检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2016年第3期29卷 308-311页

作者：王竞晗李素何文瑞赵权仇华吉吉林农业大学吉林长春130018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

目的对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定。方法Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析。... 详细信息

目的对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定。方法Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析。取生长状态良好的MDBK细胞,按1%比例加入待检胎牛血清,收获F1代BVDV FBS2014,反复冻融3次后,再次接种MDBK细胞,连传4代。采用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光试验及抗原捕获ELISA法对收获的病毒进行鉴定。结果扩增产物大小均与预期相符,与已报道的BVDV-1 NADL株的核苷酸序列一致性为92.2%,属于BVDV-1a亚型毒株;分离的病毒经鉴定为BVDV,命名为BVDV FBS2014,病毒基因拷贝数为10~4拷贝/μl,感染MDBK细胞可见特异性绿色荧光;各代次的病毒收获液中BVDV的基因拷贝数均大于10^(4.92)拷贝/μl,BVDV抗原检测结果均为阳性。结论购买的进口胎牛血清中成功分离到可致MDBK细胞产生细胞病变的病毒,经鉴定所分离的病毒为BVDV,命名为FBS2014株,该病毒属于BVDV-1a亚型毒株。

关键词：牛病毒性腹泻病毒胎牛血清分离鉴定

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表达新城疫病毒F基因重组鸭肠炎病毒的构建

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中国预防兽医学报 2016年第2期38卷 92-95页

作者：张苗苗李慧昕韩宗玺刘怀然王玉龙邵昱昊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-E... 详细信息

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸭肠炎病毒(DEV),本研究以实验室前期构建的表达绿色荧光蛋白的重组DEV(r DEV-US10-EGFP)为基础,通过PCR扩增NDV F基因,构建了携带F基因表达盒的转移质粒p US10-TPA-F。将转移质粒与r DEV-US10-EGFP基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞。经过反向蚀斑筛选,获得表达NDV F基因的r DEV-US10-F。对重组区域US10基因测序结果表明,F基因正确插入至US10基因编码区内。将重组病毒传至15代,F基因仍能够稳定表达,表明重组病毒具有稳定的遗传特性,并且与亲本病毒株具有相似的生长曲线。本研究为研发NDV-DEV活载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒 F基因鸭肠炎病毒重组病毒

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不同接种途径对禽腺病毒在鸡胚中增殖的影响

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 275-278页

作者：邱丽叶李慧昕王娟刘胜旺东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为评价不同接种途径对禽腺病毒(FAdV)在鸡胚中的增殖能力及病毒的主要分布组织,本研究将FAdV分别采用卵黄囊、尿囊膜和尿囊腔3种途径接种SPF鸡胚,利用荧光定量PCR方法对FAdV在鸡胚组织中的病毒载量进行测定。结果显示,FAdV在鸡胚各组织... 详细信息

为评价不同接种途径对禽腺病毒(FAdV)在鸡胚中的增殖能力及病毒的主要分布组织,本研究将FAdV分别采用卵黄囊、尿囊膜和尿囊腔3种途径接种SPF鸡胚,利用荧光定量PCR方法对FAdV在鸡胚组织中的病毒载量进行测定。结果显示,FAdV在鸡胚各组织中均有不同程度增殖。FAdV经卵黄囊途径和尿囊腔途径接种SPF鸡胚,病毒主要嗜性组织为肝脏,经尿囊膜途径接种FAdV,病毒主要嗜性组织为尿囊膜。经卵黄囊途径接种,FAdV在肝脏、尿囊膜和尿囊液中的病毒载量分别为1.38×108拷贝/mg、2.78×107拷贝/mg及1.32×104拷贝/mg。经尿囊膜途径接种,FAdV在肝脏、尿囊膜和尿囊液中的病毒载量分别为1.83×104拷贝/mg、1.08×105拷贝/mg及4.53×104拷贝/mg。经尿囊腔途径接种,FAdV在肝脏、尿囊膜和尿囊液中的病毒载量分别为1.65×105拷贝/mg、7.08×104拷贝/mg及1.26×104拷贝/mg。以上结果表明,不同接种途径对FAdV在SPF鸡胚中的增殖影响较大,其中经卵黄囊途径接种SPF鸡胚,FAdV增殖能力最强。

关键词：禽腺病毒鸡胚接种途径组织分布病毒增殖

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2014年部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 335-338页

作者：常铁城陈建飞冯力倪宏波黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行情况,本研究利用RT-PCR方法对2014年来自全国11个省市42个猪场的165份病料样品进行了检测。结果显示,在检测的42个猪场中,共有36个猪场显示PEDV阳性,猪场阳性率为85.71%。其中单独感染PEDV的猪场有25个,占总数的59.52%;混合感染PEDV和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的猪场有2个,占总数的4.76%,PEDV和猪轮状病毒(Po RV)混合感染猪场有7个,占总数的16.67%;3种病毒均混合感染的猪场有2个,占总数的4.76%。结果表明PEDV在我国的猪腹泻病病原中仍占主导地位。对2014年分离的21株PEDV ORF3基因进行测序分析,并与Gen Bank中登录的12株国内外PEDV参考株相关序列进行遗传变异分析。这33个PEDV株的ORF3基因系统发育树显示,目前我国的PEDV现地病毒株分布在Ⅰ群中的Ⅰ-Ⅰ亚群和Ⅰ-Ⅲ亚群。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行病学调查 ORF3基因序列分析

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猫杯状病毒VP1衣壳蛋白的截短表达及其抗原性分析

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中国兽医科学 2016年第1期46卷 74-78页

作者：蒋艳妹刘家森刘永相倪宏波曲连东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质... 详细信息

为筛选猫杯状病毒(FCV)VP1衣壳蛋白特异性优势抗原片段,利用生物信息学软件DNAStar对毒株2280的VP1衣壳蛋白各分区的抗原性进行了预测。在此基础上,以FCV 2280株cDNA为模板,RTPCR扩增VP1基因的A、B、CD、E和F共5个区段,构建重组表达质粒,5个基因片段在大肠杆菌中均获得高效可溶性表达。Western-blot试验证明,截短蛋白B、E、F均可与FCV阳性质控血清发生特异性反应,截短蛋白A和CD的信号弱。截短蛋白A、B、CD、E、F等量包被ELISA板,其中截短蛋白F与FCV阳性质控血清反应的D450,S/D450,N值最高,与其他蛋白之间差异显著(P<0.05)。结果表明,截短蛋白F为FCV VP1优势抗原片段,具备开发成FCV的血清学诊断试剂和新型疫苗的潜力。

关键词：猫杯状病毒 VP1蛋白原核表达抗原性

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白的表达及其免疫保护效力分析

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 245-249页

作者：李大鹏徐胜奎刘双红李刚王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000

为评价副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以***血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并... 详细信息

为评价副猪嗜血杆菌(***)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以***血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并在*** BL21(DE3)感受态中诱导表达。结果显示,重组CdtB蛋白(rCdtB)以可溶形式表达。以纯化后的100μg蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,2周后进行一次加强免疫并进行血清抗体检测,其抗体效价高于1:25 600,表明该蛋白具有良好的免疫原性。淋巴细胞增殖试验结果表明rCdtB能够显著刺激小鼠T淋巴细胞增殖。此外,分别以5 LD_(50)的***血清5型HN10菌株和血清13型ZD12菌株攻毒,结果表明rCdtB可以对血清5型HN10菌株提供60%以上的免疫保护力,而对血清13型ZD12菌株可以提供50%以上的免疫保护力,这表明rCdtB可以作为重组亚单位疫苗的候选抗原蛋白。

关键词：副猪嗜血杆菌 CdtB 原核表达免疫保护

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莱斯顿型埃博拉病毒GP蛋白嵌合型水泡性口炎病毒的构建与免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 448-452页

作者：祖述龙宋继军邵钰刘任强温志远周微微王雪莲葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV... 详细信息

莱斯顿型埃博拉病毒(REBOV)可以感染猪和非人类灵长类动物并引起动物发病和死亡,为制备安全、有效的REBOV重组病毒后备疫苗,本研究利用表达绿色荧光蛋白的水泡性口炎病毒(r VSV-EGFP)印第安纳弱毒疫苗株反向遗传操作系统,拯救出了REBOV GP蛋白嵌合型VSV(r VSV△G*GFP-REBOV-GP),并对其生物学特性进行分析,评估其作为REBOV活疫苗的安全性和有效性。激光共聚焦和western blot试验显示REBOV GP蛋白在嵌合病毒中获得正确表达;病毒生长动力学结果显示,r VSV△G*GFP-REBOV-GP与亲本株具有不同的生长特性;将r VSV△G*GFP-REBOV-GP接种小鼠,未引起小鼠发病,体重增长趋势与对照组一致,表明嵌合病毒具有良好的安全性;中和试验结果表明该嵌合病毒能够诱导小鼠产生针对REBOV GP的高滴度中和抗体。本研究制备的r VSV△G*GFP-REBOV-GP为进一步的动物免疫实验奠定了基础。

关键词：水泡性口炎病毒莱斯顿型埃博拉病毒 GP蛋白

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湖南洞庭湖区12株H9N2亚型AIV全基因序列的进化分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2016年第3期44卷 1-10页

作者：黄建龙谭丹王昌建张朝阳何世成朱春霞汪洪冰邓国华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制... 详细信息

【目的】从分子生物学角度了解H9N2亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的12株H9N2亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序,应用Mega 5软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。【结果】12株H9N2亚型禽流感毒株HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性病毒。12株H9N2亚型禽流感病毒HA、NA基因进化比较同步,均处于DK/HK/Y280/97分支,而6个内部基因(M、PB2、PB1、PA、NA、NS)与高致病性禽流感H5亚型毒株呈现不同程度重组现象,且与H7N9亚型毒株基因的核苷酸同源性很高,很有可能为其提供内部基因。【结论】湖南省洞庭湖地区H9亚型禽流感病毒的遗传演化较为复杂,存在广泛的基因重组现象。

关键词： H9N2亚型禽流感遗传进化洞庭湖区湖南省

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Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 226-229页

作者：梁伟峰周国辉刘文铭李超斯刘云于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验... 详细信息

为建立Asia1型口蹄疫(FMD)快速病原学诊断方法,本研究采用纯化的Asia1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗Asia l型FMDV单克隆抗体(MAb)2E10。经间接免疫荧光试验特异性鉴定,2E10为FMDV型特异型MAb。其抗体亚类为Ig G1/资,杂交瘤细胞上清和腹水抗体效价分别为1颐256和1颐104,相对亲和力常数为2.5 mol/L。在此基础上,以本实验室前期制备的MAb 2D8为包被抗体,以HRP标记的MAb 2E10为检测抗体建立了检测Asia1型FMDV抗原的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法针对FMDV细胞毒的最低检出量为103TCID50,对O型FMDV、A型FMDV、牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒及牛传染性鼻气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究建立的Asia1型FMDV DAS-ELISA方法为Asia1型FMD病原学诊断试剂盒的研发奠定了基础。

关键词： Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体双抗体夹心ELISA

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表达H5亚型禽流感病毒不同形式HA基因重组鸭瘟病毒的构建及HA表达形式的鉴定

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 266-270页

作者：刘璐丁蕾蕾柳金雄陈普成李爱心胡玉珍姜永萍陈化兰孙晓林甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研究禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的信号肽以及跨膜区对HA蛋白在重组病毒中表达的影响,本研究以鸭瘟病毒(DEV)为载体,在DEV基因组的US7和US8基因之间通过同源重组插入去除信号肽或跨膜区的H5N1亚型AIV HA基因编码序列,分别构建了缺... 详细信息

为研究禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的信号肽以及跨膜区对HA蛋白在重组病毒中表达的影响,本研究以鸭瘟病毒(DEV)为载体,在DEV基因组的US7和US8基因之间通过同源重组插入去除信号肽或跨膜区的H5N1亚型AIV HA基因编码序列,分别构建了缺失信号肽HA基因的DEV重组病毒(r DEV-PK)和缺失跨膜区HA基因的DEV重组病毒(r DEV-PSM),并传至20代,经PCR对插入的外源基因编码序列扩增及序列测定,表明外源基因能够在重组病毒基因组中稳定存在;间接免疫荧光和western blot鉴定结果表明去除信号肽的HA蛋白能够在重组病毒感染的鸡胚成纤维细胞浆中正确表达,而去除跨膜区的HA蛋白能够在感染细胞的培养液中检测到。本研究为表达H5N1亚型AIV HA基因重组DEV载体弱毒疫苗在鸭体内免疫机制的进一步研究奠定基础。

关键词：禽流感病毒 HA蛋白重组鸭瘟病毒信号肽跨膜区

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