检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 506-509页

作者：赵鸿远彭金美安同庆李琳冷超粮陈家锃王倩常丹张秋月蔡雪辉童光志田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物分子病原学与分子流行病学团队黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 详细信息

2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。

关键词：伪狂犬病病毒变异鉴定 gE 分子特征

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腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2在小鼠模型中诱导的细胞免疫应答评价

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 723-726页

作者：秦华洋孙元王春花袁晋丛鑫李素罗玉子孙淑红仇华吉山东农业大学动物医学学院山东泰安271018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2诱导的细胞免疫机制,本研究将rAdV-SFV-E2、rAdV-E2和rAdV-SFV-EGFP分别接种小鼠并对其所诱导的细胞免疫水平进行了比较。结果显示,免疫小鼠脾淋巴细胞经纯化的猪瘟病毒粒子体外... 详细信息

为研究腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2诱导的细胞免疫机制,本研究将rAdV-SFV-E2、rAdV-E2和rAdV-SFV-EGFP分别接种小鼠并对其所诱导的细胞免疫水平进行了比较。结果显示,免疫小鼠脾淋巴细胞经纯化的猪瘟病毒粒子体外刺激后,rAdV-SFV-E2免疫组诱导的CD4+及CD8+T淋巴细胞增殖显著高于rAdV-E2组及rAdV-SFV-EGFP组(p<0.05);rAdV-SFV-E2组和rAdV-E2组均可以诱导增殖的CD8+T淋巴细胞分泌高水平的IFN-γ,并且rAdV-SFV-E2组在免疫后5 d、7 d、10 d诱导水平显著高于rAdV-E2组;此外,脾淋巴细胞上清液中IL-2检测结果也显示,rAdV-SFV-E2组在免疫后1 d、5 d、7 d诱导分泌的IL-2水平显著高于rAdV-E2组及rAdV-SFV-EGFP组(p<0.05)。综合各项指标表明,腺病毒嵌合载体疫苗rAdV-SFV-E2诱导的细胞免疫水平高于腺病毒活载体疫苗rAdV-E2。

关键词：猪瘟嵌合病毒载体疫苗细胞免疫细胞因子小鼠

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猪流行性腹泻病毒感染Vero-E6细胞诱导凋亡机制的研究

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 926-929页

作者：黄明明于海东郭龙军陈建飞冯力王玉娥任慧英青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)诱导体外细胞凋亡的机理,本研究利用荧光定量PCR方法结合流式细胞术检测PEDV感染Vero-E6细胞后凋亡分子的变化情况。荧光定量PCR结果表明,抑制细胞凋亡因子Bcl-2在PEDV感染后基因转录水平迅速升高,在24 h... 详细信息

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)诱导体外细胞凋亡的机理,本研究利用荧光定量PCR方法结合流式细胞术检测PEDV感染Vero-E6细胞后凋亡分子的变化情况。荧光定量PCR结果表明,抑制细胞凋亡因子Bcl-2在PEDV感染后基因转录水平迅速升高,在24 h达到峰值后被抑制;而促凋亡因子的蛋白水解酶caspase8和caspase3在PEDV感染后基因转录水平也随之提高,在48 h达到峰值。流式细胞术结果表明PEDV感染细胞48 h后促凋亡分子中的蛋白水解酶Caspases被活化。该研究结果揭示了PEDV感染细胞能够拮抗细胞存活信号通路,引起细胞凋亡,其中凋亡调节因子Bcl-2、caspase3和caspase8在细胞凋亡发生过程中起关键作用。

关键词：猪流行性腹泻病毒 Bcl-2 caspase3 caspase8 细胞凋亡

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鹅细小病毒细胞适应毒株基因序列分析

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黑龙江畜牧兽医 2014年第10期 25-28页

作者：邱娜邵周伍林白小飞张云侯振中东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了研究鹅细小病毒(GPV)YN分离株在鹅胚成纤维细胞(GEF细胞)中的适应及变异情况,试验将YN毒株接种至GEF细胞中并连续传代至F19代,利用分段PCR法扩增F19代细胞适应毒和亲本病毒F0的全基因组序列,通过对测得序列进行剪辑、拼接,将F19代... 详细信息

为了研究鹅细小病毒(GPV)YN分离株在鹅胚成纤维细胞(GEF细胞)中的适应及变异情况,试验将YN毒株接种至GEF细胞中并连续传代至F19代,利用分段PCR法扩增F19代细胞适应毒和亲本病毒F0的全基因组序列,通过对测得序列进行剪辑、拼接,将F19代病毒全基因组序列与亲本病毒序列进行比对,并推导氨基酸差异位点,分析遗传变异性。结果表明:该病毒分离株已适应GEF细胞,并在72小时产生明显的细胞病变,其F19代病毒效价为1×106TCID50/0.1mL。F19代病毒与亲本病毒F0代存在133个核苷酸差异,其中13个位于NS基因,36个位于VP基因,84个位于非编码区;推导的氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列比对差异不显著,存在22个差异位点,其中4个位于NS蛋白,18个位于VP蛋白。

关键词：鹅细小病毒细胞适应序列分析氨基酸差异

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雀形目野生鸟类REV感染状况的调查及分离株gp90基因序列分析

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中国兽医学报 2014年第7期34卷 1078-1082,1113页

作者：郝瑞军庄艳娜燕超么帅高宏雷秦立廷高玉龙曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB110... 详细信息

为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB11043,分别来自黄喉鹀和燕雀。对2株REV分离株的gp90基因进行扩增、测序和序列分析。结果显示,其gp90序列与REV亚型Ⅲ的代表毒株（CSV、APC-566）亲缘关系最近,高达99%以上;与亚型Ⅱ代表株（SNV）和亚型Ⅰ代表株（HA9901）的亲缘关系相对较远,在95.5%~97.1%之间。遗传进化树分析也表明这2株野生鸟类分离株属于REV亚型Ⅲ。结果表明,雀形目野生鸟类也可以感染REV。

关键词：野生鸟类 REV gp90 序列分析

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鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白多克隆抗体的制备及初步应用

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中国兽医科学 2014年第2期44卷 165-170页

作者：孙永珍赵妍孔聪聪崔红玉王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001

以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白... 详细信息

以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。用ELISA检测抗体效价为1∶104。Western-blot分析结果表明,制备的家兔抗-ILTV gG抗体能与纯化的gG蛋白发生特异性反应,且能检测到内源性gG蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,制备的家兔抗ILTV-LJS09gG蛋白的多克隆抗体分别能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298株反应,特异性良好。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gG蛋白原核表达多克隆抗体间接免疫荧光试验

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一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒分离株的全基因组序列分析及致病性的研究

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 922-925,929页

作者：王晶张芳卢坤鹏关立峥肖丽彭志邓国华陈化兰湖南农业大学湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究对2012年从湖南活禽市场中分离到的一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/Hu N/S3160/2012(H8N4)进行全基因组序列和进化分析,并对其进行SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点序列为339PSIEPK↓GLF3... 详细信息

本研究对2012年从湖南活禽市场中分离到的一株鸭源H8N4亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/Hu N/S3160/2012(H8N4)进行全基因组序列和进化分析,并对其进行SPF鸡、SPF鸭和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点序列为339PSIEPK↓GLF347,为典型的低致病性AIV特征。内部基因来源较复杂,Hu N/160/12的PB1、NS基因分别与A/spot-billed duck/Xianghai/427/2011(H5N2)和A/wild bird/Korea/A81/2009(H5N2)的同源性最高,其余内部基因同源性最高的病毒株来自H2、H3、H4、H7、H10等亚型分离株,呈现明显的异源性。感染性试验结果显示,病毒在SPF鸭体内可以通过呼吸道和消化道向外排毒,并且能够在气管、肾脏、盲肠扁桃体及法氏囊检测到病毒,而不能在鸡体内有效复制及排毒。对小鼠的感染性试验结果显示,仅在鼻甲和肺检测到病毒存在,其他脏器病毒滴定结果为阴性,体重呈一过性下降,表明该病毒为低致病性AIV。

关键词：禽流感病毒 H8N4亚型基因组分析致病性

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抗鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 833-837页

作者：白小飞刘红玉陈玉环殷秀辰刘明张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为了制备抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜(E)蛋白的单克隆抗体,将鸭坦布苏病毒E基因进行原核表达,目的蛋白被纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规的单克隆抗体的制备技术,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA方法筛选及3次连续克... 详细信息

为了制备抗鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜(E)蛋白的单克隆抗体,将鸭坦布苏病毒E基因进行原核表达,目的蛋白被纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,按常规的单克隆抗体的制备技术,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA方法筛选及3次连续克隆化共获得6株能稳定分泌抗E蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,它们分别被命名为1F3、1G2、1B11、2A5、3B6和4F9。Dot-ELISA及Western-blot分析结果表明,这6株单克隆抗体均能与原核表达的E蛋白特异性结合。经间接免疫荧光(IFA)试验验证,这6株单克隆抗体均能识别鸭坦布苏病毒感染的细胞,且荧光主要位于细胞质中。结果表明,本研究成功制备了6株抗鸭坦布苏病毒E蛋白的单克隆抗体。鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备为今后鸭坦布苏病毒快速的病原学诊断以及E蛋白的结构和功能研究奠定了物质基础。

关键词：鸭坦布苏病毒 E蛋白原核表达单克隆抗体免疫印迹斑点杂交间接免疫荧光

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犬瘟热病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 589-592页

作者：全传松李博韬姜骞李连峰于作曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病... 详细信息

为建立快速检测犬瘟热病毒的诊断方法,根据GenBank中犬瘟热病毒核衣壳蛋白(NP)基因的保守序列设计1对特异性引物和1条特异性探针,通过对反应体系和反应条件的优化,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法对犬瘟热病毒最低检出量为80copies/μL,是常规RT-PCR的100倍;与其他犬类病毒不发生交叉反应;组内、组间变异系数均小于5%。对收集的67份临床样品进行检测,阳性检出率为64.2%,而常规RT-PCR的阳性检出率为44.8%。研究结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR具有良好的敏感性、特异性和稳定性,为犬瘟热的早期诊断提供了技术手段。

关键词：犬瘟热病毒 TaqMan 实时荧光定量RT-PCR

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应用酵母双杂交方法筛选与猪瘟病毒N^(pro)蛋白相互作用的宿主蛋白

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中国预防兽医学报 2014年第10期36卷 755-758页

作者：董泓李素贺番廖亚金何文瑞孙元罗玉子胡永浩仇华吉甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究猪瘟病毒(CSFV)与宿主细胞间的相互作用,本研究采用酵母双杂交方法以猪瘟病毒Npro蛋白为诱饵,从猪外周血单个核细胞(PBMC)cDNA表达文库中筛选与之相互作用的蛋白,经共转化试验表明,共筛选到12个与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,应用... 详细信息

为研究猪瘟病毒(CSFV)与宿主细胞间的相互作用,本研究采用酵母双杂交方法以猪瘟病毒Npro蛋白为诱饵,从猪外周血单个核细胞(PBMC)cDNA表达文库中筛选与之相互作用的蛋白,经共转化试验表明,共筛选到12个与Npro蛋白相互作用的宿主蛋白,应用Cytoscape 2.8.2软件绘制了蛋白质间相互作用关系图,根据GO分析结果,这些蛋白分别参与细胞代谢、细胞生长、免疫等过程,经双分子荧光互补(BiFC)试验表明筛得的部分宿主蛋白与CSFV Npro具有相互作用。本研究中筛选得到的蛋白质对CSFV复制的影响有待进一步深入研究。

关键词：猪瘟病毒 Npro蛋白酵母双杂交试验双分子荧光互补试验

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