检索结果-内蒙古大学图书馆

中国饲料 2017年第16期 35-39,42页

作者：周妍张圆圆刁晨曦陆涛峰陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011

玉米赤霉烯酮是由镰刀菌产生的类雌激素样真菌毒素。本文结合国内外的研究成果,对玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展进行了综述,为真菌毒素如玉米赤霉烯酮检测方法的探索提供参考。

关键词：玉米赤霉烯酮检测方法研究进展

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水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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实验动物与比较医学 2020年第4期40卷 289-295页

作者：闫文卓陆涛峰周洁赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 贵州中医药大学实验动物研究所贵阳550025 上海实验动物研究中心上海201203

目的建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。方法根据AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,... 详细信息

目的建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法,从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。方法根据AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,绘制标准曲线,并进行特异性、敏感性和稳定性分析。结果建立的标准曲线在1.0×10^2拷贝/μL至1.0×10^8拷贝/μL之间具有良好的线性关系,相关系数(r^2)大于0.994。该方法检测的灵敏度为10^2拷贝/μL,且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应,特异性良好。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%,重复性良好。利用该方法对417份临床组织样品进行检测的结果显示,中国部分地区的AMDV阳性率为81.5%。结论本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR检测方法,可用于AMDV的临床检测和流行病学调查。

关键词：水貂阿留申病水貂阿留申病毒实时荧光定量PCR VP2 检测方法

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MDA5基因敲除小鼠的构建

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新疆农业大学学报 2020年第4期43卷 270-274页

作者：田璐张子博史鑫琪郭慧娟陈洪岩王金泉孟庆文新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用。本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的s... 详细信息

MDA5作为RLRs蛋白家族成员,能特异性的识别较长的双链RNA,激活体内的信号通路,促进Ⅰ型干扰素的表达,在天然免疫系统中发挥着重要作用。本研究利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠MDA5基因第一外显子区域选择一段序列作为靶序列,将含有靶序列的sgRNA和Cas9质粒的体外转录产物显微注射至C57BL/6近交系小鼠的受精卵中,8只F0代首建鼠中5号小鼠为MDA5基因敲除纯合小鼠;将其与野生型(WT)小鼠合笼繁育出MDA5^(+/-)小鼠,再通过全同胞合笼交配的方式获得纯合子小鼠。基因组PCR后检测显示F2代小鼠中有4只纯合小鼠,进一步RT-PCR结果显示MDA5敲除小鼠各脏器中MDA5基因均未表达,表明基于CRISPR/Cas9技术的MDA5基因敲除小鼠模型构建成功。为进一步研究MDA5在天然免疫应答机制和抗病毒感染等方面提供有价值的模型。

关键词： MDA5 CRISPR/Cas9 基因敲除动物模型

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Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法的建立

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：赵丽丽刘海燕徐丽晶王怡平陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏... 详细信息

目的为了建立快速检测Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒PCR方法。方法根据NCBI公布的来自我国不同省份的的Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成两对引物,在一个PCR反应管中进行PCR反应,并进行条件优化。结果该方法敏感性高,最低能检出5.3pg Ⅰ型鸭肝炎病毒和2.7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA模板。其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和流感病毒(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒检测结果为阳性。用建立的方法检测了江苏徐州采集的100份样品,Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的阳性率分别为1.2%和26%。结论建立了Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭瘟病毒一步法PCR 应用

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 249-251页

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只出现CHD1-Z。结论本文建立的方法可作为禽类性别的有效鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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H9N2亚型AIV对海兰白鸡感染和传播特性的研究

H9N2亚型AIV对海兰白鸡感染和传播特性的研究

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：孟庆文周长良王伟邓瑞坡臧凤霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨

目的建立H9N2亚型禽流感病毒感染海兰白鸡的感染模型,了解其对海兰白鸡的致病性,为评价抗流感转基因鸡研究奠定基础.方法将80只4周龄的海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只;攻毒剂量为100 ～ 107 EID50/0.4mL,攻毒... 详细信息

目的建立H9N2亚型禽流感病毒感染海兰白鸡的感染模型,了解其对海兰白鸡的致病性,为评价抗流感转基因鸡研究奠定基础.方法将80只4周龄的海兰白鸡随机分为8组,每组10只,其中感染组5只,同居组5只;攻毒剂量为100 ～ 107 EID50/0.4mL,攻毒方式为滴鼻和点眼,感染24h后放入同居组.感染14d内每天进行临床观察,采集咽拭子和泄殖腔拭子用于病毒分离,感染后7、10、14d测定HI抗体滴度.结果 4周龄海兰白鸡感染H9N2流感病毒后未出现明显的临床症状;攻毒剂量为100～ 101 EID50/0.4mL的感染组和同居组均未分离到病毒;攻毒剂量为102～ 103 EID50/0.4mL的感染组排毒期为2～6d,同居组排毒期为4～ 6d;攻毒剂量为104 ～ 107 EID50/0.4mL感染组排毒期为1～ 6d,同居组排毒期为2～8d;攻毒剂量为102～107 EID50/0.4mL感染组和同居组鸡分别于感染后7和10d开始产生抗体,第14d感染组和同居组鸡的平均抗体滴度(log 2)分别为7.8±1.4和6.7±1.1.结论该毒株使4周龄海兰白鸡全部感染的最低攻毒剂量为103 EID50/0.4mL,以106 EID50/0.4mL的攻毒剂量感染鸡,能刺激感染组与同居组鸡产生较高的HI抗体,建立了海兰白鸡的H9N2亚型禽流感病毒感染模型,为H9N2亚型流感病毒的致病机理及表达抗流感基因的转基因鸡研究奠定了基础.

关键词： H9N2 禽流感病毒海兰白鸡感染传播

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 244-248页

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件... 详细信息

目的在前期高通量测序分析的基础上,进一步利用荧光定量PCR验证miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病(MD)抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况。方法通过经优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异表达显著性分析结果却不完全相同。结论尽管差异表达显著性分析结果不完全一致,但两种方法的结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关。

关键词： miR-200b 马立克氏病(MD) 抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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适配体对霉菌毒素致小鼠肠道菌群失调的缓解作用

适配体对霉菌毒素致小鼠肠道菌群失调的缓解作用

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：张圆圆王玉娥张贺赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069

目的：探索已筛选获得的适配体对玉米赤霉烯酮(ZEN)引起的小鼠肠道菌群失调的缓解作用.方法：采用体重19.43±1.8gSPF雌性BABL/c小鼠12只,随机分为三组,于腹腔左侧注射ZEN甲醇溶剂对照组(甲醇浓度0.5 μL/mL)、ZEN组(5 mg/mL)、ZEN...

目的：探索已筛选获得的适配体对玉米赤霉烯酮(ZEN)引起的小鼠肠道菌群失调的缓解作用.方法：采用体重19.43±1.8gSPF雌性BABL/c小鼠12只,随机分为三组,于腹腔左侧注射ZEN甲醇溶剂对照组(甲醇浓度0.5 μL/mL)、ZEN组(5 mg/mL)、ZEN组(5 mg/mL)各100μL24h后,对应以上分组腹腔右侧分别注射生理盐水、生理盐水、获得适配体Z100处理组(1 μmol/L)各100μL,每组3只,24 h后采集新鲜粪便,利用Illumina HiSeq 2500高通量测序方法,对样品16S rDNA基因的两个高变区(V3-V4)进行测序分析,并进行了 α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析;另采集新鲜粪便,测定粪便中ZEN的含量.

关键词：

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表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析

表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：王伟尹海畅臧凤霞周长良陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠，为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上，运用PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot方法对转基因小... 详细信息

目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠，为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上，运用PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot方法对转基因小鼠进行鉴定评价，选取阳性转基因小鼠与野生型(WT)小鼠杂交繁育F1代转基因小鼠。结果经PCR检测证实在转基因小鼠尾、肺、肝、心脏和脾脏均有外源基因的整合;RT-PCR证实抗菌肽基因在小鼠各组织细胞中转录;尾组织中Western blot同样证实了外源基因在转基因小鼠体内表达;共获得21只F0代小鼠，其中有5只小鼠在DNA、RNA以及蛋白水平的检测为阳性。结论本研究建立了转基因动物的检测方法，为进一步在体内评价抗菌肽抑菌活性奠定了基础。

关键词： cecropin-XJ 转基因小鼠模型

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抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体

抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王伟李越赵颖慧臧凤霞周长良孟庆文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与... 详细信息

本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与流感病毒中和效果较好的单克隆抗体。以单抗杂交瘤细胞RNA反转录产物为模板，PCR成功扩增了轻(321 bp)、重链(360 bp)基因。选用(Gly4Ser),15肽序列的Linker序列，以重叠延伸拼接法成功组建了3条单链抗体基因，构建真核表达载体pCDNA31-ScFvo Lipoinfectamine2000转染MDCK细胞，在细胞水平上对3条单链抗体抗流感病毒活性进行了检测，间接免疫荧光实验结果表明单链抗体Q1-B1-BB具有一定的抑制流感病毒复制的能力，为以后小鼠模型验证其抗流感病毒活性奠定了基础，为抗流感转基因动物研究提供候选基因。

关键词：鸡流感病毒抗病毒基因单链抗体

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