检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 712-714页

作者：冯瑜菲赵国辉徐青元杨涛孙恩成李俊平吴东来东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异... 详细信息

为建立蓝舌病病毒（BTV）群特异性核酸检测方法,本研究针对BTV S10基因保守区域设计并合成1对特异性引物,建立了一步RT-PCR检测方法,并分别进行了特异性试验、敏感性试验以及临床样品的检测.实验结果表明：该方法对BTV1～24型均有特异性反应,而对茨城病毒（IBAV）、中山病毒（CV）和赤羽病病毒（AKAV）无交叉反应,具有良好的特异性;最低检出量为102 TCID50/mL.此外,该方法能有效的从羊的抗凝血样品中检测出BTV核酸.本研究所建立的一步RT-PCR检测方法可以用于BTV的快速检测及流行病学调查.

关键词：蓝舌病病毒分子诊断 bluetongue virus (BTV)

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猪caspase-1 p20多克隆抗体制备及其在猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染中的初步应用

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 98-101页

作者：刘园园李江南刘琴芳张枫张利杰黄丽穆杨翁长江西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)在感染细胞中对半胱氨酸蛋白水解酶Ⅰ(caspase-1)的激活作用,本研究以PRRSV HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的cDNA为模板,构建caspase-1 p20蛋白的重组表达质粒,以表达的重组蛋白p20为抗原制备... 详细信息

为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)在感染细胞中对半胱氨酸蛋白水解酶Ⅰ(caspase-1)的激活作用,本研究以PRRSV HuN4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)的cDNA为模板,构建caspase-1 p20蛋白的重组表达质粒,以表达的重组蛋白p20为抗原制备了兔抗猪p20的多克隆抗体。利用制备的多抗对PRRSV HuN4株(0.1 MOI)感染的PAM进行western blot检测,结果表明在PRRSV感染PAM 24 h后胞内caspase-1被大量诱导表达,同时caspase-1被水解激活并释放出p20。该研究结果为进一步阐明PRRSV感染细胞后引起IL-1β升高的分子机制研究奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒肺泡巨噬细胞半胱氨酸蛋白水解酶I p20 兔源多抗

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HP-PRRSV HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒对仔猪外周免疫器官及肺脏的损伤

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黑龙江畜牧兽医 2014年第5期 4-6,10,226页

作者：李爱东王刚刘永刚陶冶李莉涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株在其致弱过程中对仔猪外周免疫器官及肺脏损伤的变化,试验分别采用HuN4F5及其致弱代次F15、F23、F30及HuN4弱毒疫苗F112感染30日龄PRRSV抗原抗体阴性健康断奶仔猪,每天进行体温... 详细信息

为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株在其致弱过程中对仔猪外周免疫器官及肺脏损伤的变化,试验分别采用HuN4F5及其致弱代次F15、F23、F30及HuN4弱毒疫苗F112感染30日龄PRRSV抗原抗体阴性健康断奶仔猪,每天进行体温测定及临床症状观察,并在感染后0,3,5,7,10天检测病毒血症情况。病毒感染后10天剖杀试验猪,观察外周免疫器官及肺脏的病理变化并对肺脏和主要外周免疫器官病毒载量进行测定。结果表明:HuN4 F5、HuN4 F15组在临床症状、病毒血症、外周病毒载量及病理变化方面都明显比其他组严重,HuN4 F23组发病明显减轻,HuN4 F30组、HuN4 F112组无明显发病特征,与空白对照组无明显差异。说明HP-PRRSV HuN4株在致弱过程中,传代至30代时毒力发生显著减弱。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 HuN4株致弱毒株外周免疫器官肺脏病理损伤

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甲流病毒NS基因降低H5N1禽流感病毒对小鼠的致病力的研究

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 243-245页

作者：孔晖晖张乾义张莹谷春阳姜永萍关云涛陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学甘肃兰州730070

为研究NS基因对流感病毒致病力的影响,本实验以一株H5N1禽流感病毒(AIV)A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)为亲本病毒株,利用反向遗传技术,以我国首例甲型H1N1流感病毒分离株A/Sichuan/01/2009(SC/01)的NS基因对DK/35株进行单基因替换,拯... 详细信息

为研究NS基因对流感病毒致病力的影响,本实验以一株H5N1禽流感病毒(AIV)A/duck/Guangxi/35/2001(DK/35)为亲本病毒株,利用反向遗传技术,以我国首例甲型H1N1流感病毒分离株A/Sichuan/01/2009(SC/01)的NS基因对DK/35株进行单基因替换,拯救出一株重组H5N1 AIV。动物实验表明,SC/01株的NS基因能够使DK/35株对小鼠的致病力减弱。我们推测SC/01株的NS基因主要是通过调节宿主干扰素的产生致弱DK/35株的毒力。进一步对致弱机制进行系统研究,为生产弱毒活疫苗提供一种新的策略。

关键词： H5N1禽流感病毒重组致病性 NS基因

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H5亚型禽流感病毒LAMP快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 107-110页

作者：包红梅李一经王秀荣陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法... 详细信息

为建立快速检测H5亚型禽流感病毒(AIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H5亚型AIV HA基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,建立了基于LAMP技术检测H5亚型AIV的检测方法。结果表明,该方法对H5 AIV RNA的最小检测限为0.1 pfu,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 10倍;扩增反应可以在30 min内完成;在反应体系中添加钙黄绿素(FD)荧光染料后,可以通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验表明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H5亚型AIV的病原学快速检测方法。

关键词：禽流感病毒 LAMP方法 H5亚型禽流感病毒

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H5N1亚型禽流感病毒感染SPF鸡脾脏蛋白质组分析

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 519-523页

作者：赵玉辉陈普成包红梅王秀荣李广兴东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件... 详细信息

为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件注释分析显示差异蛋白参与多种重要的生物学过程,包括代谢、合成、运输、生物调节和免疫反应等;荧光定量PCR(qPCR)验证表明感染组中组织转谷氨酰胺酶(TGM2)、结蛋白(DES)、β-2微球蛋白(B2M)基因呈现上调趋势,而P40核糖体相关蛋白(RPSA)、肌动蛋白相关蛋白(ACTR3)基因与对照组相比表达水平下调,这些基因表达趋势均与2-DE结果一致。本研究结果为进一步研究宿主与病毒相互作用和抗病毒感染的机制奠定了基础。

关键词：禽流感病毒脾脏双向凝胶电泳蛋白质组

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表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 515-518页

作者：李奇蒙陈普成柳金雄姜永萍王笑梅田雨胡永浩陈化兰甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建pENTR-VP2。采用Gateway LR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒f5354ccdBK+共同参与基因片段互换反应,构建重组粘粒f5354-VP2。f5354-VP2与其他4个相互重叠覆盖HVT全基因组的粘粒经酶切线性化后共同转染CEF细胞,并拯救出重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,每隔5代采用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达。rHVT-VP2的构建为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病毒火鸡疱疹病毒 VP2

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猪瘟病毒衣壳蛋白的细胞核定位研究

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中国预防兽医学报 2014年第1期36卷 71-72,80页

作者：刘宁时洪艳陈建飞冯力张鑫胡桂学吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白在ST细胞中的定位情况,本研究将CSFV C蛋白基因克隆于真核表达载体pEGFP-C2中,构建重组质粒pEGFP-CSFV-C。将该重组质粒转染ST细胞,转染2 h、4 h和6 h后利用激光共聚焦显微镜分析C表达蛋白在细胞中的定... 详细信息

为了解猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白在ST细胞中的定位情况,本研究将CSFV C蛋白基因克隆于真核表达载体pEGFP-C2中,构建重组质粒pEGFP-CSFV-C。将该重组质粒转染ST细胞,转染2 h、4 h和6 h后利用激光共聚焦显微镜分析C表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,CSFV表达蛋白在ST细胞中主要定位于细胞质和核仁。本研究为进一步分析CSFV的复制机理提供依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白 ST细胞核仁定位

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猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 310-313页

作者：张璐王延群郝立沙高明明李爱东陶冶李莉涂亚斌蔡雪辉路义鑫东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株... 详细信息

为制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用PCV2去核定位信号Cap蛋白(dCap),通过杂交瘤技术制备1株杂交瘤细胞株(4E2),制备小鼠腹水效价达1∶64 000,亚类鉴定为IgG1/κ链。Western blot分析显示,该株MAb与毕赤酵母表达的dCap和原核表达的Cap蛋白均可以发生特异性免疫反应。采用肽扫描法对MAb的非核定位信号区进行抗原表位鉴定,结果表明该MAb可以识别的线性表位区域为131TKATALTYDPYVNYSS146。本实验结果为进一步研究Cap蛋白的结构和PCV2临床检测方法的建立奠定基础。

关键词：猪圆环病毒2型 dCap 单克隆抗体表位

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鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第9期41卷 20-24页

作者：周长良张雅春王伟李越赵颖慧臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830000

本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经I... 详细信息

本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。

关键词：维甲酸诱导蛋白Ⅰ 单克隆抗体原核表达

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