为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot 结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫...
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为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(***)单克隆抗体(MAb),本研究采用***5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot 结果表明该MAb能够特异性识别所有***标准菌株;免疫沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬茵体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有"KTPAE-R"保守序列,对应于*** SH29755株和SH0165株的469位～475位的氨基酸残基.对OppA氨基酸序列比对结果表明***与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1％～74.5％,本研究结果为进一步研究***感染的病原学诊断建立了良好的基础.
为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细...
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为制备抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(H P-PRRSV)G P3株的单克隆抗体(M A b),本研究将H P-PRRSV H uN 4株免疫BA LB/c小鼠,以该病毒感染的细胞及真核表达的G P3蛋白为检测抗原,经间接免疫荧光(IFA)筛选获得了一株稳定分泌M A b的细胞株,命名为4G 5。抗体亚类鉴定重链类型为IgG 1,轻链类型为κ。该M A b细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶256和1∶1 280。IFA结果显示,MAb4G5能够识别CH-1R、JXA1-R、HP-PRRSVHuN4株及其疫苗株HuN4-F112,而不识别RespPRRS M LV病毒株。Western blot结果显示,4G5与HP-PRRSVHuN4株及原核表达的GP3蛋白均可以反应,表明其针对的抗原表位为线性表位,中和试验结果显示该M A b无中和活性。通过截短表达GP3蛋白鉴定该M A b抗原表位识别序列为74W CRIGHD RCS83。本研究获得的M A b为进一步研究HP-PRRSV GP3蛋白的结构及功能奠定了基础。
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