检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2015年第6期36卷 134-137页

作者：吴少莲韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,... 详细信息

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,在NKC区为CD69和CD94/NKG2,在MHC区为相邻的B-NK和B-Lec基因。B-NK是目前唯一已证明表达于NK细胞上的凝集素样受体,其配体尚不清楚,但是已经证明B-NK能够和活化的细胞上的配体结合。论文主要讨论CD69、CD94/NKG、B-NK和BLec 4个基因的系统发育比较和蛋白质结构的研究进展。

关键词：鸡 NK细胞 C型凝集素样受体

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重组鸡β-防御素2蛋白的表达与生物学活性鉴定

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东北农业大学学报 2015年第8期46卷 56-60,108页

作者：马得莹张婷婷徐杨高梦莹王秋玲徐倩倩韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tri... 详细信息

为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明,His-Av BD2重组蛋白分子质量约12 ku,与预期一致。将该重组蛋白纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗肠炎沙门氏菌、四联球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等抑菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响及其溶血活性。结果显示,Av BD2重组蛋白对所测定的4株细菌有显著抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性。该重组蛋白溶血活性极低。

关键词：鸡 AvBD2 重组蛋白抗菌活性

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猪脑心肌炎病毒HB10株cDNA感染性克隆的构建

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中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 665-668页

作者：于会彬黄丽张元峰李江南蔡雪辉崔尚金翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将... 详细信息

为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞进行病毒拯救。结果显示,转染细胞36 h后,出现典型的细胞病变。拯救病毒rEMCV-HB10全基因组经测序鉴定显示,与亲本病毒开放阅读框比较,其仅在1D基因出现两个核苷酸突变:即A37G(R13K)和G187C(M63I),该突变可以作为区别亲本病毒的标志。间接免疫荧光和生长曲线试验结果显示,这两个突变并不影响VP1蛋白的表达及病毒拯救,并且拯救病毒与亲本病毒具有相似的生长特性。本研究构建了感染性EMCV-HB10 cDNA克隆,为深入研究EMCV的致病分子机理提供了有效的反向遗传操作平台。

关键词：猪脑心肌炎病毒 cDNA感染性克隆转录转染病毒拯救

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猪伪狂犬病病毒HLJ8株的分离与鉴定

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中国兽医科学 2015年第1期45卷 20-24页

作者：姜成刚赵款叶超王淑杰郭金潮常晓博刘永刚田志军安同庆蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

2013年黑龙江省某猪场发生仔猪死亡并且伴有神经症状,采集死亡猪脑组织,经PCR检测、病毒电镜观察,确诊为伪狂犬病病毒(PRV)感染,遂将该毒株命名为HLJ8。进一步对病毒gE基因的序列分析表明,该毒株与2012年的中国分离株在同一个相对独立... 详细信息

2013年黑龙江省某猪场发生仔猪死亡并且伴有神经症状,采集死亡猪脑组织,经PCR检测、病毒电镜观察,确诊为伪狂犬病病毒(PRV)感染,遂将该毒株命名为HLJ8。进一步对病毒gE基因的序列分析表明,该毒株与2012年的中国分离株在同一个相对独立的分支中,氨基酸序列的同源性在94%~100%之间;与2011年之前分离的毒株的亲缘关系较远。小鼠毒力试验结果表明,高剂量(1×103 PFU/mL)的HLJ8株可以引起小鼠死亡以及皮肤瘙痒等典型的PRV感染症状,但其毒力略低于经典强毒株PRV SC株。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定致病性

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加系SPF大白猪和长白猪群体遗传学分析

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中国实验动物学报 2015年第6期23卷 551-556页

作者：贺希文高彩霞姜骞权金强蔡原曲连东甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白... 详细信息

目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5271和0.5877;长白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5652和0.6066。由于S0155、S0143、S0178、Sw857和Sw936位点内等位基因大小和含量差异显著(P<0.01)可作为大白猪和长白猪品种鉴定的候选位点。F-统计和迁移率分析结果表明,群体内的分化较小,遗传结构稳定。结论引进加系SPF纯种大白猪和长白猪的遗传结构与国内部分纯种大白猪和长白猪相比更为稳定,可作为实验动物模型应用于动物医学和科学研究。

关键词： SPF猪微卫星标记实验动物遗传多样性

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2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和NSP2基因遗传变异分析

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中国兽药杂志 2015年第8期49卷 1-6页

作者：常晓博叶超赵款姜成刚王淑杰蔡雪辉张辉安同庆吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了解2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异情况,研究对东北地区3个省份29个地区采集的123份样品进行了检测,并对20份阳性样品的GP5和部分NSP2基因进行了RT-PCR扩增、测序、遗传进化及序列比对分析。结... 详细信息

为了解2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异情况,研究对东北地区3个省份29个地区采集的123份样品进行了检测,并对20份阳性样品的GP5和部分NSP2基因进行了RT-PCR扩增、测序、遗传进化及序列比对分析。结果表明：我国东北地区PRRSV阳性率为16%,与国内外已发表的10株PRRSV参考株相比,GP5基因的核苷酸同源性为84.4%-100%。GP5氨基酸序列分析表明,大多数毒株在氨基酸高变区、中和表位和诱导表位发生了变异,主要变异为：C24→Y24,F25→L25,V27→A27,L28→I28,N34→G34/S34/D34。LN283株GP5和NSP2基因遗传进化树的不同结果表明,LN283株可能涉及PRRSV基因重组。HLJ13株NSP2基因PCR扩增产物有2条相差90 bp的目的条带,且NSP2基因遗传进化树显示两条序列分别属于CH-1a亚群和HuN4亚群,推断HLJ13株可能为经典和高致病性混合感染株。GP5和NSP2遗传进化及氨基酸序列分析结果表明,所有病毒株均属于北美洲型,且以HP-PRRSV为主,经典株与变异株共存。本研究结果可为我国东北地区PRRSV遗传进化研究及疫病防控提供参考。

关键词： PRRSV GP5 NSP2 遗传变异

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犬副流感病毒HN基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 615-618页

作者：宋彩玲齐宾宾吕让陈小微曲连东刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立检测犬副流感病毒(CPIV)抗体的方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达CPIV的HN蛋白,以其为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和血清最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了CPIV血清抗体的间接ELISA检测方法。该方法仅与CPIV阳... 详细信息

为建立检测犬副流感病毒(CPIV)抗体的方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达CPIV的HN蛋白,以其为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和血清最佳工作浓度,对各种反应条件进行优化,建立了CPIV血清抗体的间接ELISA检测方法。该方法仅与CPIV阳性血清发生特异性反应,与犬细小病毒(CPV)和犬腺病毒(CAV)的阳性血清无交叉反应;批内和批间变异系数小于10%。利用建立的ELISA方法与血凝抑制试验分别对48份送检犬血清样品进行检测,符合率为92%。本研究为建立快速、准确、简便的犬副流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：犬副流感病毒 HN蛋白间接ELISA

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利用假病毒技术筛选H5N1亚型禽流感病毒中和活性单克隆抗体

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中国预防兽医学报 2015年第7期37卷 545-548页

作者：张卓刘明郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒。利用该假病... 详细信息

为筛选H5N1禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)特异性中和抗体,本研究构建了表达HA蛋白的重组质粒,利用该重组质粒及缺失表达人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)囊膜蛋白基因的骨架质粒,构建了表面整合有H5亚型AIV HA蛋白的HIV假病毒。利用该假病毒系统,筛选得到一株具有中和活性的单克隆抗体(MAb)。经测定,该MAb与纯化的全病毒具有较好的反应性,其对HIV-H5HA假病毒的中和效价为64。中和试验表明该MAb能够有效阻断野生型病毒对鸡胚的感染。本研究结果为开发H5N1 AIV的被动免疫治疗方法奠定了基础,同时对亚单位疫苗的研制也具有一定的意义。

关键词： H5N1禽流感病毒假病毒中和抗体

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伪狂犬病毒人工感染小鼠模型的建立

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中国预防兽医学报 2015年第10期37卷 742-745页

作者：臧素芳黄嘉妮胡守萍张卓张交儿祝瑶何希君中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立伪狂犬病毒（PRV）人工感染小鼠的模型，本研究采用PRV强毒株接种猪、羊及小鼠，疫苗株接种小鼠，应用组织病理技术观察PRV人工感染不同动物导致的组织病变。以1×10^2～4．5×10^4TCID50不同梯度剂量PRv强毒株通过滴鼻... 详细信息

为建立伪狂犬病毒（PRV）人工感染小鼠的模型，本研究采用PRV强毒株接种猪、羊及小鼠，疫苗株接种小鼠，应用组织病理技术观察PRV人工感染不同动物导致的组织病变。以1×10^2～4．5×10^4TCID50不同梯度剂量PRv强毒株通过滴鼻或皮下接种途径人工感染小鼠，6×10^4～2．7×10^5TCID50不同剂量疫苗株皮下接种小鼠，统计各人工感染剂量下小鼠存活率。感染PRV动物脑部病理切片经苏木素．伊红（HE）染色观察，结果显示PRV强毒株及疫苗株接种小鼠后与PRV感染猪、羊后出现相似病理变化，均可导致炎性细胞的浸润及大脑实质内小胶质细胞的增殖。免疫组化染色表明PRV可以感染小鼠脑组织。本研究最终采用小鼠作为实验动物，应用PRV疫苗株，采用1×10^5TCID50剂量通过皮下注射接种小鼠，在接种后6d观察病变。该实验模型为进一步研究PRV感染小鼠后的天然免疫机制提供了实验依据。

关键词：伪狂犬病毒人工感染小鼠模型

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中国首株H13N6亚型禽流感病毒遗传进化分析及致病性和传播性评估

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 172-176页

作者：高晓龙范胜涛李胜楠国娇王爱荣孙伟洋李雪虞一聪王铁成李元果桑晓宇于志君张坤高玉伟夏咸柱中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130062

为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化... 详细信息

为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化分析表明NA基因属于北美谱系,其余7个基因均属于欧亚谱系;其中NA、NP、M、NS基因来源于鸥类,而HA、PB2、PB1、PA基因来源于野鸭类。动物致病性和传播试验结果显示,该病毒株在鸡和小鼠体内不能进行有效复制,在豚鼠和鸡体内也不能进行排毒和有效传播。基因序列分析结合致病性和传播性试验表明H13N6亚型AIV分离株可能是通过候鸟迁徙而传入我国的新型重组AIV,但该病毒株仍只能感染野生水禽尚未获得跨越种间屏障感染陆生家禽和人的能力,尚不具备哺乳动物间和家禽间的传播能力。

关键词： H13N6 传播致病力鸡小鼠豚鼠

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