检索结果-内蒙古大学图书馆

利用重组慢病毒载体共表达Cas9-sgRNA构建TLR4基因敲除DF1细胞系

中国兽医科学 2018年第8期48卷 958-964页

作者：庞中兵王伟刘赛宝王辉陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

Toll样受体4（TLR4）是TLRs家族成员之一,可识别革兰阴性菌细胞壁脂多糖（LPS）和某些病毒蛋白,进而激活天然免疫应答,在细菌和病毒感染性疾病的发生过程中起重要作用。本研究靶向禽源TLR4基因第一外显子,设计、构建了2个sg RNA的CRISPR... 详细信息

Toll样受体4（TLR4）是TLRs家族成员之一,可识别革兰阴性菌细胞壁脂多糖（LPS）和某些病毒蛋白,进而激活天然免疫应答,在细菌和病毒感染性疾病的发生过程中起重要作用。本研究靶向禽源TLR4基因第一外显子,设计、构建了2个sg RNA的CRISPR/Cas9双质粒表达系统,转染禽DF1细胞。流式细胞仪分选、测序验证了在家禽DF1细胞系成功敲除了TLR4基因。然后利用GV393慢病毒表达载体,构建了CAG启动子启动Cas9的共表达载体Lv-CAG-Cas9-U6-sg RNA。通过转染、流式分选、培养单细胞克隆、靶基因组测序以及Western-blot检测,筛选获得1株TLR4基因敲除的DF1细胞系。结果表明,TLR4基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。本研究验证了共表达Cas9和sg RNA可以在禽源细胞系实现基因编辑,为利用重组慢病毒共表达Cas9和sg RNA策略探索构建敲除鸡模型研究奠定了理论基础和科学依据,也为研究禽TLR4基因功能、家禽天然免疫应答机制提供了细胞模型。

关键词： CRISPR/Cas9 DF1细胞系 TLR4 慢病毒表达载体基因敲除

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡OV启动子表达HA对禽流感病毒攻击提供完全保护

引用

中国生物工程杂志 2018年第7期38卷 67-74页

作者：李亚芳赵颖慧刘赛宝王伟曾为俊王金泉陈洪岩孟庆文新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

鸡卵清蛋白（ovalbumin,OV）基因5＇调控序列是构建鸡输卵管生物反应器的首选调控元件。以EGFP为报告基因,构建OV启动子真核表达载体,转染原代输卵管上皮细胞和CHO细胞,筛选得到1.1kb的高效OV启动子。构建1.1kb OV启动子表达H5N1亚型禽... 详细信息

鸡卵清蛋白（ovalbumin,OV）基因5＇调控序列是构建鸡输卵管生物反应器的首选调控元件。以EGFP为报告基因,构建OV启动子真核表达载体,转染原代输卵管上皮细胞和CHO细胞,筛选得到1.1kb的高效OV启动子。构建1.1kb OV启动子表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白真核表达载体pOV_（1.1k）-HA,转染CHO细胞。PCR、RT-PCR鉴定结果证明HA基因整合至CHO细胞基因组,并进行转录;SDS-PAGE、Western blot及HA试验结果证明HA蛋白在CHO细胞内的表达,并具有免疫反应性和血凝活性。以纯化的HA蛋白免疫4周龄SPF鸡,2周后加强免疫一次,加强免疫3周HI抗体水平为6.3log2;以10~6EID_（50）H5N1（A/Goose/Guangdong/1/96）亚型禽流感病毒鼻腔接种SPF鸡,免疫组100%存活,无排毒现象,对照组100%死亡。结果表明,筛选的1.1kb OV启动子可有效驱动HA蛋白表达,表达的HA蛋白免疫SPF鸡对禽流感病毒攻击提供完全保护;为鸡输卵管生物反应器表达保护性抗原和珍贵药物蛋白奠定了基础。

关键词：鸡卵清蛋白启动子 HA 禽流感病毒免疫保护输卵管生物反应器

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

部分兽医相关单位Ⅱ级生物安全柜的性能测试与分析

引用

实验动物与比较医学 2022年第2期42卷 111-116页

作者：马文杰张伟王伟苏世博郭慧娟张贺王梓刘怀然陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽类实验动物资源库黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的了解兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜的性能与使用情况。方法测试哈尔滨市3家兽医相关单位正在使用的126台Ⅱ级生物安全柜,依据相关标准针对检测结果进行性能指标的判定与分析,了解生物安全柜的使用情况。结果126台Ⅱ级生物安全... 详细信息

目的了解兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜的性能与使用情况。方法测试哈尔滨市3家兽医相关单位正在使用的126台Ⅱ级生物安全柜,依据相关标准针对检测结果进行性能指标的判定与分析,了解生物安全柜的使用情况。结果126台Ⅱ级生物安全柜性能检测总合格率为17.5%。Ⅱ级生物安全柜的外观完整性、工作区洁净度、送排风高效过滤器检漏、气流模式、流入气流流速、下降气流流速、照度、噪声及报警和联锁系统共9个项目的检测总合格率分别为100%、100%、100%、100%、49.2%、92.9%、68.3%、22.2%和100%。结论兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜性能检测总合格率较低,应对生物安全柜做定期性能检测,加强运行维护管理,及时排除生物安全隐患,防止实验室感染事故发生。

关键词：生物安全柜性能检测兽医实验室

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

自主研发生物安全型换笼工作台的性能检测与评价

引用

实验动物与比较医学 2022年第2期42卷 102-110页

作者：苏世博马文杰王伟郭慧娟张贺王梓康雷刘守琦刘怀然司昌德苟春天张伟陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室国家禽类实验动物资源库黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的对自主研发的生物安全型换笼工作台进行功能检测与安全性评价。方法依据YY 0569—2011《Ⅱ级生物安全柜》、RB/T 199—2015《实验室设备生物安全性能评价技术规范》等标准对自主研发的由深圳泓腾生物科技有限公司生产的生物安全型... 详细信息

目的对自主研发的生物安全型换笼工作台进行功能检测与安全性评价。方法依据YY 0569—2011《Ⅱ级生物安全柜》、RB/T 199—2015《实验室设备生物安全性能评价技术规范》等标准对自主研发的由深圳泓腾生物科技有限公司生产的生物安全型换笼工作台(HT-1303)的各项性能指标进行检测,并判定其有效性及安全性。结果换笼工作台的主体外观完整性和稳定性、工作区洁净度、流入气流流速、下降气流流速、照度、噪声、气流流向、高效过滤器等检测效果良好,达到Ⅱ级生物安全柜标准。污染物品回收舱及器物表面灭菌舱的气密性效果良好,其尺寸、灭菌笼盒数量等还需进一步改进。结论本团队研制的生物安全型换笼工作台可实现整机正常运行,其各项指标合格,能够完成负压环境下独立通风笼具的更换,并保证操作者、实验对象及环境的安全。

关键词：换笼工作台性能检测生物安全

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立

引用

中国兽医科学 2021年第2期51卷 169-175页

作者：陈肖韩刘海燕苏世博赵丽丽陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其... 详细信息

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-I和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中I型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性。结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号。而且其灵敏度高,对DHV-I和DEV的最小检出量均为200拷贝。利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出I型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8%),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45%)。上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-I和DEV双重荧光定量PCR方法。

关键词： Ⅰ型鸭肝炎病毒鸭肠炎病毒,双重荧光定量

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用CRISPR/Cpf1技术构建HEK293细胞DDX21基因稳定敲除株及功能鉴定

引用

中国兽医学报 2020年第2期40卷 257-263页

作者：鲁国涛王辉曾为俊邵玉乐许曼陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

利用CRISPR/Cpf1基因编辑技术构建DDX21基因稳定敲除的细胞株,并检测其生物学功能。设计、构建靶向DDX21基因向导RNA表达载体,与Cpf1表达载体共转染HEK293细胞,通过流式筛选、基因测序、Western blot和细胞增殖能力检测鉴定细胞株;荧光... 详细信息

利用CRISPR/Cpf1基因编辑技术构建DDX21基因稳定敲除的细胞株,并检测其生物学功能。设计、构建靶向DDX21基因向导RNA表达载体,与Cpf1表达载体共转染HEK293细胞,通过流式筛选、基因测序、Western blot和细胞增殖能力检测鉴定细胞株;荧光定量PCR检测病毒感染后模式识别受体(TLR-3、TLR-7、MDA-5)、Ⅰ型干扰素、IL-6以及抗病毒蛋白OAS mRNA水平表达情况。结果显示:成功筛选到2株DDX21基因敲除的细胞株,蛋白免疫印迹显示DDX21蛋白不表达;与野生型(wild type,WT)相比敲除株形成细胞单层的时间明显延长(P<0.01);H9N2亚型禽流感病毒感染试验表明,模式识别受体TLR-3、MDA-5的mRNA表达水平上调,TLR-7表达水平无明显差异,IFN-α、IFN-β、IL-6及抗病毒蛋白OAS的mRNA表达水平下调,表明DDX21基因敲除阻断了DDX21-TRIF-MyD88信号通路;TCID50测定结果显示,差异最高可达到WT的3.01倍,表明DDX21基因敲除后流感病毒复制增加。本研究利用CRISPR/Cpf1系统获得2株DDX21基因稳定敲除的HEK293细胞株,为深入研究DDX21基因功能、病毒感染的天然免疫应答和调控研究奠定理论基础。

关键词： DDX21基因 H9N2亚型禽流感病毒 CRISPR/Cpf1 HEK293细胞基因敲除

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡自然杀伤细胞的分离与免疫表型分析

引用

中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 236-238页

作者：杨超张晓娜张园华廉传江文辉强陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研究鸡自然杀伤(NK)细胞,本实验采用冷胰酶消化法消化14日胚龄鸡胚脾脏组织,分离收获鸡胚脾脏淋巴细胞,在含有重组鸡白介素-2和条件培养基的IMDM培养液中培养48 h,收获悬浮细胞,暂时命名为TCR0细胞(即鸡NK细胞)。流式前向角和侧向角... 详细信息

为研究鸡自然杀伤(NK)细胞,本实验采用冷胰酶消化法消化14日胚龄鸡胚脾脏组织,分离收获鸡胚脾脏淋巴细胞,在含有重组鸡白介素-2和条件培养基的IMDM培养液中培养48 h,收获悬浮细胞,暂时命名为TCR0细胞(即鸡NK细胞)。流式前向角和侧向角分析显示培养的TCR0细胞中85.1%的细胞大小均一,颗粒度一致;瑞氏吉姆萨染料染色结果表明TCR0细胞内一侧含有嗜酸性大颗粒,符合鸡NK细胞的形态特征;流式细胞术单克隆抗体染色结果显示,TCR0细胞中,97.4%高表达MHCⅠ类分子,30.8%低表达CD8a,不表达T细胞表面标记CD3和B细胞表面标记CD4和Bu-1,符合鸡NK细胞表面标记特点。本实验是国内成功分离并纯化鸡NK细胞的首次报道。

关键词：鸡自然杀伤细胞分离与培养免疫表型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索

引用

中国兽医杂志 2019年第7期55卷 3-7页

作者：杨丽君张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染过程中的作用,采用STAT3特异性siRNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和Western Blot试验显示,其能够明显降低STAT3的mRNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR试验,显示当STAT3的mRNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,Western Blot试验结果也证实抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性siRNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因MxA、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的mRNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了试验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型的建立

引用

中国兽医科学 2017年第10期47卷 1257-1263页

作者：王伟尹海畅吕兴峰刘思国陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)是引起人类食源性疾病的重要革兰阴性菌之一,可引起禽、家畜等动物较为严重的感染症状。本研究为了建立肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型,标准菌株SE 50336分别以1×10~8、1×10~7、1×0~6... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)是引起人类食源性疾病的重要革兰阴性菌之一,可引起禽、家畜等动物较为严重的感染症状。本研究为了建立肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型,标准菌株SE 50336分别以1×10~8、1×10~7、1×0~6、1×10~5、1×10~4CFU/mL的剂量通过口腔灌注方式感染6周龄ICR雌鼠,每组10只,以接种PBS的10只小鼠作为对照组,测定肠炎沙门菌对ICR小鼠的半数致死量(LD_(50))。将40只ICR雌鼠随机分成两组,以测定的LD_(50)剂量接种肠炎沙门菌,通过临床症状、体重变化、组织病理学、组织中细菌载量以及TNF-α与IL-6表达水平评价肠炎沙门菌对小鼠的致病性。结果,标准菌株SE 50336对ICR小鼠的LD_(50)为1×10^(5.67)CFU/mL。感染后第3天,小鼠出现采食量下降、活动减少、皮毛色泽变暗、畏寒扎堆等症状;感染后第5天,小鼠的平均体重较对照组呈现下降趋势,后期开始恢复。组织病理学结果显示,肝脏出现灶状坏死,形成血栓,出现坏死细胞;脾脏先后出现纤维素性坏死性脾炎,白髓内淋巴细胞减少,呈小空泡状,出现坏死灶。菌落载量分析发现,细菌载量随着感染进程而升高,在脾脏中繁殖速度最快,载量也最高,肝脏次之。定量PCR结果显示,TNF-α表达水平呈升高趋势,而IL-6表达水平降低。上述结果表明,本试验成功建立了肠炎沙门菌标准菌株SE50336感染ICR小鼠的模型,为肠炎沙门菌感染与致病机制的研究提供了有价值的动物模型,也为表达抗菌肽转基因小鼠抗肠炎沙门菌的评价奠定了基础。

关键词：肠炎沙门菌 ICR小鼠感染模型炎性细胞因子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

假病毒技术在猪病原研究中的应用

引用

中国兽医科学 2023年第6期53卷 764-771页

作者：刘弘毅陈洪岩夏长友高彩霞中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、实验动物与比较医学创新团队、国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069

假病毒作为一种安全和便捷的研究工具,在病毒学尤其是在高致病性病毒基础研究和疫病防控研究中发挥着重要作用。本文通过介绍假病毒的定义和特性、分类和构建、常见的包装系统和报告基因,并重点阐述了假病毒在猪病原研究中的应用,旨在... 详细信息

假病毒作为一种安全和便捷的研究工具,在病毒学尤其是在高致病性病毒基础研究和疫病防控研究中发挥着重要作用。本文通过介绍假病毒的定义和特性、分类和构建、常见的包装系统和报告基因,并重点阐述了假病毒在猪病原研究中的应用,旨在为假病毒的发展与猪重要疫病的防控研究提供技术参考。

关键词：假病毒猪病原研究进展应用

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：