检索结果-内蒙古大学图书馆

实验动物科学 2020年第3期37卷 1-5页

作者：孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方... 详细信息

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方法,分析了MDCK在PolyⅠ∶C处理和接种CAV-1后细胞内各IFN及受体分子转录水平的相对含量。结果正常MDCK细胞内存在较高含量的IFN-λ3R且含量显著高于其他IFN及受体分子的转录水平;用PolyⅠ∶C处理MDCK细胞24 h后,IFN-λ1R、IFN-λ3和IFN-λ3R的表达量均显著性上调,而IFN-β、IFN-λ1和IFNAR1几乎没变化;接种CAV-1后,IFN-α的含量急剧上升至6倍。结论MDCK细胞存在不同水平浓度的IFN分子及其受体转录产物,且在PolyⅠ∶C刺激和腺病毒感染时受体分子的表达谱不同。

关键词：犬肾细胞系干扰素受体转录表达水平

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主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单抗的制备

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中国实验动物学报 2019年第2期27卷 200-207页

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELIS... 详细信息

目的制备鸭抗原处理相关转运体(TAP)特异性单抗,为深入利用实验鸭开展免疫学研究提供实验材料。方法利用大肠埃希菌诱导表达主要组织相容性复合体(MHC)单倍型HBW-SPF鸭TAP蛋白肽结合区片段,表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠,采用ELISA技术筛选特异性单抗分泌杂交瘤细胞株。将阳性细胞株制备小鼠腹水,作为一抗,与多次截短表达TAP蛋白肽结合区进行蛋白免疫印迹试验,鉴定单抗针对的抗原表位。通过间接免疫荧光试验比较该单抗对实验鸭和鸡外周血淋巴细胞的反应性,利用免疫组织化学技术检测对SPF鸡、SPF鸭、鹌鹑、鹅和SPF猪的特异性。结果获得一株鸭TAP单抗1A6,抗原表位位于^(297)NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI^(322),对鸡和鸭外周血淋巴细胞具有免疫荧光反应性;在鸡和鸭的肠黏膜固有层检测到大量特异性信号,在猪、鹌鹑和鹅没有检测到信号。结论获得了一株具有鸡和鸭反应性的抗原转运相关体特异性的单抗,可运用于禽类实验动物在禽病学和禽免疫学方面的研究。

关键词：主要组织相容性复合体单倍型鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体特异性

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STAT3在猪流行性腹泻病毒感染的作用及机制初步探索撤回

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中国预防兽医学报 2018年

作者：杨丽君郭龙军张健许嘉宇张璐冯力陈洪岩王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为探究信号传导及转录激活因子3（STAT3）在猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋... 详细信息

为探究信号传导及转录激活因子3（STAT3）在猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染过程中的作用,本研究采用STAT3特异性si RNA处理HEK293和IPEC细胞,作用24 h后,通过荧光定量PCR和western blot检测结果显示其能够明显降低STAT3的m RNA水平和蛋白水平;在此条件下接种PEDV,通过荧光定量PCR检测,显示当STAT3的m RNA水平降低时能够显著抑制PEDV的RNA水平,western blot实验结果也显示抑制STAT3内源性表达能够显著抑制PEDV复制。为进一步研究STAT3的作用机制,采用STAT3特异性si RNA处理这两种细胞,24 h后经过荧光定量PCR检测发现敲低STAT3后,干扰素刺激基因Mx A、ISG15以及IFN-β,IFN-λ的m RNA水平均显著升高。本研究对于进一步阐明STAT3参与PEDV感染引发的IFN抗病毒反应提供了实验依据。

关键词： STAT3 PEDV IFN

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MHC单倍体型无特定病原体鸭的培育

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实验动物科学 2018年第4期35卷 14-20页

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别... 详细信息

目的培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭。方法以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别利用Tap1基因组短串联重复序列(STR)、TAP2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列的基因型分型,连续选育主要组织相容性复合体(MHC)单倍型SPF鸭。结果 F0代和F1代鸭的STR结果完全一致;F2和F3代鸭的Tap1和Tap2基因组序列完全纯合。连续6个世代的Tap2基因组序列分析,B3群鸭有2个位点发生突变,B1、B2和B4遗传学稳定。结论成功建立了4个MHC单倍体型SPF鸭群B1、B2、B3和B4,为深入开展鸭的免疫遗传学研究提供了实验动物支撑条件。

关键词：鸭主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型抗原处理相关转运体

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兽用疫苗中替代方法的研究进展

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实验动物科学 2018年第1期35卷 67-71页

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用疫苗效力检验和安全检验中替代方法的应用及研究进展,并提出适合建立替代方法的兽用疫苗,以期为我国兽用疫苗替代方法研究提供思路。

关键词：兽用疫苗安全性检验效力检验替代

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抗原处理相关转运体基因多态性与疾病相关性的研究进展

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 252-256页

作者：王兴童陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机... 详细信息

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机体产生细胞免疫应答。某些特定的人类疾病同TAP的多态性相关,包括多种肿瘤疾病、自身免疫疾病和传染性疾病等。本文就实验动物的TAP基因在与疾病相关性方面的比较医学研究进展做一综述。

关键词：抗原处理相关转运体(TAP) 多态性疾病相关性

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鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 240-243页

作者：牛银杰刘柏含赵丽丽孙畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blo... 详细信息

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blotting检测VP3抗血清与VP3蛋白的反应性。GPVH株鹅胚尿囊液接种SPF绍兴麻鸭胚和其成纤维细胞,通过PCR反应和间接免疫荧光方法,检测GPV在鸭胚及其成纤维细胞中的增殖。结果成功制备了VP3的兔抗血清,同时GPV在鸭胚及其成纤维细胞中进行良好增殖。结论 VP3抗血清的制备及GPV在绍兴麻鸭鸭胚及成纤维细胞中的增殖实验为GPV分子生物学特性及致病机制的研究奠定基础。

关键词：鹅细小病毒(GPV) VP3基因 VP3抗血清增殖

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去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达

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实验动物科学 2017年第2期34卷 16-20,25页

作者：彭蔚宇王丽廷王兴童杨柳孟兴陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 山西农业大学动物科技学院太谷030801

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-... 详细信息

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克隆入含有报告基因e GFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M。分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位。结果通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euchIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低。结论去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达。

关键词：鸡白细胞介素-10 信号肽真核表达 CHO-K1细胞

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基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α的结合能分析

基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α...

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆周妍刁晨曦陆涛峰赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结... 详细信息

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结合能。结果 E2和ZEN与ERα的结合能分别为-11.5 kcal·mol和-8.6 kcal·mol;两者都位于疏水性较强的活性口袋中,苯环都与Phe-404和Arg-394形成了CH-π和阳离子-π的相互作用;E2的羟基分别5个氨基酸形成氢键,其中一个羟基与水分子形成了保守的氢键。结论分子对接提供了E2和ZEN分别与ERα结合的相互作用力的可视化分析结果,证明了ZEN与ERα具有亲和力,但低于E2。

关键词：玉米赤霉烯酮雌激素受体α 分子对接结合能

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MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理... 详细信息

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理相关转运体分子(Tap)基因,分别基于Tap1基因组序列的短串联重复序列(STR)、Tap2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列,分析F1-F3代HBW-SPF鸭的遗传稳定性。结果 F0鸭的STR技术,在F1代完全稳定;F1代约2 kb的编码区序列存在多个变异点,且都有2个等位基因,根据STR标记确定的单倍型与毗邻的Tap2基因未完全连锁;利用基因组序列对F2代的遗传学检测中,B1和B2群鸭完全保守,B3鸭出现24个变异点,且皆为2个等位基因。利用Tap2基因组1-714和1-663 nt的核苷酸序列与F0代进行比对,结果 1-663 nt检测序列完全纯合。结论根据Tap2基因组的1-663 nt的核苷酸序列区域建立的分型技术,适合MHC单倍型SPF鸭的遗传学质量监测。

关键词：主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型鸭抗原处理相关转运体

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