检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 194-197页

作者：王潇博石达陈建飞时洪艳张鑫袁婧刘建波朱向东王宇飞冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)诱导体外细胞产生病变及细胞凋亡的动态变化,本研究应用western blot、间接免疫荧光、细胞活性计数(CCK-8)等方法检测PEDV感染Vero E6细胞后不同时间点细胞内病毒含量、细胞活性、凋亡小体的形成,以及相关... 详细信息

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)诱导体外细胞产生病变及细胞凋亡的动态变化,本研究应用western blot、间接免疫荧光、细胞活性计数(CCK-8)等方法检测PEDV感染Vero E6细胞后不同时间点细胞内病毒含量、细胞活性、凋亡小体的形成,以及相关凋亡因子的变化。结果表明,感染后24 h细胞内病毒含量开始明显升高,48 h时达到峰值。同时在病毒感染24 h后出现明显的细胞病变,感染48 h后出现典型的凋亡特征,细胞聚堆,细胞核内染色质固缩,形成凋亡小体。CCK-8分析检测结果显示,与对照组相比感染病毒细胞活性明显降低。另外,western blot结果表明促凋亡因子蛋白水解酶Caspase-3在病毒感染过程中被活化。该研究结果进一步证实了PEDV感染可以诱导细胞凋亡,其中Caspase-3的激活在病毒诱导细胞凋亡的过程中发挥重要作用。

关键词：猪流行性腹泻病毒细胞凋亡 Caspase-3

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Clade7．2H5N1亚型禽流感重组病毒疫苗株的构建及免疫效力评价

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 580-584页

作者：宋洋铭谷春阳曾显营邓国华杨孝朴陈化兰甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

致病性禽流感病毒(AIV)编码HA抗原基因的不断进化,进而出现抗原性变异是导致原有疫苗无法提供完全免疫保护的主要原因,因此需要构建并更新疫苗株。本研究在系统分析AIV病毒抗原性基础上,采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8... 详细信息

致病性禽流感病毒(AIV)编码HA抗原基因的不断进化,进而出现抗原性变异是导致原有疫苗无法提供完全免疫保护的主要原因,因此需要构建并更新疫苗株。本研究在系统分析AIV病毒抗原性基础上,采用反向遗传操作系统,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以clade7.2 H5亚型A/chicken/He Bei BD/SC007/2012(CK/BD/2012)的c DNA为模板经SOE-PCR扩增,将高致病性AIV的HA基因编码裂解位点序列336PQIEGRRRKR348突变为低致病性特征的336PQRETR343序列,以A/chicken/Shanxi/2/2006(CK/SX/2/2006)作为NA基因的供体,构建clade7.2 AIV疫苗候选株r PR8-BD/2012,并对其进行生物学特性和免疫原性评估。结果显示,该疫苗候选株对鸡胚无致病性,能够在鸡胚中高滴度生长(9 log2),静脉内接种致病指数(IVPI)为0,对雏鸡无致病性。将r PR8-CK/BD/2012作为种毒,按照常规方法制备灭活疫苗,免疫4周龄SPF雏鸡,免疫3周后对亲本强毒株的HI平均抗体效价达7.2 log2;采用亲本强毒A/chicken/He Bei BD/SC007/2012和同分支异源强毒株A/chicken/He Bei/SD001/2013以105 EID50剂量攻击,免疫组均能够得到完全保护。以上结果表明r PR8-CK/BD/2012疫苗候选株具有鸡胚适应性、生物安全性和良好的免疫原性,可以作为有效防控clade7.2 H5N1 AIV的疫苗株。

关键词： H5N1 禽流感病毒反向遗传操作系统疫苗株免疫效力评价

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流感病毒NP蛋白与宿主蛋白CAP1相互作用的研究

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中国预防兽医学报 2016年第7期38卷 513-517页

作者：姜水涛赵玉辉周圆罗维玉张杰李呈军陈化兰姜丽中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

流感病毒核衣壳蛋白(NP)是病毒核糖核蛋白复合体(v RNP)的主要组成部分,主要调控病毒基因组的转录和复制。为筛选与流感病毒NP相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术(Y2H)在A549细胞c DNA文库中筛选到与其相互作用的宿主蛋白Aden... 详细信息

流感病毒核衣壳蛋白(NP)是病毒核糖核蛋白复合体(v RNP)的主要组成部分,主要调控病毒基因组的转录和复制。为筛选与流感病毒NP相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术(Y2H)在A549细胞c DNA文库中筛选到与其相互作用的宿主蛋白Adenylate cyclase-associated protein 1(CAP1),并通过酵母回交验证、免疫共沉淀技术(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与CAP1之间存在特异性的直接相互作用。此外,利用激光共聚焦试验证实NP与CAP1共定位于A549细胞的细胞质内。在HEK293T细胞中过表达CAP1蛋白后,流感病毒的复制能力下降,表明CAP1对流感病毒复制具有抑制作用。本研究对该蛋白的鉴定为流感病毒的复制机理研究奠定了基础。

关键词：酵母双杂交 NP蛋白 CAP1蛋白相互作用

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两株EA H1N1亚型猪流感病毒在豚鼠体内的复制和传播能力评估

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中国预防兽医学报 2016年第3期38卷 190-193页

作者：陶世宇王增陈艳杨焕良孔晖晖陈化兰胡永浩甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为评价欧亚类禽H1N1(EA H1N1)亚型猪流感病毒(SIV)在哺乳动物间呼吸道飞沫的传播能力,本研究选取A/swine/Henan/11/2005(H1N1)(He N11)和A/swine/Hunan/26/2010(H1N1)(HuN26)为代表病毒株,以106EID50/300μL的剂量,经鼻腔分别感染3只豚鼠,24 h后在相邻笼内分别放入3只豚鼠作为传播组,通过检测鼻洗液内的病毒滴度评价2株病毒在豚鼠间呼吸道飞沫的传播能力;并以相同剂量分别感染2只豚鼠,感染72 h后通过检测脏器内病毒滴度评价2株病毒在豚鼠体内的复制能力。传播试验结果表明,HeN11株在豚鼠间的传播能力为3传1,HuN26株为3传3。脏器中病毒滴定结果表明,HeN11株在下呼吸道具有良好的复制能力,而HuN26株主要在上呼吸道复制。进一步的氨基酸差异分析表明,2株病毒株共有62个氨基酸差异。以上结果表明,2株病毒株均能够在豚鼠呼吸道内进行不同程度的复制,而呼吸道飞沫传播能力显著不同。本实验为进一步研究EA H1N1 SIV在哺乳动物间呼吸道飞沫传播的分子机制奠定基础,也为猪流感的防控提供了实验依据。

关键词： EA H1N1 猪流感病毒豚鼠复制传播

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蛋白激酶R的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

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甘肃农业大学学报 2016年第1期51卷 7-12页

作者：张涛罗维玉姜水涛朱鹏阳李呈军陈化兰孙晓林姜丽甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21... 详细信息

【目的】构建蛋白激酶R的原核表达系统并制备其多克隆抗体.【方法】利用RT-PCR方法从人的A549细胞中扩增蛋白激酶R(PKR)基因,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,经纯化后制备特展异性多克隆抗体.【结果】PKR基因经测序鉴定后转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度0.5mmol/L IPTG诱导表达GST-PKR融合蛋白,SDS-PAGE分析表明融合蛋白获得稳定表达.表达产物经Glutathione-sepharose 4B亲和层析初步纯化后,用凝血酶切除GST标签,而后经离子交换层析及分子筛在AKTA Explorer上进一步纯化,得到高纯度无标签的PKR蛋白.以纯化后的PKR蛋白为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,斑点杂交试验检测其效价达到1∶50 000以上,Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明制备的多抗与PKR蛋白的反应具有高度特异性.【结论】PKR蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的多克隆抗体可用于PKR蛋白的检测,从而为研究PKR在病毒感染过程中的作用提供了重要的工具.

关键词： PKR 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

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1型和4型马疱疹病毒VHS蛋白在HeLa细胞中的表达与定位

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黑龙江畜牧兽医 2016年第1期 145-147,261页

作者：曲娟娟胡晓亮顾海东张春苗冉多良相文华东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 新疆农业大学动物科技学院乌鲁木齐830000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-b... 详细信息

为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-blot验证该蛋白在HeLa细胞中的表达情况,并以激光共聚焦显微成像技术确定VHS蛋白在真核细胞中的分布及亚细胞定位。结果表明:重组质粒p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4在HeLa细胞中获得了表达,且主要聚集于细胞浆。说明VHS蛋白能够在外源真核细胞HeLa中表达,蛋白主要位于HeLa的细胞浆中。

关键词：马疱疹病毒 HeLa细胞 VHS蛋白表达定位免疫印迹

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传染性法氏囊病病毒感染鸡脾脏病理变化的研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 279-283页

作者：孙德君丁国杰藏玉婷宋扬何希君周建华李继昌东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 哈药集团生物疫苗有限公司黑龙江哈尔滨150069 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡的临床诊断主要检测法氏囊组织的病理变化,包括分析感染组和对照组的法氏囊重量与体重比值(囊重指数)。本研究采用IBDV强毒株BC6-85感染22日龄SPF鸡3 d后,对其免疫器官法氏囊、脾脏及胸腺的重量和组织病... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡的临床诊断主要检测法氏囊组织的病理变化,包括分析感染组和对照组的法氏囊重量与体重比值(囊重指数)。本研究采用IBDV强毒株BC6-85感染22日龄SPF鸡3 d后,对其免疫器官法氏囊、脾脏及胸腺的重量和组织病理变化等进行检测。研究显示,与健康对照组相比,感染组的法氏囊虽然呈现明显病理变化,但平均囊重指数无显著减少。此外,鸡感染IBDV后脾脏也发生了明显的外观和组织学病理变化,特别是其重量与体重的比值增加极其显著(p<0.01),并且感染组内各样本的脾脏重量与对应体重显著相关(r=0.695,p=0.026)。IBDV感染鸡的胸腺未发现明显病理改变。以上虽然仅为IBDV特定病毒株的结果,且样本数量有限,但提示作为重要的B淋巴细胞和单核/巨噬细胞器官,脾脏在IBDV感染鸡的重量与体重比,(脾重指数,本研究为1.66)可以考虑成为临床和现地快速诊断法氏囊病的参考指标之一。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒法氏囊脾脏囊重指数

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猪戊型肝炎病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 322-325页

作者：闫蕾涂亚斌李海张交儿王刚刘永刚陈志宝蔡雪辉黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为建立猪戊型肝炎病毒(SHEV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针,并对PCR反应条件进行优化。结果表明,该方法扩增的相关系数可达0.999,在102拷贝/μL^109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环... 详细信息

为建立猪戊型肝炎病毒(SHEV)的TaqMan荧光定量PCR检测方法,本研究根据SHEV基因ORF2保守区设计引物及探针,并对PCR反应条件进行优化。结果表明,该方法扩增的相关系数可达0.999,在102拷贝/μL^109拷贝/μL内具有良好的线性关系。对猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和伪狂犬病毒的RNA或DNA进行检测,结果均为阴性。该方法可以检出最低拷贝数为10拷贝/μL。重复性试验结果表明该方法的批内和批间变异系数均小于3.0%。本研究使用该荧光定量PCR检测方法对黑龙江省临床收集的131份样品(肝脏45份、粪便86份)进行检测,总阳性率为11.45%,其中肝脏阳性率为22.22%,粪便阳性率为5.81%。该方法的建立为SHEV的快速检出及绝对定量奠定了良好的基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒荧光定量PCR TaqMan探针应用

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宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 429-433页

作者：胡丹王斌冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p ... 详细信息

ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。

关键词： erp57 CRISPR/Cas9系统基因敲除流感病毒

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我国牛传染性鼻气管炎研究现状及防控展望

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中国奶牛 2016年第6期 39-43页

作者：薛飞朱远茂马磊中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

牛传染性鼻气管炎（IBR）,或称为传染性脓疱性外阴阴道炎（IPV）,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的牛的一种急性接触性传染病,在临床上表现多种病型,如上呼吸道黏膜炎症、结膜炎、乳房炎、脓疱性外阴阴道炎或龟头包皮炎、幼牛脑... 详细信息

牛传染性鼻气管炎（IBR）,或称为传染性脓疱性外阴阴道炎（IPV）,是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）引起的牛的一种急性接触性传染病,在临床上表现多种病型,如上呼吸道黏膜炎症、结膜炎、乳房炎、脓疱性外阴阴道炎或龟头包皮炎、幼牛脑膜脑炎和流产等,可以认为是由同一种病原引起多种病症的疫病。世界动物卫生组织将IBR列为B类动物疫病。IBR于1953年在美国加利福尼亚州首次被报道,其后引起了全球重视。

关键词：外阴阴道炎牛疱疹病毒龟头包皮炎脑膜脑炎乳房炎接触性传染病上呼吸道黏膜病型基因缺失疫苗病毒中和试验

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