检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 286-288页

作者：崔宇超彭永刚马兴杰崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立快速、灵敏的猪细小病毒(PPV)的检测方法,本研究针对PPV VP2基因的保守区域设计一对扩增472 bp片段的特异性引物,建立了PPV纳米PCR检测方法。敏感性试验表明纳米PCR方法是普通PCR的1 000倍,最低核酸检出量为4拷贝/μL。利用该纳米... 详细信息

为建立快速、灵敏的猪细小病毒(PPV)的检测方法,本研究针对PPV VP2基因的保守区域设计一对扩增472 bp片段的特异性引物,建立了PPV纳米PCR检测方法。敏感性试验表明纳米PCR方法是普通PCR的1 000倍,最低核酸检出量为4拷贝/μL。利用该纳米PCR方法检测猪的其他相关病毒核酸,结果均呈阴性。分别采用纳米PCR和普通PCR对3个省份送检的43份临床样品进行检测,PPV阳性率分别为95%(41/43)和72%(31/41),表明该纳米PCR检测方法具有更高的敏感性,适用于PPV低含量临床样品的检测。

关键词：猪细小病毒 VP2基因纳米PCR

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蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 318-322页

作者：席娜赵国辉孙恩成秦永丽孙亮魏天徐青元杨涛孙晶刘二战钱爱东吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备蓝舌病病毒03TV）8型VP2蛋白的单克隆抗体（MAb）TL鉴定其抗原表位，本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞进行融合，并以纯化的重组VP2蛋白为... 详细信息

为制备蓝舌病病毒03TV）8型VP2蛋白的单克隆抗体（MAb）TL鉴定其抗原表位，本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB／c小鼠，三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞进行融合，并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原，通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株（2G4和387）。间接免疫荧光结果表明：2G4和387与BTV8均呈阳性反应，与BTV1～7、BTV9-24、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应。Westernblot结果显示，2G4和387均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白。Ig亚类鉴定2G4和387均为IgG1／κ链。利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白（MBP）融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定，结果表明：MAb2G4识别的抗原表位为捌LCRLLSTIGRKMCNTE^296。本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒8型 VP2蛋白真核表达单克隆抗体抗原表位

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核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体

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中国畜牧兽医 2014年第7期41卷 35-39页

作者：李越王伟赵颖慧周长良臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为制备H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),本试验利用表达猪流感病毒A/Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株HA蛋白的表达质粒pVAX1-HA肌注股内肌免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合;通过间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆,获得9株稳定分泌抗HA单克隆抗体的杂交瘤细胞。中和试验结果显示,单克隆抗体4D5株对H1N1流感病毒起中和作用,该单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1024。这株单克隆抗体与哈尔滨兽医研究所国家重点实验室保存的H3N2流感病毒、H5N1流感病毒均不发生交叉反应,显示出了很好的H1特异性;间接免疫荧光试验结果显示,这株单克隆抗体能与H1N1流感病毒发生特异性反应。制备的特异性抗HA单克隆抗体为建立H1N1流感病毒免疫学检测方法和单链抗体抗病毒复制研究奠定了基础。

关键词： H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体

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西尼罗病毒NS1与E基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 881-884页

作者：刘二战赵国辉孙恩成崔焕忠杨涛徐青元孙晶孙亮席娜魏天吴东来吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,... 详细信息

为构建串联表达西尼罗病毒(WNV)NS1和E基因的重组腺病毒,本研究利用口蹄疫病毒具有自我切割功能的2A蛋白的编码序列将NS1和E基因串联,构建穿梭载体p Shuttle-WNV-NS1-2A-E,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA,经脂质体转染AD293细胞,在细胞内完成病毒粒子的组装制备重组腺病毒。通过间接免疫荧光和western blot检测表明:重组腺病毒中的外源基因表达的融合蛋白NS1-2A-E可以自我裂解为NS1和E蛋白。将构建的重组腺病毒免疫小鼠,结果表明该重组病毒可以诱导机体产生良好的体液免疫应答。本实验为WNV重组腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 NS1 E 重组腺病毒体液免疫

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2012年-2013年我国养猪重点省份猪流感的血清学调查

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 431-434页

作者：刘丽萍乔传玲杨焕良隋金钰王昌建陈艳邱立新唐小明何世成陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410002

为进一步了解我国猪流感病毒（SIV）的流行现状，本研究于2012年10月至2013年12月从全国养猪重点省份的养殖场、屠宰场采集猪血清样品共计5 856份，以类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）和H3N2亚型SIV 抗原作为标准抗... 详细信息

为进一步了解我国猪流感病毒（SIV）的流行现状，本研究于2012年10月至2013年12月从全国养猪重点省份的养殖场、屠宰场采集猪血清样品共计5 856份，以类禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（pdm/09 H1N1）和H3N2亚型SIV 抗原作为标准抗原，采用血凝抑制（HI）试验方法进行抗体检测。结果显示，我国猪群中SIV抗体阳性率分别为55.52 %、13.92 %和2.00 %，其中EA H1N1 SIV抗体平均阳性率高于其它亚型。2013年1月和3月份，又集中在广东和湖南两个省份的部分养殖场和屠宰场采集猪血清样品共计9 910份，采用ELISA进行抗体检测。结果共检出阳性血清3 518份，平均阳性率分别为36.14 %和34.89 %。本实验结果表明2012年～2013年我国猪群中SIV感染比较普遍。

关键词：猪流感血清学抗体血凝抑制 ELISA

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猪链球菌的分型鉴定及其体外形成生物被膜的研究

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中国兽医杂志 2014年第12期50卷 3-5页

作者：周永辉王淑杰黄全勇陈俭清李艳华东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

通过生化试验及PCR等方法对13株猪链球菌进行鉴定分型,用结晶紫染色(CV)和扫描电镜(SEM)的方法对其形成生物被膜的能力进行研究,并对形成的生物被膜进行形态观察。结果显示:经鉴定的13株猪链球菌中1株为1型,4株为9型,2株为7型,另2株为2... 详细信息

通过生化试验及PCR等方法对13株猪链球菌进行鉴定分型,用结晶紫染色(CV)和扫描电镜(SEM)的方法对其形成生物被膜的能力进行研究,并对形成的生物被膜进行形态观察。结果显示:经鉴定的13株猪链球菌中1株为1型,4株为9型,2株为7型,另2株为2型,其他菌株为未知;13株菌均能形成生物被膜,其中1号、2号、3号、4号、7号、9号、10号、12号、13号菌形成生物被膜能力较弱,5号、6号、8号、11号菌形成生物被膜能力中等。这些结果为研究猪链球菌致病性及为生物被膜研究提供物质基础。

关键词：猪链球菌分型鉴定生物被膜形成能力

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兔出血症病毒蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2014年第12期 21-24,258页

作者：单丽玲刘家森姜骞陈淑慧黄艳秋郭东春刘大飞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为了研究兔出血症病毒(RHDV)蛋白与宿主蛋白的相互作用,试验采用RT-PCR技术从病毒基因组中扩增病毒的7种非结构蛋白P16、P23、2C-like protein、P29、VPg、3C-like protease、RNA复制酶(RdRp)及小结构蛋白VP10、主要结构蛋白VP60,测序... 详细信息

为了研究兔出血症病毒(RHDV)蛋白与宿主蛋白的相互作用,试验采用RT-PCR技术从病毒基因组中扩增病毒的7种非结构蛋白P16、P23、2C-like protein、P29、VPg、3C-like protease、RNA复制酶(RdRp)及小结构蛋白VP10、主要结构蛋白VP60,测序正确后,定向克隆至p GBKT7载体,经转化酵母菌AH109验证诱饵载体p GBKT7-X的自激活活性和毒性作用。结果表明:诱饵载体p GBKT7-X对酵母细胞无毒性作用,且对报告基因无自激活现象。说明构建的诱饵载体可以用于酵母双杂交系统筛选与RHDV相互作用的宿主蛋白。

关键词：兔出血症病毒(RHDV) 酵母双杂交诱饵载体自激活作用毒性作用

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山羊支原体山羊肺炎亚种黏附相关蛋白的特性

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中国兽医科学 2014年第6期44卷 583-588页

作者：白帆李媛吴金迪汪洋刘素丽周玉梅赵权辛九庆吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室东北黑龙江哈尔滨150001 农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为鉴定山羊支原体山羊肺炎亚种的黏附相关蛋白,通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因组编码的假定的膜蛋白基因(0297)进行扩增,并连接到pET-32a(+)载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,大小约为43ku... 详细信息

为鉴定山羊支原体山羊肺炎亚种的黏附相关蛋白,通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因组编码的假定的膜蛋白基因(0297)进行扩增,并连接到pET-32a(+)载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,大小约为43ku,将该重组蛋白命名为P0297。用纯化的P0297免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。利用激光共聚焦显微镜观察到蓝色的细胞核周围有重组蛋白的绿色荧光存在,其外形与细胞膜的红色荧光基本重合,表明P0297对山羊气管上皮细胞有明显的黏附作用。夹心ELISA结果显示,重组蛋白P0297的黏附作用与蛋白浓度成正比,并且黏附作用可被多克隆抗体阻断,说明该重组蛋白的黏附为特异性黏附。上述结果表明,P0297蛋白是山羊支原体山羊肺炎亚种的一个黏附相关蛋白。

关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种黏附因子特性

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犬瘟热病毒血凝蛋白在昆虫细胞中的表达与抗原性分析

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中国畜牧兽医 2014年第8期41卷 25-29页

作者：全传松姜骞于作李博韬李连峰曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒(CDV)血凝蛋白(H),本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RTPCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBacTMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10BacTM同源重组构建穿梭质粒reBACmidrH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆... 详细信息

为获得具有天然构象及良好抗原性的犬瘟热病毒(CDV)血凝蛋白(H),本研究以HLJ2-07毒株为模板,利用RTPCR方法扩增出H基因,将其克隆到pFastBacTMHTA载体中,利用大肠杆菌DH10BacTM同源重组构建穿梭质粒reBACmidrH,将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,进行杆状病毒表达。利用Western blotting对获得的重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。同时,利用在线网站与软件对CDV H蛋白进行B细胞表位分析预测。结果显示,在杆状病毒系统中表达的H蛋白能与His-tag单克隆抗体及CDV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白成功表达,且具有良好的反应原性;用Swiss-model同源建模软件及B细胞表位预测软件,预测H蛋白可能具有的B细胞表位有5处,分别是175—195、240—250、365—380、480—508及526—555。本研究获得了具有天然构象及良好抗原性的CDV重组H蛋白,可为诊断试剂开发、单克隆抗体制备及表位筛选等工作奠定基础。

关键词：犬瘟热病毒血凝蛋白杆状表达系统 B细胞表位

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Leachii支原体LppA蛋白的表达及其粘附特性鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 641-645页

作者：王冠博常继涛刘云于力东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

Leachii支原体可以引起犊牛多发性关节炎,与犊牛肺炎有关。为研究*** LppA蛋白粘附特性,本研究采用大肠杆菌表达系统表达*** LppA蛋白,并制备抗LppA多克隆抗体。胰酶敏感试验结果显示,全菌体蛋白经胰酶处理后,LppA蛋白条带消失,表明Lpp... 详细信息

Leachii支原体可以引起犊牛多发性关节炎,与犊牛肺炎有关。为研究*** LppA蛋白粘附特性,本研究采用大肠杆菌表达系统表达*** LppA蛋白,并制备抗LppA多克隆抗体。胰酶敏感试验结果显示,全菌体蛋白经胰酶处理后,LppA蛋白条带消失,表明LppA蛋白是位于***细胞表面的膜脂蛋白。通过粘附抑制试验,利用激光共聚焦显微镜可以观察到抗LppA血清能够抑制***对胎牛关节滑膜细胞的粘附作用;同时,采用Columbas分析软件对共聚焦图片进行图像分析,结果显示1:25倍稀释的LppA多克隆抗体对***的粘附抑制率为58.3%,而同比稀释的***全菌体多抗的粘附抑制率为79.26%。此外,ELISA试验结果表明,重组LppA蛋白可以与关节滑膜细胞膜蛋白发生特异性粘附作用,并且这种粘附作用可以被抗LppA多抗特异性抑制。这些结果表明,LppA蛋白是***的一个粘附相关的外膜脂蛋白。

关键词： Leachii支原体膜脂蛋白 LppA蛋白粘附特性

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