检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 656-659页

作者：檀群松王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为评估从暗胸朱雀中分离的一株禽2型副黏病毒APMV-2/Procarduelis nipalensis/China/Suiling/53/2013(Suiling/53)的致病性,本研究分别对该病毒的鸡胚平均致死指数(MDT)、脑内致病指数(ICPI)及对4周龄SPF鸡和4周龄BALB/c小鼠的感染能力进行测定。结果显示该病毒株的MDT为120 h;ICPI为0;将含有病毒的尿囊液点眼滴鼻接种4周龄SPF鸡后未出现明显临床症状或死亡,而分别从感染后2 d的气管组织、小肠、脑及感染4 d后的肺脏、气管、心脏中分离出该病毒;在BALB/c小鼠感染试验中,未出现明显临床症状,并且未从采集的组织中分离到该病毒。本研究结果表明病毒株Suiling/53对SPF鸡呈低致病力,而对BALB/c小鼠可能无感染性。

关键词：禽2型副黏病毒致病指数致病性 SPF鸡和BALB/c小鼠

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猪源伪狂犬病病毒gB基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2015年第11期45卷 1166-1170页

作者：高嘉聪叶超赵款常晓博郭金潮姜成刚王淑杰武嘉男蔡雪辉安同庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为加强对猪源伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）的监测,在PRV gB基因的保守区设计特异性引物,并建立了检测猪源PRV的实时定量PCR。该方法可检测PRV的最低TCID50为2×10^1/mL,比伪狂犬病诊断技术国家标准中的PCR方法敏感100-1 ... 详细信息

为加强对猪源伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）的监测,在PRV gB基因的保守区设计特异性引物,并建立了检测猪源PRV的实时定量PCR。该方法可检测PRV的最低TCID50为2×10^1/mL,比伪狂犬病诊断技术国家标准中的PCR方法敏感100-1 000倍,且特异性、重复性好。利用该方法测定了PRV SC株在感染Vero细胞后的复制动态;结果显示,PRV在感染后第12小时进入复制高峰期,在感染后第24小时达到平台期。本方法具有快速、敏感和重复性好等特点,能够为研究病毒的复制动态或临床样品的检测提供技术支持。

关键词：猪伪狂犬病病毒实时荧光定量PCR gB基因病毒复制动态曲线

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猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主丝/苏氨酸蛋白激酶N1相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第7期37卷 495-498页

作者：何文瑞廖亚金李素冯烁董泓陈佳宁仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为筛选并鉴定与猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术以CSFV C蛋白为诱饵从猪外周血单个核细胞(PBMC)c DNA表达文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白,共筛选到6种蛋白,分别为ATP5B、SON3、PKN1、PCBP1、R... 详细信息

为筛选并鉴定与猪瘟病毒(CSFV)衣壳(C)蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交技术以CSFV C蛋白为诱饵从猪外周血单个核细胞(PBMC)c DNA表达文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白,共筛选到6种蛋白,分别为ATP5B、SON3、PKN1、PCBP1、RPS20和IQGAP1,根据Gene Ontology分析结果,这些蛋白分别参与细胞的增殖和代谢等过程。本研究选取丝/苏氨酸蛋白激酶N1(PKN1)进行进一步验证,经酵母共转化试验、免疫共沉淀试验和GST pull-down试验证实,宿主PKN1蛋白与CSFV C蛋白之间存在特异性结合。本研究首次证明PKN1与CSFV蛋白之间的相互作用关系,为进一步研究PKN1蛋白在CSFV感染过程中发挥的作用奠定了基础。

关键词：猪瘟病毒 C蛋白丝/苏氨酸蛋白激酶N1 病毒-宿主相互作用

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一株野鸟源H3N8亚型流感病毒分离株的全基因组序列分析

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中国动物检疫 2016年第4期33卷 77-79,93页

作者：兰玲王涛王晶程子兵邓国华陈化兰新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830011 塔城市动物疫控中心新疆塔城834300 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究对2014年从新疆额敏县分离到的一株野鸟源H3N8亚型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014(H3N8)进行了全基因序列和进化分析。序列分析显示,HA裂解位点序列为^(339)PEKQTR-GLFG^(348),为典型的低致病性禽流感病毒特征,NA基因具... 详细信息

本研究对2014年从新疆额敏县分离到的一株野鸟源H3N8亚型流感病毒A/wild bird/Xinjiang/S3525/2014(H3N8)进行了全基因序列和进化分析。序列分析显示,HA裂解位点序列为^(339)PEKQTR-GLFG^(348),为典型的低致病性禽流感病毒特征,NA基因具有6个潜在的糖基化位点,与病毒株A/mallard/Czech Republic/14333-1K/2011(H3N8)核苷酸高度同源(97.7%)。该毒株的内部基因来源较复杂,其PB1、NP基因分别与A/ruddy shell duck/Mongolia/921C2/2009(H7N1)和A/wild duck/Korea/MHC39-26/2011(H7N9)的同源性最高,其余内部基因与H2、H3、H6、H7等亚型禽流感病毒分离株同源性最高,呈现明显的异源性。除PB2基因外,其余基因片段均来源于野鸟源禽流感病毒。

关键词：流感病毒 H3N8亚型基因组分析

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传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选

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中国畜牧兽医 2015年第2期42卷 317-323页

作者：王念陈玉明张礼洲高立卢珍高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白... 详细信息

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白与宿主细胞的相互作用,本研究将IBDVVP4基因克隆入pGBKT7,构建诱饵载体pGBGtVP4,自激活试验证明其无自激活活性,对酵母细胞没有毒性。运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)文库中筛选VP4的互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得22个候选互作宿主细胞蛋白,为深入研究IBDV VP4与宿主互作的效应和机制奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP4 酵母双杂交诱饵载体互作蛋白

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结核分枝杆菌rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其粘附特性的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 199-202页

作者：李华芳曹俊刘松艳陈利苹刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细... 详细信息

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细胞)互作,通过激光共聚焦显微镜观察到蛋白对细胞的特异性粘附。为进一步验证该试验结果,将rv0394c基因克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒p MV262中,将重组质粒电转化于非致病性的耻垢分枝杆菌中进行表达。构建的重组菌与A549细胞进行互作,结果表明重组菌可以粘附于A549细胞表面,而且这种粘附能够被RV0394c重组蛋白所阻断,这些结果表明RV0394c蛋白具有粘附细胞的能力,属于该菌的粘附蛋白之一。RV0394c蛋白粘附特性的鉴定为进一步研究该蛋白在致病性中的作用提供了实验依据。

关键词：结核分枝杆菌 rv0394c基因 pMV262 耻垢分枝杆菌粘附

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犬副流感病毒分子克隆的构建及全基因组序列分析

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动物医学进展 2015年第10期36卷 10-15页

作者：齐宾宾宋彩玲陈小微曲连东刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了解犬副流感病毒（CPIV）的基因组结构与遗传进化特征，应用RT—PCR分段扩增HRB—V毒株的5个片段，f1、f2、f3以及5′-末端和3′-末端，克隆到pHW2000栽体中并进行测序。经序列拼接获得全基因组序列，与OenBank登录的副流感病毒代表... 详细信息

为了解犬副流感病毒（CPIV）的基因组结构与遗传进化特征，应用RT—PCR分段扩增HRB—V毒株的5个片段，f1、f2、f3以及5′-末端和3′-末端，克隆到pHW2000栽体中并进行测序。经序列拼接获得全基因组序列，与OenBank登录的副流感病毒代表毒株进行对比分析。基因序列分析表明，HRB-V株基因组全长15246nt，含5′-末端、3′-末端和7个ORF具有副流感病毒基因组结构的典型特征；将结构蛋白F、HN以及全基因序列与参考毒株进行比较分析并做遗传进化树，结果表明，HRB—V与CPI一和CPI＋属同一分支，亲缘性相近。核苷酸以及氨基酸序列同源性分析结果表明，HRB-V与各病毒株的F基因的核苷酸同源性在96．5％～98．8％之间，氨基酸同源性为94．2％～98％；HN基因的核苷酸同源性在98．1％～99．5％之间，氨基酸同源性为97％～99．3％。以上试验证明副流感病毒人、猴、猪和犬sV5分离株基因差异较小，具有高度同源性。研究副流感病毒分子克隆的结构，为研究犬副流感病毒反向遗传操作技术平台奠定基础。

关键词：犬副流感病毒分子克隆基因组测序系统进化分析

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 871-874,898页

作者：周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体表位鉴定

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一株虎源H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 908-911页

作者：崔艳芳王德丽刘丽娜赵璐刘丽玲田国彬曾显营李雁冰陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2015年2月,从广西省南宁市动物园发病并死亡的白虎组织样品内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/tiger/Guangxi/1/2015(H5N1)(简称Tiger/GX/1/15)。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其致病性进行研究。基因组序列分... 详细信息

2015年2月,从广西省南宁市动物园发病并死亡的白虎组织样品内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/tiger/Guangxi/1/2015(H5N1)(简称Tiger/GX/1/15)。本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其致病性进行研究。基因组序列分析表明:该病毒的HA基因属于Clade 2.3.2.1分支,HA蛋白的裂解位点处具有多个连续碱性氨基酸(^(341)RRRKR^(345)),具备高致病性禽流感病毒(HPAIV)的典型分子特征。BLAST分析显示该分离株的各基因节段分别与H5N1和H9N2亚型AIV的相应基因节段具有较高的相似性,推测该分离株为一株重组病毒。该病毒在小鼠的肺和鼻甲骨中能够进行有效的复制,对鼠的半数致死量(MLD_(50))>5.52 logEID_(50),对小鼠具有中等致病性。以上结果表明:该分离株未经适应便具备感染小鼠并对小鼠具有较高致死的能力。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型重组进化分析

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3′-U3区碱基突变不影响禽白血病病毒的体外复制能力

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畜牧兽医学报 2015年第4期46卷 608-614页

作者：高雁怩高奇李晓菲贠炳岭祁小乐王永强刘长军崔红玉张艳萍高宏雷王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队哈尔滨150001

为探索近年蛋鸡分离株中出现规律性突变的J群禽白血病病毒(ALV-J)3′-U3区对病毒体外复制能力的影响,以ALV-J原型毒株HPRS-103为骨架,利用融合PCR技术构建含蛋鸡分离株SD09DP04的3′-U3区的嵌合病毒的cDNA克隆。嵌合病毒的感染性克隆与... 详细信息

为探索近年蛋鸡分离株中出现规律性突变的J群禽白血病病毒(ALV-J)3′-U3区对病毒体外复制能力的影响,以ALV-J原型毒株HPRS-103为骨架,利用融合PCR技术构建含蛋鸡分离株SD09DP04的3′-U3区的嵌合病毒的cDNA克隆。嵌合病毒的感染性克隆与原型毒株HPRS-103的感染性克隆分别在脂质体介导下转染DF-1细胞,对收获的病毒分别用间接免疫荧光试验、禽白血病抗原和反转录酶试剂盒检测,结果表明成功拯救到2株病毒。对拯救的2株病毒,进行其3′-U3区启动子活性和增强子活性的检测,以及复制动力学比较分析结果显示,出现特异性规律性突变的U3区对于原毒株的体外复制能力无显著影响。所构建的3′-U3区的嵌合病毒的成功拯救对于进一步探索近年ALV-J流行毒株其3′-U3区出现的规律性突变的功能及意义奠定了基础。

关键词： U3区嵌合病毒 J亚群禽白血病病毒生物学特性

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