检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 435-438页

作者：林欢么帅脱添蓓王永强高祥韩春燕高宏雷高玉龙祁小乐刘长军张艳萍王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究团队黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为分离鉴定一株鸡传染性贫血病毒(CAV),以及了解其基因组特征,本实验利用MDCC-MSB1细胞对黑龙江某鸡场疑似患病鸡的肝脏组织进行病毒分离,经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离得到一株CAV,命名为HLJ16069。克隆该病毒株全基因组,... 详细信息

为分离鉴定一株鸡传染性贫血病毒(CAV),以及了解其基因组特征,本实验利用MDCC-MSB1细胞对黑龙江某鸡场疑似患病鸡的肝脏组织进行病毒分离,经PCR和间接免疫荧光试验鉴定,结果显示分离得到一株CAV,命名为HLJ16069。克隆该病毒株全基因组,测序拼接后获得全长序列,将该病毒株序列与国内外已发表的其它病毒全基因组序列进行同源比对和进化分析,结果显示同源性达96.0%以上,亲缘关系最远的是中国分离株SD1403,而与日本分离株C369亲缘关系最近(99.1%);氨基酸序列分析显示,HLJ16069在VP1的75、89、141和394位氨基酸存在有意义的突变。本研究发现了一些与CAV毒力相关的分子特征,为CAV的毒力变化提供了数据支持。

关键词： CAV 病毒分离全基因组毒力

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鸡传染性贫血病毒VP2基因的原核表达及兔抗血清的制备

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黑龙江畜牧兽医 2017年第9期 67-70,291页

作者：孙芬芬高玉龙潘伟王笑梅徐州医科大学形态学实验教学中心江苏徐州221004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队哈尔滨150001 徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化*** BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达... 详细信息

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化*** BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达出His-VP2重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后免疫新西兰白兔制备兔抗血清,采用IFA和Western-blot检测该血清的特异性,ELISA测定其效价。结果表明:重组His-VP2融合蛋白的分子质量约为36 ku,以包涵体形式存在。制备的兔抗VP2血清效价在1∶6 400以上,可特异性结合真核表达的VP2蛋白,表明其反应原性较好。说明试验成功表达VP2蛋白,并制备出兔抗血清,可用于该蛋白与病毒其他蛋白之间的相互作用的进一步研究。

关键词：鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白原核表达纯化兔抗血清

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禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF鸡免疫器官和疫苗免疫效果的影响

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畜牧兽医学报 2016年第2期47卷 340-345页

作者：李凯高立祁小乐高宏雷高玉龙王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病研究团队哈尔滨150001

禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类的一种重要免疫抑制性疾病,目前对其造成免疫抑制的机制尚不十分清楚。本研究对实验室分离的一株REV流行毒株(HLJR0901株)感染1日龄SPF鸡后对感染鸡免疫器官和免疫功能造成的影响进行研究。结果表明,1日... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类的一种重要免疫抑制性疾病,目前对其造成免疫抑制的机制尚不十分清楚。本研究对实验室分离的一株REV流行毒株(HLJR0901株)感染1日龄SPF鸡后对感染鸡免疫器官和免疫功能造成的影响进行研究。结果表明,1日龄SPF鸡感染REV后出现生长迟缓,法氏囊、胸腺萎缩,脾肿大的症状。感染鸡出现法氏囊滤泡淋巴细胞大量坏死减少,间质结缔组织增生;胸腺出血,胸腺小体增多;脾小结明显萎缩,淋巴细胞减少等病理变化。荧光定量PCR检测发现,病毒在感染鸡法氏囊、胸腺和脾内均有分布,且持续存在。SPF鸡感染REV后出现严重的免疫抑制,使AIV灭活疫苗和NDV弱毒疫苗的免疫效果显著下降。本研究为阐明REV的免疫抑制机制提供了重要的实验数据。

关键词：禽网状内皮组织增生病致病性免疫器官免疫抑制

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鸡源CD154分子功能区的表达

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 493-495,499页

作者：段雨路韩春燕么帅高玉龙祁小乐高立李凯刘长军张艳萍高宏雷王永强王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究团队黑龙江哈尔滨150001

为表达鸡源CD154分子的功能区,本研究根据Gen Bank中鸡CD154的参考序列克隆其编码区。通过融合PCR将CD154的C端与小鼠CD8α蛋白的N端串联,并连接信号肽以利于分泌表达,将重组质粒转染293T细胞,检测其表达情况。结果显示,融合蛋白正确表... 详细信息

为表达鸡源CD154分子的功能区,本研究根据Gen Bank中鸡CD154的参考序列克隆其编码区。通过融合PCR将CD154的C端与小鼠CD8α蛋白的N端串联,并连接信号肽以利于分泌表达,将重组质粒转染293T细胞,检测其表达情况。结果显示,融合蛋白正确表达,表达量随时间的延长而增加,并且能够分泌到细胞外。鸡CD154分子功能区的表达,为更好地在体外研究传染性法氏病病毒感染B淋巴细胞奠定了很好的基础。

关键词：鸡 CD154分子表达传染性法氏囊病病毒

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一株虹鳟嗜冷益生菌Aeromonas popoffii的分离鉴定及体外抗病毒特性研究

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 40-44页

作者：王宏磊崔红玉卢彤岩徐黎明刘淼王云峰王笑梅东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测... 详细信息

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测序比对,鉴定为Aeromonas popoffii,将其命名为HL60分离株。通过耐胆酸游离酸试验、耐酸试验、体外抑菌试验和体外对鲤鱼上皮细胞(EPC)增殖影响试验及体外抗病毒(传染性造血器官坏死病病毒)试验,结果表明*** HL60分离株具有良好的益生特性及体外抗病毒活性。本研究分离获得的*** HL60分离株为冷水鱼益生菌株活载体疫苗开发及应用奠定了基础。

关键词：益生菌嗜冷菌抗病毒特性益生特性

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3′-U3区碱基突变不影响禽白血病病毒的体外复制能力

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畜牧兽医学报 2015年第4期46卷 608-614页

作者：高雁怩高奇李晓菲贠炳岭祁小乐王永强刘长军崔红玉张艳萍高宏雷王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队哈尔滨150001

为探索近年蛋鸡分离株中出现规律性突变的J群禽白血病病毒(ALV-J)3′-U3区对病毒体外复制能力的影响,以ALV-J原型毒株HPRS-103为骨架,利用融合PCR技术构建含蛋鸡分离株SD09DP04的3′-U3区的嵌合病毒的cDNA克隆。嵌合病毒的感染性克隆与... 详细信息

为探索近年蛋鸡分离株中出现规律性突变的J群禽白血病病毒(ALV-J)3′-U3区对病毒体外复制能力的影响,以ALV-J原型毒株HPRS-103为骨架,利用融合PCR技术构建含蛋鸡分离株SD09DP04的3′-U3区的嵌合病毒的cDNA克隆。嵌合病毒的感染性克隆与原型毒株HPRS-103的感染性克隆分别在脂质体介导下转染DF-1细胞,对收获的病毒分别用间接免疫荧光试验、禽白血病抗原和反转录酶试剂盒检测,结果表明成功拯救到2株病毒。对拯救的2株病毒,进行其3′-U3区启动子活性和增强子活性的检测,以及复制动力学比较分析结果显示,出现特异性规律性突变的U3区对于原毒株的体外复制能力无显著影响。所构建的3′-U3区的嵌合病毒的成功拯救对于进一步探索近年ALV-J流行毒株其3′-U3区出现的规律性突变的功能及意义奠定了基础。

关键词： U3区嵌合病毒 J亚群禽白血病病毒生物学特性

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表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其表达的优化

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 825-828页

作者：张旺刘琳琳祁小乐高玉龙王永强高宏雷李凯高立刘长军张艳萍王笑梅崔红玉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001

鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2蛋白是该病毒的主要抗原蛋白,为制备乳酸菌黏膜免疫口服疫苗,本研究采用乳酸乳球菌(***)及其Nisin诱导的表达系统,对VP2基因进行密码子优化,构建了表达IBDVVP2蛋白的重组乳酸乳球菌***/p NZ-VP2。经正交... 详细信息

鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)的VP2蛋白是该病毒的主要抗原蛋白,为制备乳酸菌黏膜免疫口服疫苗,本研究采用乳酸乳球菌(***)及其Nisin诱导的表达系统,对VP2基因进行密码子优化,构建了表达IBDVVP2蛋白的重组乳酸乳球菌***/p NZ-VP2。经正交试验对诱导条件进行优化,重组VP2蛋白(r VP2)表达量比优化前明显提高,最终得到最佳诱导条件为:OD600nm=0.5开始诱导,Nisin终浓度为2 ng/m L,诱导时间为5 h,r VP2表达量达到最大值38μg/m L。经western blot检测,r VP2能够持续性表达并具有良好的抗原性。该重组乳酸菌的构建为进一步体内免疫实验奠定了基础。

关键词：鸡传染性法氏囊病毒重组乳酸菌 VP2蛋白

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抗禽白血病病毒p27蛋白线性抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 632-635页

作者：李晓菲朱海波高奇王琦孙佳善高玉龙祁小乐王永强高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物用生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001

为鉴定禽白血病病毒(ALV)p27蛋白中的线性抗原表位,本研究以原核表达的重组p27蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA方法筛选纯化获得一株能够稳定分泌特异性单克隆抗体(MAb)的杂交... 详细信息

为鉴定禽白血病病毒(ALV)p27蛋白中的线性抗原表位,本研究以原核表达的重组p27蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA方法筛选纯化获得一株能够稳定分泌特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果显示,该MAb可以识别ALV的群特异性抗原p27蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,MAb与A、B和J亚群ALV均呈阳性反应。对p27蛋白进行截短表达,利用western blot和间接ELISA进行表位鉴定,确定了MAb所识别的抗原表位位于129LVAITASALQAFRE142。氨基酸序列比对结果显示,本研究所鉴定出的p27表位在A、B和J亚群ALV之间高度保守。本研究为ALV检测方法的建立及其免疫学功能的研究提供了有利的工具。

关键词：禽白血病病毒 p27蛋白单克隆抗体抗原表位

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浅析鸡马立克氏病毒毒力进化与疫苗防控

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中国畜禽种业 2015年第5期11卷 142-144页

作者：刘永振李凯刘长军高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队 150001

鸡马立克氏病是由鸡马立克氏病病毒引起鸡的一种高度传染性、以淋巴细胞增生为特征的肿瘤病。由于MDV疫苗的广泛使用,该病已基本得到控制;但近些年来,MD的危害有进一步加重的趋势,免疫失败时有发生。MDV毒株毒力的不断增强可能是近年来M... 详细信息

鸡马立克氏病是由鸡马立克氏病病毒引起鸡的一种高度传染性、以淋巴细胞增生为特征的肿瘤病。由于MDV疫苗的广泛使用,该病已基本得到控制;但近些年来,MD的危害有进一步加重的趋势,免疫失败时有发生。MDV毒株毒力的不断增强可能是近年来MD危害加重的主要原因之一。根据MDV毒力进化趋势分析,MDV毒株毒力大约每十几年发生一次毒力跃迁,与之对应的疫苗研究也几乎得到同步发展。本文对MDV毒力进化、疫苗防控以及我们将来可选择的其他防控措施等方面进行了简要分析和概述。

关键词：毒力疫苗免疫效果马立克氏病病毒鸡马立克氏病高度传染性肿瘤病疫苗研究免疫失败病已二次免疫

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北里乳杆菌97-1产细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 934-937页

作者：张旺刘琳琳王云峰王宏磊祁小乐高玉龙王永强高宏雷李凯刘长军张艳萍卢彤岩何高明王笑梅崔红玉石河子大学动物科技学院新疆石河子832002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070

为鉴定北里乳杆菌97-1(*** 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数... 详细信息

为鉴定北里乳杆菌97-1(*** 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数蛋白酶降解,但耐受过氧化氢酶的处理;进一步研究表明其细菌素对单核细胞增生李斯特菌的生长具有明显抑制作用,同时可以抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,具有广谱抗菌活性;温度和酸碱耐受试验表明该细菌素对高温、强酸和强碱具有高度耐受性。本研究对细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的鉴定,为微生态制剂的研制和开发提供了良好的候选资源。

关键词：细菌素抑菌活性北里乳杆菌

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