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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：易诚廉传江王瑞琪韩凌霞杨春文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

研究背景：马立克氏病（MD) 是由马立克氏病病毒（MDV) 引起的一种高度传染的病毒性肿瘤疾病，对养禽业造成巨大经济损失。不同品种（系）鸡对MD具有不同的抗性，遗传抗性较强的鸡可能会长期停留在潜伏感染阶段，经历短暂的晚期溶细胞... 详细信息

研究背景：马立克氏病（MD) 是由马立克氏病病毒（MDV) 引起的一种高度传染的病毒性肿瘤疾病，对养禽业造成巨大经济损失。不同品种（系）鸡对MD具有不同的抗性，遗传抗性较强的鸡可能会长期停留在潜伏感染阶段，经历短暂的晚期溶细胞感染后形成肿瘤，而易感鸡体内病毒不断增殖，未出现肿瘤即早期死亡，造成抗性鸡与易感鸡肿瘤形成差异的分子调控机制至今并未阐明。

关键词： gga-miR-21-5p SATB1 马立克氏病肿瘤增殖迁移

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农用实验动物猪感染模型的研究概况

农用实验动物猪感染模型的研究概况

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王玉娥陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平西路678号 150069

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肠道菌群在宿主免疫应答中的作用及机制研究进展

肠道菌群在宿主免疫应答中的作用及机制研究进展

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：张贺王玉娥陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江省哈尔滨市香坊区哈平西路678号 150069

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鸭肠炎病毒感染诱导鸭胚成纤维细胞γ干扰素上调表达及初步机制的研究

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实验动物与比较医学 2018年第2期38卷 86-90页

作者：李思琪尹海畅赵丽丽王怡平金建丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

目的探讨鸭肠炎病毒(DEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)中γ干扰素(IFNγ)的表达情况及初步机制。方法分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF总RNA,反转录成cDNA,使用特异性引物,运用荧光定量PCR方法 ,检测IFNγ及几个相关干扰素刺激基因... 详细信息

目的探讨鸭肠炎病毒(DEV)诱导鸭胚成纤维细胞(DEF)中γ干扰素(IFNγ)的表达情况及初步机制。方法分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF总RNA,反转录成cDNA,使用特异性引物,运用荧光定量PCR方法 ,检测IFNγ及几个相关干扰素刺激基因(ISGs)mRNA水平的变化。结果感染DEV的细胞相对于未感染的细胞,IFNγ的mRNA在24 h、36 h、48 h、60 h均显著上调,且相关ISGs包括抗黏液病毒基因(Mx)、DEAD框蛋白50(DDX50,是一种ATP依赖的RNA解旋酶)、2'-5'寡腺苷酸合成酶L(OASL)等基因的mRNA表达水平也均显著上调。结论 DEV感染DEF能够诱导IFNγ产生及相关ISGs表达的上调。

关键词：鸭肠炎病毒(DEV) 鸭胚成纤维细胞(DEF) γ干扰素(IFNγ) 干扰素刺激基因(ISGs) 上调表达

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应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

应用PCR方法快速鉴定SPF金定鸭性别

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：徐丽晶孙畅陆涛峰陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室东北农业大学生命科学学院

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物... 详细信息

目的利用PCR方法鉴定SPF金定鸭的性别。方法根据已有的报道合成一对禽类性染色体上的染色质解螺旋蛋白DNA结合蛋白1(CHD1)基因的通用引物gCHD。采集培育中的85只SPF金定鸭血液样品,提取血液基因组DNA,进行PCR扩增。通过分析PCR扩增产物凝胶电泳后的条带数判定禽类性别。结果 PCR扩增产物经琼脂糖电泳分析后,雌性鸭样品扩增出CHD1-Z和CHD1-W,而雄性鸭样品只扩增出CHD1-Z。结论这种PCR方法可作为SPF动物育种过程中有效的鉴定方法。

关键词： SPF金定鸭性别鉴定 PCR

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鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

鸭肠炎病毒感染DEF细胞诱导干扰素γ上调表达

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：李思琪尹海畅陈洪岩赵丽丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室牡丹江师范学院生命科学与技术学院

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别... 详细信息

鸭肠炎病毒(DEV)传播速度快,发病率和死亡率均较高,严重的影响了国内水禽业的发展。干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。且有关感染DEV的细胞与干扰素γ的关系鲜少见报道。本研究中,分别提取感染DEV后24h、36h、48h、60h的DEF细胞总RNA,进行反转录后,采用荧光定量PCR的方法,检测鸭IFNγ及干扰素刺激因子的表达量变化情况。结果显示:鸭IFNγ及干扰素刺激因子Mx、DDX50、OASI在mRNA水平上调。实验表明,DEV感染DEF细胞能够诱导鸭IFNγ产生及其相关信号通路的激活。本研究为进一步探索DEV感染DEF细胞激活Ⅱ型干扰素的机制提供理论基础,进而为水禽病的防控、净化提供思路。

关键词：鸭肠炎病毒鸭胚成纤维细胞干扰素干扰素刺激因子上调表达

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SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

SPF鸡不同生长阶段粪便菌群组成及多样性研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：周妍刁晨曦张圆圆于海波陆涛峰赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验哈尔滨150069

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多... 详细信息

目的:提供健康SPF鸡不同生长阶段肠道菌群的组成及多样性数据。方法:采集10日龄、12周龄、23周龄和52周龄SPF鸡粪便，利用Illumina HiSeq2500高通量测序方法，对样品16S rRNA基因的两个高变区（V3-V4)进行测序分析，并进行了α-多样性指数、β-多样性指数和粪便群落特征分析。结果:四个生长阶段粪便样品菌群具有相似的较高的丰富度和良好的均匀度，物种多样性无显著差异（P＞0.05);厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门（Bacteroidetes)丰度占95％以上;乳杆菌属(Lactobacillus)、链球菌属（Streptococcus)、拟杆菌属(Bacteroides)、肠球菌属(Enterococcus)为优势菌属，不同时期丰度差异达显著水平（P＜0.05)。结论:四个生长阶段菌群组成多样，且优势菌群主要为有益菌。该实验结果能够为SPF鸡品质评定、健康监测和安全性评价提供依据。

关键词：实验用鸡肠道菌群物种多样性品质评定健康监测安全性

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鹅源星状病毒衣壳蛋白的原核表达

鹅源星状病毒衣壳蛋白的原核表达

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：蒲路莎苏世博陈肖韩赵丽丽陈洪岩黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆158308 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

应用RT-PCR方法扩增了 GoAstV(Goose astrovirus)编码内衣壳ORF2蛋白的基因2115bp,将ORF2基因克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中得到了表达.通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了大小约106kDa的ORF2蛋白,与理论值相符.We...

应用RT-PCR方法扩增了 GoAstV(Goose astrovirus)编码内衣壳ORF2蛋白的基因2115bp,将ORF2基因克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21中得到了表达.通过SDS-PAGE分析表明,重组菌诱导后得到了大小约106kDa的ORF2蛋白,与理论值相符.Western-blotting结果显示,ORF2蛋白可被鼠抗GoAstV阳性血清识别.本实验利用原核表达系统成功高效地表达了 GoAstV ORF2蛋白,融合蛋白以包涵体形式存在.

关键词：

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猫细小病毒抗体ELISA检测方法建立与初步应用

猫细小病毒抗体ELISA检测方法建立与初步应用

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：闫文卓周洁胡建华刘铁龙张圆圆赵丽丽陈洪岩陆涛峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069 上海实验动物研究中心上海201203 河南省济源市动物卫生监督所河南济源454650

[目的 ]建立猫细小病毒(feline panleukopenia virus,FPV)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FPV抗体的检测.[方法]利用猫肾传代细胞(CRFK)增殖FPV病毒,回收的培养物经纯化后制备FPV抗原,通过对纯化抗原和山羊抗猫IgG-HRP的最佳工作浓...

[目的 ]建立猫细小病毒(feline panleukopenia virus,FPV)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FPV抗体的检测.[方法]利用猫肾传代细胞(CRFK)增殖FPV病毒,回收的培养物经纯化后制备FPV抗原,通过对纯化抗原和山羊抗猫IgG-HRP的最佳工作浓度进行确定,建立FPV抗体ELISA检测方法,并进行特异性、敏感性、稳定性进行测定.[结果]抗原和二抗的最佳工作浓度分别为5μg/mL和1∶ 6000,批次内和批次间的变异系数分别为8.68％和7.14％,检测临床血清的灵敏度大于1∶5000,且与猫疱疹病毒 1 型(feline herpesvirus 1,FHV-1)和猫杯状病毒(feline calicivurus,FCV)均无交叉反应,与国外试剂盒符合率达到90.7％.结论 ]建立的抗体ELISA方法重复性、稳定性良好,特异性和敏感性良好,可用于猫FPV抗体检测.

关键词：

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具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

具有中和活性的鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定

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第九届北京实验动物科学国际论坛

作者：王怡平张忠伟蒲路莎赵丽丽陈洪岩吉林省松原市宁江区畜牧业管理局吉林松原 138001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间...

为制备抗鸭肠炎病毒(DEV)的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行鉴定,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提纯DEV鸭胚成纤维细胞适应毒,以此作为抗原免疫BALB/c小鼠,随后取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,有限稀释法克隆杂交瘤细胞株,经间接ELISA筛选,获得了 1株稳定分泌抗DEV MAb的杂交瘤细胞株2E3.鉴定结果显示,该MAb为IgM亚类,ELISA效价可达到1∶105以上;间接免疫荧光试验(IFA)中MAb可与细胞中增殖的DEV结合,Western Blot试验中MAb不与变性病毒蛋白作用,表明该MAb可能是构象表位的单抗;病毒中和试验表明,该MAb具有较强的病毒中和活性.本试验获得的一株具有DEV中和活性的MAb杂交瘤细胞株,为建立DEV的检测方法和DEV的相关研究提供了材料支持.

关键词：

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