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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队牡丹江师范学院生命科学与技术学院

目的我们前期在MDV超强毒株Md5攻毒实验和高通量测序分析发现miR-200b-3p和miR-200b-5p均仅在易感鸡(B19单倍型)感染后20dpi的法氏囊组织显著上调表达,本实验将利用荧光定量PCR技术进一步验证高通量测序结果并分析miR-200b-3p和miR-200b... 详细信息

目的我们前期在MDV超强毒株Md5攻毒实验和高通量测序分析发现miR-200b-3p和miR-200b-5p均仅在易感鸡(B19单倍型)感染后20dpi的法氏囊组织显著上调表达,本实验将利用荧光定量PCR技术进一步验证高通量测序结果并分析miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况,为进一步探讨它们可能与MD抗性/易感性相关的分子机制奠定基础。方法通过经过优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件,进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致,但差异显著性分析结果不完全相同,而来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p在MDV感染后表达相似。结论两种检测技术在检测miRNA表达上下调情况具有一致性,但差异显著性分析结果不完全一致,然而高通量测序和荧光定量结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关,但具体机制尚需进一步深入研究。

关键词： miR-200b-3p miR-200b-5p 马立克氏病抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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miR-146b-5p在B19与B21单倍型SPF鸡感染MDV后不同免疫器官表达规律分析

miR-146b-5p在B19与B21单倍型SPF鸡感染MDV后不同免疫器官表达规...

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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：易诚廉传江王瑞琪韩凌霞杨春文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150069 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

目的:比较分析miR-146b-5p 在马立克氏病(MD)易感(B19单倍型)与抗性(B21单倍型)SPF鸡感染马立克氏病病毒过程中不同免疫器官的差异表达情况,为进一步探讨其可能与MD 抗性/易感性相关的分子机制奠定基础. 方法:在MDV超强毒株Md5攻毒... 详细信息

目的:比较分析miR-146b-5p 在马立克氏病(MD)易感(B19单倍型)与抗性(B21单倍型)SPF鸡感染马立克氏病病毒过程中不同免疫器官的差异表达情况,为进一步探讨其可能与MD 抗性/易感性相关的分子机制奠定基础. 方法:在MDV超强毒株Md5攻毒实验和前期高通量测序分析发现miR-146b-5p 在法氏囊组织高表达且显著差异表达的基础上,进一步利用实时荧光定量PCR技术检测miR-146b-5p在B19和B21单倍型鸡感染后5dpi、10dpi 和21dpi 的法氏囊、胸腺和脾脏组织(实验组)以及相应未感染组(对照组)的表达变化情况. 结果:miR-146b-5p在5dpi、10dpi和21dpi实验组和对照组的表达量明显不同,在不同免疫器官中miR-146b-5p 的表达量存在组织特异性,不同鸡系之间在感染前后也存在一定的差异. 结论:miR-146b-5p可能与MD抗性/易感性相关,但具体机制尚需进一步深入研究.

关键词：鸡马立克氏病病毒感染免疫器官微小核糖核酸146b-5p 基因表达

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miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析

miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异...

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：王瑞琪廉传江易诚韩凌霞杨春文陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150009 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队哈尔滨150009 牡丹江师范学院生命科学与技术学院牡丹江157011

目的我们前期在MDV超强毒株Md5攻毒实验和高通量测序分析发现miR-200b-3p和miR-200b-5p均仅在易感鸡(B19单倍型)感染后20dpi的法氏囊组织显著上调表达，本实验将利用荧光定量PCR技术进一步验证高通量测序结果并分析miR-200b-3p和miR-20... 详细信息

目的我们前期在MDV超强毒株Md5攻毒实验和高通量测序分析发现miR-200b-3p和miR-200b-5p均仅在易感鸡(B19单倍型)感染后20dpi的法氏囊组织显著上调表达，本实验将利用荧光定量PCR技术进一步验证高通量测序结果并分析miR-200b-3p和miR-200b-5p在MD抗性(B21单倍型)与易感(B19单倍型)鸡法氏囊组织的差异表达情况，为迸一步探讨它们可能与MD抗性/易感性相关的分子机制奠定基础。方法通过经过优化后确定的最佳实时荧光定量PCR反应体系和扩增条件，进行荧光定量PCR分析。结果 miR-200b-3p和miR-200b-5p荧光定量PCR结果与高通量测序结果上下调情况基本一致，但差异显著性分析结果不完全相同，而来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p在MDV感染后表达相似。结论两种检测技术在检测miRNA表达上下调情况具有一致性，但差异显著性分析结果不完全一致，然而高通量测序和荧光定量结果均提示来源于同一前体的miR-200b-3p和miR-200b-5p可能与MD抗性/易感性相关，但具体机制尚需进一步深入研究。

关键词： miR-200b-3p miR-200b-5p 马立克氏病抗性/易感性高通量测序荧光定量PCR

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鸭抗原相关转运体TAP1和TAP2原核表达及多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2015年第6期 40-43页

作者：张晓娜吴少莲文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学研究团队哈尔滨150001

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表... 详细信息

HBK鸭是国家禽类实验动物种子中心培育的我国首个无特定病原体(SPF)鸭,已封闭饲养9个世代。鸭抗原处理相关转运体(TAP)基因位于主要组织相容性复合体区域,TAP1和TAP2组成的二聚体具有将抗原肽从细胞质转运入内质网腔的重要作用。为了表达鸭抗原相关转运体蛋白,并制备特异性多克隆抗体,试验采用PCR方法扩增HBKB系鸭的TAP1完整基因和TAP2基因的预测肽结合区(PBD),分别命名为TAP1和TAP2PBD,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒p ET-TAP1和p ET-TAP2PBD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行SDSPAGE及Western-blot鉴定,表达产物经SDS-PAGE后分别切胶免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明:两种目的蛋白均获得了正确表达。说明试验制备了高特异性鸭TAP1和TAP2多克隆抗体,可用于水禽TAP的结构和功能研究。

关键词：鸭抗原相关转运体肽结合区原核表达多克隆抗体

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鸡NK细胞相关C型凝集素样编码基因研究进展

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动物医学进展 2015年第6期36卷 134-137页

作者：吴少莲韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,... 详细信息

鸡的C型凝集素样基因编码包括鸡自然杀伤(natural killer,NK)细胞受体在内的许多免疫分子。鸡C型凝集素样编码基因分别位于自然杀伤基因复合体(NK gene complex,NKC)和主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)区域,在NKC区为CD69和CD94/NKG2,在MHC区为相邻的B-NK和B-Lec基因。B-NK是目前唯一已证明表达于NK细胞上的凝集素样受体,其配体尚不清楚,但是已经证明B-NK能够和活化的细胞上的配体结合。论文主要讨论CD69、CD94/NKG、B-NK和BLec 4个基因的系统发育比较和蛋白质结构的研究进展。

关键词：鸡 NK细胞 C型凝集素样受体

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MDV感染B19、B21单倍型SPF鸡外周血淋巴细胞BLec1、BNK及细胞因子基因转录水平比较

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畜牧兽医学报 2015年第7期46卷 1184-1190页

作者：宁官保田文霞张园华张鼎张晓娜韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学创新团队中心/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 华中农业大学动物医学院武汉430070

本研究旨在揭示BLec1、BNK及细胞因子在B21和B19两种单倍型鸡对马立克病(MD)抗性差异中的可能机制。分别对B21和B19单倍型1日龄鸡腹腔接种马立克病毒(MDV)超强毒株,在攻毒后不同时间检测鸡外周血淋巴细胞中BLec1、BNK及IFN-γ、IL-4、IL... 详细信息

本研究旨在揭示BLec1、BNK及细胞因子在B21和B19两种单倍型鸡对马立克病(MD)抗性差异中的可能机制。分别对B21和B19单倍型1日龄鸡腹腔接种马立克病毒(MDV)超强毒株,在攻毒后不同时间检测鸡外周血淋巴细胞中BLec1、BNK及IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-18的基因转录水平。结果显示,在第4、7天,两种鸡BNK、BLec1和4种细胞因子水平表现出不同程度的降低。在第10天,B21单倍型鸡中BNK、BLec1、IFN-γ、IL-4和IL-18基因转录量出现不同程度的升高,而B19单倍型鸡中细胞因子转录水平有所下降。在第13天,B21单倍型鸡中BNK、BLec1、IL-18和IL-10基因转录量表现出不同程度的升高,而B19单倍型鸡中则有所下降。以上结果总体表明,MD耐受型鸡在感染沉默期BNK、BLec1和细胞因子转录量高于敏感型,不同遗传基因型鸡对MD的抗性差异与耐受基因及细胞因子的转录情况有着密切的关系。

关键词：细胞因子 BLec1 BNK 基因转录

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G2系和G5系鸡感染马立克氏病毒早期细胞因子转录水平的变化

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 957-961页

作者：蔡文博吴少莲彭蔚宇王丽廷陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001 常州市金坛区动物疫病预防控制中心江苏常州213200 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(... 详细信息

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(dq RT-PCR)方法对接种后4 h、24 h、48 h和96 h肺淋巴细胞、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中MDV meq、IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的m RNA含量进行检测。结果显示,接种后96 h仅在两品系感染鸡的肺淋巴细胞和脾脏中检测到了meq m RNA,G2系鸡群肺淋巴细胞中病毒m RNA含量高于G5系,但脾脏中较低。96 h肺淋巴细胞和脾脏中IFN-γ、IL-4和IL-10转录水平大幅上调,并且G2系鸡群均略高于G5。本研究结果提示G2系对MDV的抵抗能力强于G5,这两种品系鸡感染MDV后可能主要启动以Th2型为主的细胞免疫反应,为研究MDV对不同MHC单倍型鸡的致病性提供了实验依据。

关键词：马立克氏病毒 IFN-γ IL-18 IL-4 IL-10

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B19单倍型鸡BNK蛋白单克隆抗体的制备

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实验动物科学 2015年第3期32卷 1-5页

作者：吴少莲彭蔚宇王兴童文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)... 详细信息

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)的真核细胞系筛选单克隆抗体。结果用稳定表达BNK蛋白的真核细胞系筛选到2株BNK19特异性单克隆抗体。结论获得的单克隆抗体经鉴定具有免疫学活性,为鸡BNK蛋白及NK细胞的作用机制研究提供了条件。

关键词： B19单倍型鸡 BNK 单克隆抗体

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Gln对鸭瘟感染鸭十二指肠免疫调节相关基因表达量的影响

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实验动物科学 2015年第3期32卷 10-12,43页

作者：张圆圆赵丽丽王蕾牛银杰韩凌霞刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队哈尔滨150001

目的为谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在正常鸭及鸭瘟(Duck plague,DP)模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)7日龄雏鸭随机分为8组,四组梯度剂量每天灌喂Gln(0、0.5、1、2 g/kg饲料... 详细信息

目的为谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在正常鸭及鸭瘟(Duck plague,DP)模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)7日龄雏鸭随机分为8组,四组梯度剂量每天灌喂Gln(0、0.5、1、2 g/kg饲料)6d,及另四组灌喂同等梯度剂量Gln 6 d,于第一天灌喂30 min后攻0.2 m L2000TCID50鸭瘟病毒,观察Gln对正常雏鸭的免疫促进作用及攻毒鸭免疫应激的缓解作用。测定Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路基因表达量。结果 Gln显著提高正常组TLR4通路mRNA表达量(P<0.05),显著降低攻毒组表达量(P<0.05)。结论 Gln通过TLR4通路提高正常雏鸭肠道的免疫力,降低鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)造成的肠道免疫损伤。

关键词：谷氨酰胺鸭鸭瘟十二指肠 TLR4通路

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1型鸭肝炎病毒强毒株在雏鸭体内分布情况研究

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实验动物科学 2015年第3期32卷 13-15页

作者：赵丽丽刘海燕牛银杰祝明皓刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150001

目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的... 详细信息

目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的组织脏器进行了定量检测。结果接种后4 h即可在雏鸭心、肝、脑、肺、胰腺、回肠、盲肠、直肠、法氏囊和脾脏组织中检测到一定水平的病毒RNA,随着病程发展,RNA拷贝数持续升高,接种24 h后,肝脏中的病毒RNA拷贝数为最高,达到108.81copies/g,心、肺、肾、脾次之,约107copies/g。结论DHV-1强毒在雏鸭的早期感染雏鸭的实质器官、免疫器官和消化系统等均具有广泛的嗜性。

关键词：鸭肝炎病毒实时荧光定量PCR 雏鸭动态分布

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