入pGBKT7,构建诱饵载体pGBGtVP4,自激活试验证明其无自激活活性,对酵母细胞没有毒性。运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)文库中筛选VP4的互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得22个候选互作宿主细胞蛋白,为深入研究IBDV VP4与宿主互作的效应和机制奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP4 酵母双杂交诱饵载体互作蛋白

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实验用SPF大白猪SLA单倍型的初步鉴定

实验用SPF大白猪SLA单倍型的初步鉴定

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：高彩霞贺希文权金强江新杰李昌文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室甘肃农业大学动物科学技术学院牡丹江师范学院生命科学与技术学院

为了初步鉴定实验用SPF大白猪SLA单倍型特征,本研究采集9头SPF大白猪种猪耳组织,提取DNA,采用PCR-SSP低分辨分型方法对其进行扩增,初步分析了SLA单倍型特征。结果表明,从9头SPF大白猪中共鉴定出6种SLA单倍型,包括6个Ⅰ类单倍型和5个Ⅱ... 详细信息

为了初步鉴定实验用SPF大白猪SLA单倍型特征,本研究采集9头SPF大白猪种猪耳组织,提取DNA,采用PCR-SSP低分辨分型方法对其进行扩增,初步分析了SLA单倍型特征。结果表明,从9头SPF大白猪中共鉴定出6种SLA单倍型,包括6个Ⅰ类单倍型和5个Ⅱ类单倍型。其中,Hp-35.23和Hp-63.27单倍型存在SLA-1双拷贝基因,并发现一个重组单倍型Hp-4.15。已知SLA遗传背景大白猪的培育可为各种科研机构和生物制药企业提供标准的实验动物素材,同时为猪病的研究和疫苗的制备提供良好的实验动物材料。

关键词： SPF 大白猪 SLA 单倍型

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H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法建立

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中国农业科学 2015年第15期48卷 3050-3055页

作者：王云鹤包红梅孙佳善李雁冰徐晓龙王子龙施建忠曾显营王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室河北农业大学动物科技学院

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根... 详细信息

【目的】2013年3月,中国国家卫生和计划生育委员会宣布在上海、安徽地区发现了人感染H7N9亚型流感病毒事件,由于这种新型重组H7N9流感病毒未曾有过感染人或者动物的报道,因此出现了一系列亟待解决的问题,引起了全世界范围的广泛关注。根据H7N9亚型禽流感病毒HA和NA核苷酸序列,设计并合成靶基因为HA和NA的2对引物,建立快速检测H7N9亚型禽流感病毒的一步法RT-PCR检测方法。【方法】根据测序结果,用DNAStar生物软件进行同源性分析比较,选出H7和N9基因中高度保守且特异的核苷酸区域,用oligo6.0软件设计针对H7和N9基因的引物。用Trizol LS提取RNA,采用一步法Access RT-PCR扩增反应液,建立了一步法检测H7N9亚型禽流感病毒RT-PCR方法。以H7N9亚型流感病毒为阳性对照,其他亚型流感病毒以及新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等其他禽病病原作为阴性对照,按所建立的反应体系和反应程序进行RT-PCR反应,验证所建立方法的特异性。对病毒含量为106.5 EID50·m L-1的H7N9亚型禽流感病毒尿囊液依次进行10倍倍比稀释,提取RNA用RT-PCR方法检测,评价其敏感性。另外,采取双盲试验用荧光定量RT-PCR对该方法进行了比对验证。【结果】用H7亚型特异性引物检测H1—H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原,除H7亚型流感病毒外,其他样品均为阴性;用N9亚型特异性引物检测N1—N9亚型禽流感病毒和其他禽病病原,仅当前流行的H7N9亚型AIV样品有特异性目的条带,与其他N1—N9亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他禽病病原均无交叉反应。通过对H7N9亚型禽流感病毒尿囊液进行10倍倍比稀释检测,证实该方法最低检出量为1.4×102.5 EID50·m L-1,并可以从阳性棉拭子浸出液中扩增出目的基因片段。【结论】该RT-PCR方法具有特异性强和准确率高的特点,可以作为H7N9亚型AIV核酸检测的一种有效候选方法。

关键词：禽流感病毒 H7N9亚型 RT-PCR

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重组鸡β-防御素12蛋白的原核表达及其生物学特性分析

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东北农业大学学报 2015年第10期 49-56页

作者：马得莹徐杨李妍妍徐倩倩张婷婷韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室，哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室哈尔滨150001

为探讨鸡β-防御素12（AvBD12）的生物学特性，试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因，其cDNA大小为198 bp，编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上，进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳... 详细信息

为探讨鸡β-防御素12（AvBD12）的生物学特性，试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因，其cDNA大小为198 bp，编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上，进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明，重组鸡AvBD12融合蛋白分子质量约为14 ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定，结果显示，纯化后的重组鸡AvBD12融合蛋白对金黄色葡萄球菌和兔波氏杆菌有较高抗菌活性，对猪霍乱沙门氏菌和乳酸菌的抗菌活性较弱。高盐浓度对其抗菌活性有显著影响。该重组蛋白对鸡红细胞无显著溶血活性。荧光定量PCR结果表明，AvBD12基因在所测定的15个鸡组织器官中均有表达。

关键词：鸡β-防御素12 重组蛋白抗菌活性组织分布

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猪圆环病毒Ⅱ型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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黑龙江畜牧兽医 2015年第6期 168-171页

作者：郝立沙张璐佟杰于颖杨莹莹张武超涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心哈尔滨150001

为了快速准确检测猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）并对病毒拷贝数进行定量,试验根据Gen Bank中PCV-2保守序列（登录号为FJ644559.1）设计1对特异性引物和Taq Man探针,制备标准品,建立PCV-2的荧光定量检测方法,并对临床样品进行检测。结果表明... 详细信息

为了快速准确检测猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）并对病毒拷贝数进行定量,试验根据Gen Bank中PCV-2保守序列（登录号为FJ644559.1）设计1对特异性引物和Taq Man探针,制备标准品,建立PCV-2的荧光定量检测方法,并对临床样品进行检测。结果表明：该方法在1×10^1~1×10^8拷贝/μL的模板范围内具有良好的线性关系,相关系数可达0.999;敏感性是常规PCR方法的100倍;对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）均为阴性,没有交叉反应;批内、批间重复试验变异系数均小于2.50%;在临床检测中,比常规PCR方法检测PCV-2的阳性检出率高出38%。说明试验成功建立了PCV-2 Taq Man荧光定量PCR检测方法,可用于临床检测PCV-2感染及对其拷贝数进行定量。

关键词：猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2) TaqMan荧光定量PCR 应用探针标准品拷贝数

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一株H10N7亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2015年第1期37卷 6-9页

作者：王德丽慈彦鹏崔艳芳樊兆斌刘丽玲田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

2013年,从秦皇岛野鸟林鹬体内分离到一株H10N7亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/Wood Sandpiper/Qinhuangdao/660-662/2013(H10N7)[简称WSP/QHD/660-662/2013(H10N7)]。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其进行致病性研究。基因组序列分析表明:该病毒的HA蛋白裂解位点为334PELMQGRGL343,属于低致病性AIV的分子特征,其HA基因与A/Duck/Hunan/S11205/2012(H10N3)的相似性达到97.90%,NA基因与A/Domestic Duck/Republic of Georgia/1/2010(H10N7)的相似性达到97.46%,内部基因与H9N2等多亚型AIV的相应基因节段具有较高的相似性,推测该分离株可能为一株多亚型流感病毒的重组株。对动物致病性试验结果显示:该病毒可以感染哺乳动物模型BALB/c小鼠,并且仅能够在鼠的肺脏和鼻甲骨粘膜上皮细胞中复制,表明该病毒分离株对小鼠也呈现低致病性。

关键词：禽流感病毒 H10N7 进化分析致病性

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