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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：姜永萍王国俊李俊平柳金雄陈普成曾显营陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

将禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对AA肉鸡的免疫程序进行了研究.将批号为2009001的DNA疫苗分别以0.2 mL(30μg)和0.2 mL(60μg)剂量免疫2周龄AA肉鸡,分别在免疫后7d、14d、28 d,每只鸡分别用高致病性禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong... 详细信息

将禽流感DNA疫苗(H5亚型,pH5-GD)对AA肉鸡的免疫程序进行了研究.将批号为2009001的DNA疫苗分别以0.2 mL(30μg)和0.2 mL(60μg)剂量免疫2周龄AA肉鸡,分别在免疫后7d、14d、28 d,每只鸡分别用高致病性禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/1996(H5N1)[GS/GD/1/96(H5N1)]株尿囊液0.1 mL(含100 CLD50)攻击;用该疫苗首免后1周分别用相同剂量的疫苗加强免疫一次,在加强免疫后7日和14日分别以100 CLD50的HPAlV GS/GD/1/96(H5N1)攻击;用该疫苗首免2周时分别用相同剂量的疫苗加强免疫一次,在加强免疫后7日和14日分别以100 CLD50的HPAIV GS/GD/1/96(H5N1)攻击.结果,根据其诱导的HI抗体水平和免疫保护效果确定,禽流感DNA疫苗(pH5-GD)对AA肉鸡的免疫程序为:30μg剂量14日龄首免,间隔14日龄加强免疫.

关键词：肉鸡 H5亚型禽流感脱氧核糖核酸疫苗免疫程序

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洞庭湖区H10亚型禽流感监测及其遗传进化分析

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中国农学通报 2014年第32期30卷 15-20页

作者：黄建龙王昌建谭丹邓国华范仲鑫朱春霞张朝阳刘道新湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解洞庭湖区H10亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和... 详细信息

为了解洞庭湖区H10亚型禽流感病毒的流行分布及遗传进化情况,为该地区H10亚型禽流感的防控及该亚型病毒在禽流感病毒进化中所起的作用提供一些参考。在环洞庭湖地区活禽批发市场和水禽场上采集家禽和环境拭子,对其进行病原分离、鉴定和测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。结果显示:在活禽批发市场上总共分离到11株H10亚型禽流感病毒,分离的H10亚型禽流感阳性样品全来源于鸭拭子;在1个鸭场分离到2株H10亚型禽流感病毒;其中2株分离毒株序列分析显示其HA蛋白的裂解位点为PELMQGR/GLF,属于低致病性病毒,与以往在其他国家(蒙古、瑞典、荷兰、泰国、日本等)野鸟中分离的H10亚型病毒处于同一分支。

关键词： H10亚型禽流感病毒洞庭湖区监测遗传进化

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一株致病菌的MLST分析及其灭活疫苗的免疫保护效果评价

一株致病菌的MLST分析及其灭活疫苗的免疫保护效果评价

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2014年中国畜牧兽医学会养猪学分会学术研讨会

作者：王淑杰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断及技术服务中心黑龙江哈尔滨150001

为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析.鉴定结果显示,该分离株是猪链球菌(Streptococcus suis),血清型为2型;其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高... 详细信息

为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析.鉴定结果显示,该分离株是猪链球菌(Streptococcus suis),血清型为2型;其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界大流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD.进一步使用GD灭活菌以3×108CFU剂量3次免疫小鼠,免疫后分别使用GD,7型、9型*** WH和ZD进行攻毒试验.动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5％、87.5％和75％;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著少于对照组,且没有明显病变.本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型***分离株提供有效的免疫保护,提示其具有作为预防***病的有效的疫苗候选.

关键词：猪链球菌血清分型 M多位点序列分型灭活疫苗免疫保护

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腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2最早提供完全攻毒保护时间的研究

腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2最早提供完全攻...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：袁晋孙元王春花秦华洋丛鑫李素罗玉子刘磊仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度传染性、致死性猪传染病,对养猪业危害极大.目前,疫苗接种仍然是防控该病的重要措施.猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)在猪瘟防控中发挥了重要作用,但由于其缺乏鉴别疫苗接种和野毒感染的特性,不利于猪瘟的... 详细信息

猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度传染性、致死性猪传染病,对养猪业危害极大.目前,疫苗接种仍然是防控该病的重要措施.猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)在猪瘟防控中发挥了重要作用,但由于其缺乏鉴别疫苗接种和野毒感染的特性,不利于猪瘟的根除和净化,因此研制具有标记特性的新型猪瘟疫苗具有重要意义.此前,本实验室构建了一种腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2,该疫苗不但具有标记特性,而且免疫效力与C株疫苗相当,且在多方面弥补了C株的不足.本研究拟进一步评价该嵌合载体猪瘟疫苗最早提供完全攻毒保护的时间.将rAdV-SFV-E2免疫猪瘟抗原和抗体均为阴性的健康仔猪(n=5),免疫一次后于不同时间点用CSFV强毒石门株进行攻击,并检测其抗体应答、临床症状、病毒血症和病理变化等.结果显示,rAdV-SFV-E2免疫后1周和2周,分别能对致死性CSFV强毒的攻击提供部分保护(3/5存活)和不完全保护(全部存活,但出现了短暂的发热和低水平的病毒血症);免疫后3周和4周,能够完全抵抗致死性CSFV强毒的攻击,表现为无病毒血症,无临床症状,无剖检变化和组织病理学变化.此研究进一步证实了腺病毒/甲病毒复制子嵌合载体猪瘟疫苗rAdV-SFV-E2作为种新型猪瘟标记疫苗的可能性,在猪瘟的紧急防控中也能够起到一定的作用.

关键词：猪瘟嵌合载体疫苗最早保护时间腺病毒甲病毒复制子嵌合载体

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细胞自噬在猪繁殖与呼吸综合征病毒体内体外感染中的研究

细胞自噬在猪繁殖与呼吸综合征病毒体内体外感染中的研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：孙明霞黄丽王刚茅翔蔡雪辉南京农业大学动物医学院江苏南京中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨南京农业大学动物医学院江苏南京

在本研究中，对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的体内体外感染引起的宿主细胞的自噬反应进行了系统研究。在PRRSV感染的Marc-145细胞，病毒的复制可以显著提高自噬蛋白LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化，形成双层囊泡的自噬体样结构，表明感染病毒... 详细信息

在本研究中，对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的体内体外感染引起的宿主细胞的自噬反应进行了系统研究。在PRRSV感染的Marc-145细胞，病毒的复制可以显著提高自噬蛋白LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化，形成双层囊泡的自噬体样结构，表明感染病毒的细胞自噬活性增强;同时，体内试验也可以检测到感染PRRSV猪肺泡巨噬细胞及胸腺细胞内自噬活性增强。通过shRNA敲低关键自噬蛋白ATGS和LC3的表达及药物特异性调节Marc-145细胞自噬水平，证明自噬在病毒复制中起着重要作用;对病毒复制复合体组分非结构蛋白Nsp2与自噬蛋白LC3的共定位分析及密度梯度离心共组分分析表明，PRRSV可能利用自噬体结构作为其复制的位点。这些结果表明，细胞自噬在PRRSV感染过程中具有重要作用，为更好的理解病毒与宿主细胞的相互作用提供新的视角。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒宿主细胞自噬反应感染机制

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基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：田秋丰于申业衣菲吕雪莲倪宏波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-p... 详细信息

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况.结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体茵中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达.本研究成功构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台.

关键词：单核细胞增生李斯特茵调控基因温控表达荧光蛋白载体构建

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表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对小鼠的免疫原性研究

表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及对...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：马良王琪田美杰王喜军翟洪月于文会葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克... 详细信息

在新城疫病毒LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建表达狂犬病病毒ERA株糖蛋白的重组新城疫病毒rLa-ERA-GP,并探索rLa-ERA-GP对小鼠免疫原性.利用RT-PCR技术,从狂犬病病毒ERA疫苗株上得到狂犬病病毒的糖蛋白(GP)基因,将其克隆到载体pBRN-FL-Pmel上,构建了表达狂犬病病毒糖蛋白重组新城疫病毒全长cDNA克隆pBRN-FL-ERA-GP.利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,拯救重组病毒***-PCR检测证实重组病毒rLa-ERA-GP基因组中含有GP基因;western blot和IFA检测结果均表明GP基因在新城疫载体中得到了正确、稳定的表达;大剂量接种BALB/c小鼠不会引起小鼠发病和生长阻滞,并能诱导出高水平ERA特异中和抗体反应;加强免疫后可有效抵御致死剂量RV街毒对BALB/c小鼠的攻击.重组病毒rLa-ERA-GP有望成为防制狂犬病更加安全、有效的,新型重组基因工程活载体疫苗.

关键词：狂犬病病毒反向遗传操作系统重组新城疫病毒糖蛋白表达活载体疫苗免疫原性

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表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：陈普成李奇蒙姜永萍柳金雄田雨王笑梅胡永浩陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质... 详细信息

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建重组质粒pENTR-VP2.采用GatewayLR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒pFosC-ccdBK+共同参与基因片段进行互换反应,构建重组粘粒pFosC-VP2.通过将pFosC-VP2与其它4个相互重叠并且覆盖HVT全基因组的粘粒酶切线性化后共同转染CEF细胞,拯救重组病毒rHVT-VP2.将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,利用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达.动物试验结果表明通过一次免疫rHVT-VP2即可诱导针对传染性法氏囊的完全保护力.

关键词：火鸡疱疹病毒传染性法氏囊病毒基因重组蛋白表达

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犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒I型转移载体的构建及真核表达

犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒I型转移载体的构建及真核表达

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第四届全国人畜共患病学术研讨会 2014年中国狂犬病年会中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第四次学术研讨会

作者：郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军延边大学农学院动物医学系中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室-美国密西根州立大学天然免疫联合实验室

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-I)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因。其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1 TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂... 详细信息

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-I)转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因。其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1 TK基因的5'(2000 bp)和3'(1700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒的pBluesciptⅡ-SK(-)载体。通过转染试剂PEI将pBS-TK-AMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用IFAT和westernblot进行鉴定。结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-AMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白分子量为68 kDa。本试验为犬新孢子虫AMA1基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。

关键词：犬新孢子虫 AMA1基因猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移质粒表达

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辽宁省某市奶牛布病感染状况及群间传播风险因素调查

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中国动物检疫 2014年第11期31卷 51-54页

作者：崔基贤王靖飞谷志大辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁省动物医学研究院辽宁沈阳110164 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为了解辽宁省某市的奶牛布鲁氏菌病(简称奶牛布病)流行现状及该市奶牛布病群间传播风险因素,开展本研究。对该市辖区内所有奶牛进行布鲁氏菌病的普查,获知该市奶牛布病的表观个体血清流行率和表观群血清流行率;采用问卷调查方式进一步... 详细信息

为了解辽宁省某市的奶牛布鲁氏菌病(简称奶牛布病)流行现状及该市奶牛布病群间传播风险因素,开展本研究。对该市辖区内所有奶牛进行布鲁氏菌病的普查,获知该市奶牛布病的表观个体血清流行率和表观群血清流行率;采用问卷调查方式进一步开展病例-对照研究,初步筛选出14项该市奶牛布病群间传播可能风险因素,经相关性检验结合生物学知识,选取了5个变量进入多因素分析,最终通过非条件logistic回归方法初步建立了该市奶牛布病群间传播风险因素回归模型,并建立ROC曲线计算了模型的预测概率。研究结果显示,该市奶牛个体流行率为0.99%,群流行率12.44%。非条件logistic回归分析结果显示,该市奶牛布病群间传播的风险因素包括:"无专用购销车辆"(OR=3.57,95%CI:1.04-12.5,p=0.04),"进圈时不穿专用工作服和胶靴"(OR=5.0,95%CI:0.97-25.00,p=0.06),"与犬混养"(OR=12.39,95%CI:0.97-157.56,p=0.05)。该结果表明与犬混养可能是该市奶牛布病群间传播重要的风险因素,而奶牛销售时自有购销专用车辆和场内生物安全措施的采取如进圈穿专用工作服可使奶牛布病在场群间传播的风险降低。针对回归模型建立的ROC曲线下面积为71.6%,表明此模型解释该市奶牛布病群间传播风险的能力为中等。

关键词：奶牛布鲁氏菌病流行率风险因素

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