检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2021年第1期43卷 7-13页

作者：朱金鲁陈平黄萌萌刘冉卫东刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了提高猪链球菌(Streptococcus suis,SS)05ZYH33菌株中分选酶A(SrtA)的表达量,本研究利用同源重组技术,将强启动子Peno、SrtA基因与红霉素抗性基因融合并转化05ZYH33野生菌株(05ZYH33-WT),构建SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,并对05ZYH33-srtAe突变株和05ZYH33-WT进行生长特性分析和SrtA蛋白的western blot检测;进一步构建SS SrtA基因缺失株05ZYH33-srtA^(Δ)作为对照,通过检测05ZYH33-WT、05ZYH33-srtAe和05ZYH33-srtAΔ菌株表面蛋白SSU05_0630的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活性,初步评价SrtA的提高表达在SS表面蛋白锚定中的作用。Western blot结果显示,正确构建了SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,且该菌株的生长速度和05ZYH33-WT基本相同,但SrtA的表达量却提高了2.4倍。菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性检测结果显示,05ZYH33-srtA^(Δ)菌株的NAG活性和本实验室前期构建的SSU05_0630基因缺失株ssu05_0630^(Δ)相同,检测不到SSU05_0630蛋白的NAG活性,表明SSU05_0630蛋白是SrtA的底物,通过SrtA锚定到SS的表面。05ZYH33-srtAe和05ZYH33-WT菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性无明显差异,即SrtA表达量的提高并没有提高SSU05_0630蛋白在SS表面的锚定量。本研究首次构建了提高SS SrtA表达量的突变株,并对SrtA表达量的提高是否对SS表面蛋白锚定产生影响进行了初步探究,为进一步研究SrtA表达量的提高对SS其他表面蛋白锚定量的影响,以及优化SS表面蛋白展示系统奠定了基础。

关键词：猪链球菌分选酶A 提高表达强启动子胞壁锚定细菌表面展示

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不同来源传染性支气管炎病毒诱导SPF鸡发病的免疫机制研究

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中国畜牧兽医 2021年第12期48卷 4628-4640页

作者：马占邦许丽文王芳芳张莉莉侯雨彤韩宗玺马得莹东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

试验旨在探讨不同来源的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)诱导SPF鸡发病的免疫机制。选用140只1日龄SPF白来航鸡,随机分为4组,3组攻毒组通过滴鼻点眼途径分别接种鸡源IBV强毒株、鸡源IBV弱毒株和野鸡源IBV毒株3个毒... 详细信息

试验旨在探讨不同来源的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)诱导SPF鸡发病的免疫机制。选用140只1日龄SPF白来航鸡,随机分为4组,3组攻毒组通过滴鼻点眼途径分别接种鸡源IBV强毒株、鸡源IBV弱毒株和野鸡源IBV毒株3个毒株,对照组以同种方式接种等量灭菌的磷酸盐缓冲液。在感染后12 h、36 h、72 h、7 d和14 d,每组随机选取5只进行剖检,并分别采集法氏囊、肾脏和气管组织,剩余鸡用于观察临床症状、发病及死亡情况。应用实时荧光定量PCR检测攻毒后不同时间点采集的各组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及部分细胞因子(白细胞介素(interleukin,IL)和干扰素(interferon,IFN))表达量的变化。结果显示,感染不同来源IBV毒株之后仅鸡源IBV强毒株感染组SPF鸡出现抑郁、翅膀下垂、甩头等典型的临床症状,且在感染后5~10 d共有7只死亡,死亡率为20%。病理剖检发现,感染鸡源IBV强毒株的鸡肾脏肿大、尿酸盐沉积和有花斑样病变,而感染野鸡源IBV毒株、鸡源IBV弱毒株和对照组的鸡无明显的眼观病变。实时荧光定量PCR结果显示,在鸡源IBV强毒株组的法氏囊、肾脏和气管3个组织中均检测到病毒。对照组和野鸡源IBV毒株组中均未检测到病毒,鸡源IBV弱毒株组只在部分组织中检测到病毒。在感染后72 h,鸡源IBV强毒株组与其他各组相比,TLR1、TLR2、TLR3、TLR5、TLR7和TLR15基因在法氏囊中的表达量均显著升高(P<0.05),IL-6和IFN-β参与更强烈的抗病毒免疫反应;在感染后7 d,鸡源IBV弱毒株组与其他各组相比,肾脏中TLR2、TLR3、TLR15、TLR21、IL-6和IL-18基因表达量均显著升高(P<0.05)。野鸡源IBV感染后36 h法氏囊组织中IFN-γ基因表达量显著上调(P<0.05)。综上所述,3个IBV毒株中仅鸡源IBV强毒感染引起SPF鸡典型临床发病症状与可视组织病变,且可提高SPF鸡组织中免疫相关因子的基因表达量。本研究结果揭示,不同来源的IBV对SPF鸡的不同致病性与其感染诱导的免疫反应不同有关。

关键词：传染性支气管炎病毒(IBV) 免疫机制 Toll样受体细胞因子

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一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性分析

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中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 801-805,811页

作者：李明慧田井满白晓利刘丽娜李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

2019年11月本实验室从家禽监测样品中分离鉴定到一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/S1/2019(H5N6)(简称CK/HeB/S1/19)。为进一步了解其生物学特点,本实验对其全基因组测序并进行遗传演化分析,结果显示,该病毒... 详细信息

2019年11月本实验室从家禽监测样品中分离鉴定到一株低致病性H5N6亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/S1/2019(H5N6)(简称CK/HeB/S1/19)。为进一步了解其生物学特点,本实验对其全基因组测序并进行遗传演化分析,结果显示,该病毒属于2.3.4.4h分支,碱性裂解位点为PLRESR↓GLF,属于低致病性AIV(LPAIV)。对其各基因节段分别经BLAST比对后发现,其外部基因来源于H5N6亚型AIV,内部基因完全来源于H9N2亚型AIV,推测该分离株为一株重组病毒。将CK/HeB/S1/19病毒株接种SPF鸡及BALB/c小鼠研究其致病性,结果显示,该病毒虽然能够感染鸡,但不能在鸡体内有效复制,而该病毒未经适应就可在3只小鼠的鼻甲和肺中进行复制,对小鼠呈低致病性。本研究为H5亚型AIV的检测和其感染的综合防控提供了参考依据。

关键词：禽流感病毒低致病性 H5N6 进化分析致病性

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鸡白痢沙门氏菌PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1178-1183页

作者：陆瑶丁仕豪曹俊刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立鸡白痢沙门氏菌(***)的快速PCR检测方法,本研究通过比对*** ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在*** ATCC 9120株SEEP 011400~SEEP011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并... 详细信息

为建立鸡白痢沙门氏菌(***)的快速PCR检测方法,本研究通过比对*** ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在*** ATCC 9120株SEEP 011400~SEEP011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并筛选了一对特异性引物,经反应条件的优化,建立了一种能够直接从鸡蛋样品中特异性检测***的PCR方法。并对该方法检测模拟鸡蛋样品的敏感性进行了评价,结果显示:该方法可以针对***特异性的扩增出576 bp的条带,而对其他常见致病性沙门氏菌血清型(31株)和非沙门氏菌(11株)均无扩增条带。该方法对***菌液检测的敏感性为10^(2)cfu/mL,利用本研究建立的方法直接检测污染***的鸡蛋样品时的最低检测限为10^(4)cfu/mL,且只需增菌8 h后,即可检测到10^(2)cfu/mL的***。利用该方法与其他PCR方法对模拟鸡蛋样品进行检测,对比检测结果,结果显示该方法敏感性为10^(4)cfu/mL,高于其他PCR方法。利用该方法对229份临床样品进行检测,结果显示阳性检出率为3.06%(7/229),与其他检测方法结果相符。本研究建立的***鉴别检测方法具有较高的特异性与敏感性,并且能够快速检测出鸡蛋中的***,为***的检测提供了一种快速、有效的方法。

关键词：鸡白痢沙门氏菌 PCR 快速检测

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消毒技术在非洲猪瘟防控中的应用现状与问题

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中国农业科技导报 2021年第4期23卷 93-102页

作者：王巍罗玉子张丽马吉飞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗,我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗,我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施进行防控。消毒是生物安全防控ASF的重要手段。目前针对ASFV的灭活方式多种多样,但其灭活效果还有待进一步检验。当前的ASF分子病原学诊断技术无法确定样品的感染性,因此不能用于准确评价消毒剂对病原的杀灭效果。对ASFV的消毒技术及其作用机理、杀灭效果、优缺点、注意事项等进行了总结,并对当前消毒技术存在的问题以及检测技术的局限性进行了分析,在此基础上对ASFV的消毒剂评价技术进行了探讨,旨在为我国ASF检测技术的创新与完善以及现地防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒灭活技术诊断技术

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B亚型禽偏肺病毒对商品肉鸡的致病性研究

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中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1034-1038页

作者：冯笑艳包媛玲于蒙蒙孟令宅刘鹏王素艳李欣翼张卓张艳萍刘长军王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 扬州大学、江苏动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为研究B亚型禽偏肺病毒(aMPV)对商品肉鸡的致病性,本实验将前期分离的鸡源B亚型aMPV LN16株通过滴鼻的方式感染21日龄商品肉鸡,感染后1 d~7 d观察临床症状,可见感染组肉鸡出现了流鼻涕、鼻痂等临床症状,发病率达100%,空白组肉鸡未出现... 详细信息

为研究B亚型禽偏肺病毒(aMPV)对商品肉鸡的致病性,本实验将前期分离的鸡源B亚型aMPV LN16株通过滴鼻的方式感染21日龄商品肉鸡,感染后1 d~7 d观察临床症状,可见感染组肉鸡出现了流鼻涕、鼻痂等临床症状,发病率达100%,空白组肉鸡未出现任何临床症状。感染后1 d~7 d采集各组肉鸡鼻腔拭子,采用荧光定量PCR检测肉鸡的排毒情况,结果显示,感染组肉鸡的排毒期为感染后1 d~6 d,感染后第3 d达到排毒高峰期(6.31×10^(4)拷贝/200μL),空白组肉鸡未检测到排毒。感染后第4 d采集鸡鼻甲骨、肺脏、气管、哈氏腺,利用荧光定量RT-PCR检测病毒的组织分布,结果显示可以在肉鸡的鼻甲骨、气管、喉头、哈氏腺中检测到该病毒,其中鼻甲骨的病毒拷贝数最高,达3.53×10^(4)拷贝/0.1 g,而空白组鸡未检测到病毒。感染后7 d~21 d内每7 d采集各组鸡血清,采用ELISA方法检测抗体水平,结果显示,感染后第7 d血清抗体全部转阳,且血清抗体效价随着时间的延长呈上升趋势,空白组鸡未检测到抗体。感染后第9 d取各组鸡鼻甲骨、肺脏和气管制作病理切片,观察各组鸡的组织病变,结果显示,商品肉鸡感染B亚型aMPV后上呼吸道出现不同程度的病理损伤,空白组鸡未见异常。本研究结果证实B亚型aMPV对商品肉鸡具有较强的致病性,为商品肉鸡养殖场鸡aMPV病的诊断及防控提供了重要参考依据。

关键词： B亚型禽偏肺病毒肉鸡致病性

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DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立

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中国兽医科学 2021年第2期51卷 169-175页

作者：陈肖韩刘海燕苏世博赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其... 详细信息

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭肠炎病毒,双重荧光定量

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高增殖猪流感重组病毒GX1659/PR8的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1103-1107页

作者：宋祖晨孟飞张丹丹王飞飞刘雅茹陈艳乔传玲陈化兰杨焕良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种... 详细信息

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种SPF胚,经血凝试验、测序筛选获得了一株重组病毒GX1659/PR8。该重组病毒在鸡胚传20代,血凝价均能达到8 log2以上。每5代病毒的全基因组经PCR和测序鉴定,结果显示,PCR产物均无任何缺失或突变,表明GX1659/PR8具有遗传稳定性。分别利用100 EID_(50)剂量的GX1659和GX1659/PR8感染鸡胚,在不同时间测定鸡胚尿囊液的血凝效价和EID_(50),绘制其生长曲线。结果显示,GX1659和GX1659/PR8分别在接种后60 h和48 h时血凝效价达到峰值,GX1659/PR8效价滴度明显高于亲本病毒GX1659。利用亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8的抗原和阳性血清进行交叉HI试验,测定HI效价及交叉HI效价并对抗原性进行分析。结果显示,亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8抗原性无明显差异。本研究拯救出一株具有稳定遗传性和高增殖性能的H3亚型重组病毒GX1659/PR8,为H3N2亚型流感病毒疫苗株的构建奠定了重要基础。

关键词： H3N2流感病毒 PR8 反向遗传技术生物学特性疫苗株

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流感病毒PA蛋白与宿主SSR4蛋白的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1029-1033页

作者：王倩李俊平梁立滨赵玉辉温霞孔凡迪王广文石文军李奇兵姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开发实验室黑龙江哈尔滨150069

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病... 详细信息

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病毒PA蛋白可能存在相互作用的宿主因子,其中之一为Signal sequence receptor subunit 4(SSR4)。为研究流感病毒PA蛋白与宿主蛋白SSR4的相互作用,本研究采用酵母回交试验验证二者之间是否存在相互作用,结果显示PA蛋白与SSR4之间存在相互作用;在真核细胞中利用免疫共沉淀(Co-IP)试验检测,结果进一步证实了PA蛋白与SSR4蛋白之间的相互作用。利用慢病毒包装系统构建SSR4蛋白的过表达细胞系,并感染病毒后进行噬斑滴定,结果显示SSR4过表达可以抑制流感病毒的复制。瞬时转染过表达SSR4后再转染流感病毒聚合酶复合体表达质粒及荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测SSR4蛋白对聚合酶活性的影响,结果显示SSR4过表达后可以显著抑制流感病毒的聚合酶活性。本研究首次证实SSR4可以抑制流感病毒复制,并可使流感病毒RNP聚合酶活性显著降低,上述结果进一步完善了PA蛋白与宿主因子的互作网络,丰富了对宿主因子参与流感病毒复制周期的认识。

关键词：流感病毒 PA蛋白 SSR4蛋白相互作用

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非洲猪瘟病毒A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位分析

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1525-1532页

作者：孙茂文周萍萍王涛李永锋潘力韩玉孙元杨玉莹仇华吉长江大学动物科学学院湖北荆州434023 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位,本研究构建了原核表达质粒pGEX-6p-1-A137R,表达与纯化了A137R蛋白,并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。经间接免疫荧光试验(IFA)分析,抗体效价达1∶25600;Western-blotting... 详细信息

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位,本研究构建了原核表达质粒pGEX-6p-1-A137R,表达与纯化了A137R蛋白,并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。经间接免疫荧光试验(IFA)分析,抗体效价达1∶25600;Western-blotting和IFA证实,该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。利用该抗体分析了ASFV感染原代猪肺泡巨噬细胞中A137R蛋白的表达动力学及其亚细胞定位,发现A137R蛋白为晚期蛋白,主要定位于细胞质,且与ASFV的结构蛋白p72共定位。本研究为进一步解析ASFV A137R蛋白的功能奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 A137R蛋白原核表达多克隆抗体

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