检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 82-87,141页

作者：梁彤曹存于德斌王芳姜志刚徐晓静刘春东尹鑫常继涛中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队哈尔滨150069 哈尔滨维科生物技术有限公司研发部哈尔滨150069 内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010010 北大荒完达山乳业股份有限公司哈尔滨150036

为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时... 详细信息

为了对内蒙古地区患腹泻疾病的犊牛进行病原学鉴定,并进一步丰富我国牛冠状病毒(BCoV)的种质资源和流行病学数据,试验采用PCR扩增、间接免疫荧光试验、增殖动态检测、透射电镜观察等方法确定9份新生犊牛腹泻粪便样本的病原学特征,同时通过序列比对分析与GenBank中具有代表性的BCoV S1基因组序列的同源性,利用MEGA 7.0.14软件构建S1基因组系统进化树。结果表明:9份样本中有2份为BCoV N基因阳性,PCR扩增得到大小约为730 bp的目的条带;用阳性样本接种HRT-18G细胞并进行3次传代培养,可见细胞出现以变圆、融合形成合胞体、融合细胞脱落为主要特征的典型细胞病变;分离株能够与兔抗BCoV N蛋白的多克隆抗体发生特异性反应,透射电镜观察可见有囊膜、表面有纤突、直径约为120 nm的病毒粒子;将分离获得的BCoV毒株命名为HM-XC,该分离株感染HRT-18G细胞的病毒含量为1×10^(5.75)TCID_(50)/0.1 mL;分离株HM-XC S1基因的核苷酸序列与我国青海省牦牛源毒株BCoV Yak/BCoV-China/QH1的相似性最高,为99.61%,与近年来辽宁省流行毒株的相似性为96.4%~99.0%,与美国经典参考毒株BCoV Mebus的相似性较低,为96.3%;与相似性最高的Yak/BCoV-China/QH1毒株相比,分离株HM-XC的S1蛋白存在7个氨基酸突变,分别是H115D、S186W、Y509H、V528A、N531D、L563S和I640T。说明内蒙古地区牛场中已有BCoV的流行,并且在犊牛腹泻粪便中分离获得BCoV内蒙古流行毒株,分离株具有我国新流行BCoV株的序列特征。

关键词：牛冠状病毒分离鉴定 S1蛋白编码基因序列分析

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猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的遗传变异及其原核表达

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：陈建飞冯力时洪艳孙东波白兴华佟有恩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室哈尔滨维科生物技术开发公司

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777... 详细信息

应用RT-PCR和nested-PCR方法扩增得到含猪流行性腹泻病毒CH/S株N蛋白基因的目的片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。CH/S株N蛋白基因含有一个长1326bp的ORF,编码由441个氨基酸残基组成的多肽,未发现碱基的插入和缺失。CH/S与CV777、Chinju99、JS-2004-2和LJB/03N蛋白基因ORF的序列同源性分别为97.1%、96.8%、96.7%和96.5%;推导的氨基酸序列的同源性分别为97.7%、97.1%、97.1%和96.8%。以阳性质粒为模板,用分别含有BamHⅠ和ZhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增得到ORF,其PCR产物经BamHHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到pET-30a载体,构建的重组质粒命名为pET-30a-PN;将pET-30a-PN转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明表达出与预期大小相符的约54.4ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;薄层扫描结果表明表达产物占菌体总蛋白的30.5%;Western blot分析表明表达的重组蛋白能与抗PEDV高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫学活性。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白基因序列同源性重组蛋白免疫学活性

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新型动物疫苗的研究现状及进展

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畜禽业 2009年第12期20卷 16-18页

作者：姚贵哲祝超张振梅崔尚金钱爱东吉林农业大学吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大... 详细信息

近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大促进了新型的疫苗研究的步伐,并使新型疫苗的应用朝着实用化迈了一大步。目前,亚单位疫苗、基因缺失疫苗以及载体疫苗被公众认为是可以考虑作为替代传统疫苗的新型疫苗,该文对这些新型动物疫苗的研究现状和进展进行了综述,以期能够进一步促进大家对其了解,并加快其发展,以便早日应用。

关键词：疫苗学动物疫苗疫苗的研究进展

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适应无血清培养的HEK293细胞的建立

适应无血清培养的HEK293细胞的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：孟其麟孙元李红梅王楠田大勇仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 130001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(29SF)，经检测293SF细胞具有稳定的腺病毒增殖能力与外源蛋白表达能力;平均病变时间为97.00 h，比HEK293细胞缩短12.9％;毒价达到107.48TCIDmL，比HEK293细胞提高4... 详细信息

本研究采用培养液渐进替换的方法获得了一株适应无血清培养的HEK293细胞(29SF)，经检测293SF细胞具有稳定的腺病毒增殖能力与外源蛋白表达能力;平均病变时间为97.00 h，比HEK293细胞缩短12.9％;毒价达到107.48TCIDmL，比HEK293细胞提高43.3％;并且随着代数的提高稳定性良好，连续传16代后293sF细胞状态与易感性没有发生变化。此细胞系为腺病毒的无血清生产奠定材料基础。

关键词：腺病毒无血清培养蛋白表达稳定性

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J亚群禽白血病流行病学研究新进展

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中国家禽 2014年第16期36卷 38-40页

作者：邓小芸祁小乐张久丽华育平高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 东北林业大学林学博士后流动站黑龙江哈尔滨150040

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康... 详细信息

J亚群禽白血病是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)宿主范围开始扩展,已由肉种鸡扩大到蛋鸡以及地方品种鸡,对鸡群的致病性提高,发病鸡的临床表现越来越多样化,出现了血管瘤,严重威胁养禽业健康发展。ALV-J与其他免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中普遍存在,使得鸡群免疫力低下,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,使疫病的诊断和防控难度加大。本文从分子流行病学的角度对ALV-J的发生发展进行综述,以期揭示ALV-J致病性增强的分子机制。

关键词： J亚群禽白血病流行病学进展

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仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与防制

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畜禽业 2009年第5期20卷 68-71页

作者：苗岚飞张振梅祝超姚贵哲李金敏崔尚金东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防... 详细信息

新生仔猪的肠道疾病是限制养猪业养殖效率和经济收益最重要的因素之一。它主要是导致仔猪死亡率上升和饲料效率的降低，进而可能使生猪推迟上市．猪的质量下降。因此，此类疾病应引起足够重视。本文就仔猪常见肠道疾病的鉴别诊断与预防进行探讨和总结如下。

关键词：新生仔猪肠道疾病鉴别诊断防制经济收益养殖效率饲料效率养猪业

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免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用

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畜禽业 2008年第1期19卷 72-75页

作者：周盛华崔尚金戚亭岳丰雄张超范东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记技术以及目前在养猪业上的应用情况。

关键词：胶体金试纸条猪病

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带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究

带BAC质粒的重组伪狂犬病毒的构建及其体外生长特性研究

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新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会

作者：彭金美王瑜田志军周艳君陈瑾安同庆童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室华中农业大学中国农业科学院上海兽医研究所

本研究通过基因克隆技术以PRV弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源臂,以及绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,然后将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BA... 详细信息

本研究通过基因克隆技术以PRV弱毒疫苗株Bartha K61株的部分TK基因作为同源臂,以及绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为筛选标记构建了带LoxP位点的pUCTKAB-EGFP质粒,然后将pBeloBACII线性化后插入到pUCTKAB-EGFP中构建了转移载体pUCTK-EGFP-BACII。将PRV基因组和转移载体共转染Vero细胞,利用同源重组在Bartha K61株的TK基因中插入了BAC质粒和绿色荧光蛋白筛选标记,经过11轮噬斑纯化和鉴定证实获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC。通过噬斑试验和一步生长曲线测定等方法对重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC的生长特性进行研究,结果发现带有BAC质粒及筛选标记的重组病毒rv-PRVBAC在体外细胞培养中的增殖速度与亲本毒BarthaK61株相比没有明显差别,说明大的基因片段的插入没有影响重组病毒在体外的繁殖速度。重组病毒rv-PRVBAC在Vero细胞上盲传18代,绿色荧光蛋白仍能够稳定表达,通过PCR鉴定可以检测到插入的外源片段和插入位点两侧的病毒基因序列,表明所获得的重组病毒rv-PRVBAC得到了稳定遗传。本研究成功获得了带BAC质粒的重组伪狂犬病毒rv-PRVBAC,为进一步开展PRV的细菌人工染色体的构建奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒 Bartha K61 strain BAC 重组病毒

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禽网状内皮组织增生病流行现状及防控

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中国家禽 2015年第1期37卷 1-4页

作者：邓小芸祁小乐李凯胡峰高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。

关键词：禽网状内皮组织增生病流行免疫抑制混合感染亚单位疫苗

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基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力评价

基因修饰的鸡新城疫病毒F48E9株HN基因DNA疫苗的构建及其免疫效力...

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中国畜牧兽医学会2007年学术年会

作者：贺笋王云峰木古丽石星明王玫童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐 830052 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨 150001

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端... 详细信息

DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，增强其免疫效果，本研究对NDV F48E9株的HN基因进行了修饰，将NDV F48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA蛋白信号肽序列。修饰后HN基因命名为SoptiHN，剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG-ODN的载体pVAX1-CpG中，将他们分别命名为pV-SopliHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN和pV-HN、pVC-HN，用这些质粒转染293T细胞，48h后间接免疫荧光和West-blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。结果显示，与未经修饰的HN基因相比，修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高，并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量。将质粒pVAx1、pvAx1-CpG、pV-HN、pVC-HN、pV-Sop-tiHN和pVC-SoptiHN采用四头肌多点注射三周龄SPF鸡，每只鸡200μg，PBS设为空对照组;一免后三周以相同的剂量加强免疫，二免后以103 EID50 NDV的F48E9强毒株进行攻毒，计算发病率、死亡率、以及排毒情况。免疫前后，及攻毒前后每周采集血清和外周血淋巴计算Ⅷ抗体和细胞因子IFN-γ和IL-18动态变化情况。分析结果表明，相比NDV F48E9马株的HN基因而言，修饰后的HN基因可以诱导更加强烈的免疫反应，产生更好的保护效率。

关键词：鸡新城疫病毒 DNA疫苗密码子优化信号肽免疫印迹

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