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第十二届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆陆涛峰陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001

目的以干羊草为实验对象，比较辐照灭菌和高压灭菌前后及不同灭菌方法对其营养成分的影响情况.方法采用Co60γ射线进行辐照，高压灭菌，按照国标法测定并计算干羊草灭菌前后干常规养分及纤维素的含量.结果羊草经高压灭菌后干物质、... 详细信息

目的以干羊草为实验对象，比较辐照灭菌和高压灭菌前后及不同灭菌方法对其营养成分的影响情况.方法采用Co60γ射线进行辐照，高压灭菌，按照国标法测定并计算干羊草灭菌前后干常规养分及纤维素的含量.结果羊草经高压灭菌后干物质、粗纤维显著低于灭菌前(P＜0.05)，辐照后干物质显著低于灭菌前、显著高于灭菌后高压组(P＜0.05);辐照后粗纤维显著低于灭菌前及灭菌后高压组(P＜0.05);高压灭菌后粗灰分、粗蛋白、磷含量显著低于灭菌前及辐照组(P＜0.05);高压及辐照后无氮浸出物含量较灭菌前显著增加(P＜0.05).结论灭菌过程降低了干羊草营养成分的含量，辐照灭菌总体上对其营养成分造成的损失低于高压灭菌，辐照可作为羊草在反刍实验动物粗饲料中应用的灭菌的方法.

关键词：干羊草辐照灭菌高压灭菌营养成分纤维素

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肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 31-34页

作者：刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,... 详细信息

延伸热不稳定因子(EF-Tu)广泛存在于原核生物中,主要生物功能是在蛋白质合成过程中负责肽链的延伸。为研究肠炎沙门菌EF-Tu的tuf A基因缺失对环境压力的应答变化,本研究利用改进的Red同源重组方法构建肠炎沙门氏菌SM6株的tuf A缺失株,命名为SM6Δtuf A,并鉴定缺失株的形态学变化,分析耐酸性、渗透应力、温度缺氧应力、氧化应力的改变。结果表明缺失株对酸性条件及升温缺氧的耐受与亲本株相似;对渗透压的耐受稍强于亲本株,但差异不显著;对氧化压力的耐受显著弱于亲本株。本研究构建的肠炎沙门氏菌tuf A基因缺失株SM6Δtuf A,为进一步研究EF-Tu在沙门氏菌的生物学和致病机制中的作用奠定了基础。

关键词：延伸因子EF-Tu Red同源重组沙门氏菌生物学特性环境压力

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鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析

鸡IL-10原核表达抗血清用于体内实验的初步分析

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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：韩凌霞杨柳彭蔚宇王丽廷王兴童陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功... 详细信息

目的：获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性. 方法：采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10.转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清.分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性. 结果：构建成功chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,制备了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应. 结论：原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测.

关键词：鸡病毒病鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析

表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠模型的鉴定分析

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：王伟尹海畅臧凤霞周长良陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001

目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠，为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上，运用PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot方法对转基因小... 详细信息

目的本研究鉴定分析制备的表达抗菌肽cecropin-XJ转基因小鼠，为利用转基因小鼠模型探讨抗菌肽的生物学功能及其抗菌机制奠定基础。方法在成功获得转基因小鼠的基础上，运用PCR、Southern blot、RT-PCR、Western blot方法对转基因小鼠进行鉴定评价，选取阳性转基因小鼠与野生型(WT)小鼠杂交繁育F1代转基因小鼠。结果经PCR检测证实在转基因小鼠尾、肺、肝、心脏和脾脏均有外源基因的整合;RT-PCR证实抗菌肽基因在小鼠各组织细胞中转录;尾组织中Western blot同样证实了外源基因在转基因小鼠体内表达;共获得21只F0代小鼠，其中有5只小鼠在DNA、RNA以及蛋白水平的检测为阳性。结论本研究建立了转基因动物的检测方法，为进一步在体内评价抗菌肽抑菌活性奠定了基础。

关键词： cecropin-XJ 转基因小鼠模型

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TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响的初步分析

TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响的初步分析

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2016第十四届中国北方实验动物科技年会

作者：姜雪婷王伟李永青庞中兵孙海阳陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨 150001

目的：通过对TLR3基因敲除小鼠免疫相关指标分析,研究TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响,为应用敲除小鼠模型研究TLR3在病毒感染引发的天然免疫反应中的作用及病毒致病的分子机制奠定基础. 方法：PCR、测序分析敲除小鼠基因型;利用聚... 详细信息

目的：通过对TLR3基因敲除小鼠免疫相关指标分析,研究TLR3基因敲除对小鼠免疫功能影响,为应用敲除小鼠模型研究TLR3在病毒感染引发的天然免疫反应中的作用及病毒致病的分子机制奠定基础. 方法：PCR、测序分析敲除小鼠基因型;利用聚肌胞苷酸(Poly I：C)处理24h,通过自动血液计数仪测量分析外周血中淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞百分含量;Real-TimePCR检测TLR3信号通路中TRIF、IFN-β、Mx、IL-6和TNF-α相对表达情况;流式细胞术分析外周血中树突状细胞(CD86)、NK细胞(CD49)、淋巴细胞(CD3、CD8)比例变化. 结果：本实验所用TLR3基因敲除小鼠为纯合子(TLR3-/-),测序表明TLR3基因缺失13个碱基;在Poly I：C刺激下,TLR3-/-小鼠较WT小鼠外周血中淋巴细胞百分比显著降低,单核细胞中性粒细胞显著升高,脾脏中TRIF、IFN-β、Mx、IL-6和TNF-α表达量显著降低,外周血中CD86+细胞比例显著降低,CD49+细胞未见显著差异,细胞毒性T淋巴细胞(CD3+CD8+)显著降低. 结论：在Poly I：C刺激条件下,TLR3基因缺失引起其下游信号转导通路变化,影响IFN-β基因表达及炎性因子的释放,从而影响小鼠免疫功能.

关键词：病毒感染免疫功能 TLR3基因敲除干扰素β 炎性因子

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一株虹鳟嗜冷益生菌Aeromonas popoffii的分离鉴定及体外抗病毒特性研究

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中国预防兽医学报 2016年第1期38卷 40-44页

作者：王宏磊崔红玉卢彤岩徐黎明刘淼王云峰王笑梅东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测... 详细信息

为分离鉴定冷水鱼类的益生菌,本研究从健康的冷水鱼虹鳟幼鱼的肠道、胆囊等部位分离得到75株嗜冷耐低温生长菌株,经过耐低温温度梯度筛选及体外抗菌试验初步筛选出一株虹鳟嗜冷益生菌株,经革兰氏染色及API 50 CH生化鉴定、16S r DNA测序比对,鉴定为Aeromonas popoffii,将其命名为HL60分离株。通过耐胆酸游离酸试验、耐酸试验、体外抑菌试验和体外对鲤鱼上皮细胞(EPC)增殖影响试验及体外抗病毒(传染性造血器官坏死病病毒)试验,结果表明*** HL60分离株具有良好的益生特性及体外抗病毒活性。本研究分离获得的*** HL60分离株为冷水鱼益生菌株活载体疫苗开发及应用奠定了基础。

关键词：益生菌嗜冷菌抗病毒特性益生特性

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东北地区奶牛乳房炎表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

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中国预防兽医学报 2016年第4期38卷 307-311页

作者：董志民张万江刘琪卢中冶王秋东华欣韩吉雨宋丽华刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010080 农安县动物卫生监督所吉林长春130200

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄... 详细信息

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST),同时应用PCR扩增分离株中携带的相关耐药基因。研究结果表明,在330份奶样中共分离到表皮葡萄球菌32株(9.7%),腐生葡萄球菌34株(10.3%);PFGE分析共获得9种不同谱型的表皮葡萄球菌和11种不同谱型的腐生葡萄球菌。药敏试验结果显示,两种菌对青霉素(70%)、苯唑西林(60%)和林克霉素(55%)的耐药率较高,主要耐药基因为lnu(B)(40%)、erm(B)(30%)和mec A(25%)。本研究结果揭示了东北地区奶牛乳房炎病原菌表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的耐药谱和流行情况,为临床合理用药及奶牛乳房炎的防控提供了实验依据。

关键词：表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌分子流行病学多位点序列分型

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副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素对细胞毒性机制的研究

副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素对细胞毒性机制的研究

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨 150001

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,***)是引起副猪嗜血杆菌病的病原,该病主要表现为多发性浆膜炎、关节炎及脑膜炎.细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)是***的重要毒力园子,由CdtA、CdtB和CdtC3个亚基组成.CDT全毒素... 详细信息

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,***)是引起副猪嗜血杆菌病的病原,该病主要表现为多发性浆膜炎、关节炎及脑膜炎.细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending toxin,CDT)是***的重要毒力园子,由CdtA、CdtB和CdtC3个亚基组成.CDT全毒素能够引起最显著的细胞膨胀、细胞周期阻滞和细胞凋立。p53信号通路抑制剂Pifithrin-α和CDT共同处理PK-15细胞能够明显地抑制其细胞凋立，说明CDT诱导的凋亡是p53依赖的。

关键词：副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素细胞毒性分子机制

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7型猪链球菌免疫相关性蛋白乳酸脱氢酶的筛选与分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2015年第10期43卷 1-6页

作者：高明明王淑杰刘永刚姜成刚王刚涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

【目的】快速高效筛选7型猪链球菌免疫原性蛋白,以作为猪链球菌疫苗的候选分子。【方法】以7型猪链球菌分离株WH07为样品,应用免疫蛋白质组学技术建立了WH07株全菌蛋白的双向电泳体系,并利用蛋白质免疫杂交技术筛选免疫原性蛋白。【结... 详细信息

【目的】快速高效筛选7型猪链球菌免疫原性蛋白,以作为猪链球菌疫苗的候选分子。【方法】以7型猪链球菌分离株WH07为样品,应用免疫蛋白质组学技术建立了WH07株全菌蛋白的双向电泳体系,并利用蛋白质免疫杂交技术筛选免疫原性蛋白。【结果】获得了分辨率及重复性良好的双向电泳（2-DE）图谱,且得到3个具有免疫反应性的蛋白质点,经质谱鉴定其归属于1个蛋白,即乳酸脱氢酶（LDH）。生物信息学预测表明,该蛋白分子质量为35 420ku,理论等电点为5.05,具有2个跨膜区,分别位于第10~28位和第110~129位,并根据预测分析结果成功模拟了蛋白质的三级结构。【结论】从猪链球菌WH07菌株中筛选并鉴定了1个具有免疫原性的蛋白,即乳酸脱氢酶,并模拟了其三级结构。

关键词：猪链球菌免疫相关蛋白双向电泳质谱鉴定蛋白结构预测

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鹅细小病毒YG株的鉴定及在器官中的分布

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中国兽医科学 2015年第9期45卷 912-917页

作者：邵周伍林李晨曦刘明张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究从黑龙江省某养鹅场送检的小鹅瘟疑似病例中分离到一病原,采用鹅胚接种、PCR检测、IFA检测、病毒效价测定和动物致病性试验等方法对该病原进行鉴定。结果显示,所分离到的病原为鹅细小病毒(GPV),将其命名为YG株;YG株的TCID50为104.... 详细信息

本研究从黑龙江省某养鹅场送检的小鹅瘟疑似病例中分离到一病原,采用鹅胚接种、PCR检测、IFA检测、病毒效价测定和动物致病性试验等方法对该病原进行鉴定。结果显示,所分离到的病原为鹅细小病毒(GPV),将其命名为YG株;YG株的TCID50为104.0/0.2mL;对YG株全基因组进行扩增和序列分析后发现,YG株与标准毒株B株的核苷酸同源性最高,高达98.3%;病理学观察显示,GPV对感染后的雏鹅具有明显的组织损伤,主要侵害易感雏鹅的消化系统;免疫组织化学法检测结果表明,抗原主要分布在雏鹅的小肠、肝、肾及脾中,其中小肠中的抗原含量最高。

关键词：鹅细小病毒分离鉴定器官分布

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