检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 444-448页

作者：杨红亚崔红玉闫帅赵妍李巧玲王云峰何高明石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选具有优良益生及抗菌及抗病毒特性的禽源乳酸菌,本研究在黑龙江散养鸡新鲜粪便中分离出一株乳酸菌,经过菌落形态观察、革兰氏染色和菌体形态观察、API碳水化合物发酵试验鉴定以及16S rDNA序列的Mega Blast和LinnaeusBlast分析,鉴... 详细信息

为筛选具有优良益生及抗菌及抗病毒特性的禽源乳酸菌,本研究在黑龙江散养鸡新鲜粪便中分离出一株乳酸菌,经过菌落形态观察、革兰氏染色和菌体形态观察、API碳水化合物发酵试验鉴定以及16S rDNA序列的Mega Blast和LinnaeusBlast分析,鉴定为约氏乳杆菌,命名为LactobacillusjohnsoniiY 2。通过耐酸试验、抗胆盐试验、大剂量(8×109cfu)饲喂试验、体外抑菌试验和抗病毒(新城疫病毒La Sota株)试验表明,*** 2可耐受pH 3.0的酸度和0.5%的高胆盐环境;大剂量饲喂无毒无害且具有增加采食量和增重的效果;具有较明显的抗菌和抗病毒作用。*** 2显示出优良的益生特性,可作为益生菌候选菌株。

关键词：乳酸菌分离鉴定益生特性抗病毒特性

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塞姆利基森林病毒复制子DNA疫苗研究进展

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中国兽医学报 2013年第1期33卷 146-149页

作者：仇铮相文华东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150030

甲病毒（Alphavirus）是披膜病毒科（Togavirusfamily）的成员,是单股、正链的RNA病毒,包括塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus,SFV）、辛德毕斯病毒（Sindbis virus,SIN）和委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equineencephalitis vi... 详细信息

关键词： SFV复制子甲病毒复制子自杀性DNA疫苗

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H7亚型禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国兽医科学 2013年第12期43卷 1224-1230页

作者：包红梅赵玉辉李一经王秀荣陈化兰东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒(H7AIV)血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立了一种基于反转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法... 详细信息

根据GenBank中登录的H7亚型禽流感病毒(H7AIV)血凝素基因序列,设计了一套特异识别HA基因序列中6个不同区段的环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立了一种基于反转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)技术的H7亚型禽流感病毒诊断方法。结果显示,该方法对H7AIV RNA的最小检测限为0.1pg,灵敏度高于普通一步法RT-PCR 100倍;全部反应可在1.5h内完成;在反应体系中添加Fluorescent Detection Reagent染料后,可通过肉眼观察有无荧光直接判定结果。灵敏性及特异性试验证明,该方法灵敏度高、特异性好,能够作为H7亚型禽流感病毒的快速诊断方法。

关键词： H7亚型禽流感病毒反转录环介导恒等温扩增快速检测

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结核分枝杆菌rv3036c基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2013年第8期35卷 684-686页

作者：曹俊陈利苹刘银冰鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

为制备结核分枝杆菌(Mtb)rv3036c基因的多克隆抗体,本研究以Mtb强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3036c基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-rv3036c,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白... 详细信息

为制备结核分枝杆菌(Mtb)rv3036c基因的多克隆抗体,本研究以Mtb强毒株H37Rv基因组DNA为模板,扩增rv3036c基因,克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-rv3036c,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG诱导表达组氨酸标签融合蛋白Rv3036c,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白,经western blot验证纯化蛋白。将Rv3036c蛋白纯化产物免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE和westernblot分析结果表明,Rv3036c以可溶形式表达,蛋白分子量大小为28 ku,并且具有良好的免疫原性。以上结果为进一步研究rv3036c基因在Mtb的致病性作用奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 rv3036c基因原核表达多克隆抗体

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鸭RIG－1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究

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中国畜牧兽医文摘 2014年第10期30卷 192-192页

作者：张雅春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（... 详细信息

视黄酸诱导基因蛋白1（RIG-1）是一类模式识别受体，在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒（AIV）活性，本研究采用RT—PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3．1（＋）中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG—1，应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平；并将pcDNA—RIG-1转染DF-1细胞，通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。

关键词：禽流感病毒基因蛋白组织表达金定鸭活性 pcDNA3.1(+) 体外组织特异性表达

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猪全血中IFN-γ、IL-2、TNF-αTaqMan定量RT-PCR方法的建立及对猪瘟疫苗的免疫评价

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 164-168页

作者：汪志艳刘永刚王刚石文达武嘉男涂亚斌姜成刚何玉利韩梓峰李玉明王延群蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为建立猪相关细胞因子的检测方法,本研究针对GenBank中猪IFN-γ、IL-2、TNF-α的基因设计特异性引物和荧光探针,建立了这3种细胞因子TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法在101～109拷贝/μL模板范围内具有良好的线... 详细信息

为建立猪相关细胞因子的检测方法,本研究针对GenBank中猪IFN-γ、IL-2、TNF-α的基因设计特异性引物和荧光探针,建立了这3种细胞因子TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法在101～109拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数R2均高达0.999。利用该方法对猪瘟(CSF)活疫苗进行细胞免疫评价,结果显示,CSF疫苗免疫组猪瘟病毒(CSFV)刺激细胞相对于空白对照细胞,IFN-γ、IL-2、TNF-αmRNA表达量在免疫后3 d～10 d之间均显著升高(p<0.05),而IFN-γ在14 d仍保持高水平表达;对照组CSFV刺激细胞和空白对照细胞的3种细胞因子表达量均无明显差异(p>0.05)。以上结果表明,该方法具有高度的特异性、敏感性和重复性,对不同疫苗的细胞免疫反应评价是可靠的。

关键词：全血细胞免疫评价 IFN-γ、IL-2、TNF-α TaqMan定量RT-PCR 猪瘟活疫苗

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鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白的表达及其免疫原性的分析

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 578-582页

作者：帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢司昌德曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中... 详细信息

为掌握鸭疫里氏杆菌Riean1110基因表达产物的免疫原性,根据GenBank上公布的鸭疫里氏杆菌DSM15868株(登录号为NC014738)的基因序列设计1对特异性引物,扩增了血清1型鸭疫里氏杆菌HLG1株的Riean1110基因。将其克隆到表达载体pPRO-EX-Htb中,构建重组表达质粒pHtb-RA1110,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,用IPTG诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE分析表明,诱导表达的目的蛋白的分子质量大约为56ku,与预期大小相符,以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,诱导的重组蛋白能特异性地识别鸭疫里氏杆菌阳性血清,具有良好的抗原性。用纯化的Riean1110蛋白免疫SPF鸭,经ELISA检测,可产生高水平的抗体。结果表明,制备的重组Riean1110蛋白为建立鸭疫里氏杆菌的血清学检测方法奠定了基础。

关键词：鸭疫里氏杆菌外膜脂蛋白原核表达免疫原性

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鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究

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中国预防兽医学报 2013年第2期35卷 117-120页

作者：帕提古丽.吾马尔郭东春张爱芹刘家森原冬伟姜骞林欢曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆160091

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均... 详细信息

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏杆菌分离鉴定 ompA基因致病性

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疫苗佐剂的研究现状和发展趋势

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中国预防兽医学报 2013年第1期35卷 81-86页

作者：李娜周伟芳刘慧敏李赞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨维科生物技术开发公司黑龙江哈尔滨150001 上海奉贤动物卫生监督所上海201400

疫苗佐剂是能够非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答、发挥辅助作用的一类物质。佐剂能够诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时又能减少免疫物质的用量，降低疫苗的生产成本。长期以来，传统疫... 详细信息

疫苗佐剂是能够非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答、发挥辅助作用的一类物质。佐剂能够诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时又能减少免疫物质的用量，降低疫苗的生产成本。长期以来，传统疫苗（多为菌体或其裂解物）由于其免疫原性强，佐剂的研究和使用只局限于较小的范围，如毒素和类毒素。从巴斯德至今近百年来已开发了许多菌苗和疫苗，但传统的菌疫苗一般多为全细菌或全病毒制成，其中含有大量非免疫原性物质，这些物质除具有毒副作用外也具有佐剂作用。

关键词：疫苗佐剂发展趋势免疫物质非特异性免疫原性免疫应答辅助作用免疫反应

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猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 369-373页

作者：李玉明王刚汪志艳刘永刚涂亚斌王淑杰姜成刚王延群蔡雪辉东北农业大学黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标... 详细信息

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因的SYBR Green I qRT-PCR方法。结果显示,该方法线性关系好(R2≥0.998),敏感性高,初始模板的检出下限为10拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,批内、批间重复试验的变异系数均小于3%,具有良好的重复性。本研究为细胞凋亡相关因子变化趋势的研究提供方法。

关键词：猪凋亡相关基因荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ

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