检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验动物学报 2015年第6期23卷 551-556页

作者：贺希文高彩霞姜骞权金强蔡原曲连东甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白... 详细信息

目的研究中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从加拿大引进的SPF大白猪和长白猪的遗传学背景。方法实验采用19对微卫星引物对该群体进行群体遗传学分析。结果 19个位点在大白猪群中检测到84个等位基因,长白猪群中检测到89个等位基因。大白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5271和0.5877;长白猪的平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.5652和0.6066。由于S0155、S0143、S0178、Sw857和Sw936位点内等位基因大小和含量差异显著(P<0.01)可作为大白猪和长白猪品种鉴定的候选位点。F-统计和迁移率分析结果表明,群体内的分化较小,遗传结构稳定。结论引进加系SPF纯种大白猪和长白猪的遗传结构与国内部分纯种大白猪和长白猪相比更为稳定,可作为实验动物模型应用于动物医学和科学研究。

关键词： SPF猪微卫星标记实验动物遗传多样性

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2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和NSP2基因遗传变异分析

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中国兽药杂志 2015年第8期49卷 1-6页

作者：常晓博叶超赵款姜成刚王淑杰蔡雪辉张辉安同庆吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了解2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异情况,研究对东北地区3个省份29个地区采集的123份样品进行了检测,并对20份阳性样品的GP5和部分NSP2基因进行了RT-PCR扩增、测序、遗传进化及序列比对分析。结... 详细信息

为了解2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异情况,研究对东北地区3个省份29个地区采集的123份样品进行了检测,并对20份阳性样品的GP5和部分NSP2基因进行了RT-PCR扩增、测序、遗传进化及序列比对分析。结果表明：我国东北地区PRRSV阳性率为16%,与国内外已发表的10株PRRSV参考株相比,GP5基因的核苷酸同源性为84.4%-100%。GP5氨基酸序列分析表明,大多数毒株在氨基酸高变区、中和表位和诱导表位发生了变异,主要变异为：C24→Y24,F25→L25,V27→A27,L28→I28,N34→G34/S34/D34。LN283株GP5和NSP2基因遗传进化树的不同结果表明,LN283株可能涉及PRRSV基因重组。HLJ13株NSP2基因PCR扩增产物有2条相差90 bp的目的条带,且NSP2基因遗传进化树显示两条序列分别属于CH-1a亚群和HuN4亚群,推断HLJ13株可能为经典和高致病性混合感染株。GP5和NSP2遗传进化及氨基酸序列分析结果表明,所有病毒株均属于北美洲型,且以HP-PRRSV为主,经典株与变异株共存。本研究结果可为我国东北地区PRRSV遗传进化研究及疫病防控提供参考。

关键词： PRRSV GP5 NSP2 遗传变异

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hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 409-413页

作者：王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科技学院福建福州350000

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插... 详细信息

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于***。结果显示e GFP能够在***中持续表达。进一步将*** hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化***后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组***中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究***在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。

关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记 hilA基因

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禽流感病毒NS1蛋白与ANXA2蛋白相互作用的研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 899-902页

作者：马勇包红梅王文超孙佳善赵玉辉王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001 阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161

为鉴定与禽流感病毒(AIV)NS1蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮细胞(A549),利用NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)进行免疫沉淀反应(IP)筛选与其结合的宿细胞蛋白,并经质谱鉴定确认膜联蛋白A2(ANXA2)与NS1蛋白之间可... 详细信息

为鉴定与禽流感病毒(AIV)NS1蛋白相互作用的宿主蛋白,本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮细胞(A549),利用NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)进行免疫沉淀反应(IP)筛选与其结合的宿细胞蛋白,并经质谱鉴定确认膜联蛋白A2(ANXA2)与NS1蛋白之间可能存在相互作用关系。免疫共沉淀(Co-IP)试验结果显示ANXA2与NS1蛋白之间具有稳定的相互作用关系;而且,Pull-down试验证明ANXA2与NS1蛋白之间为直接的相互作用。此外,激光共聚焦试验表明NS1和ANXA2共定位于胞浆中。本研究首次鉴定AIV NS1蛋白与宿主蛋白ANXA2间存在相互作用,为进一步研究AIV NS1蛋白的功能奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 NS1蛋白 ANXA2蛋白蛋白互作

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猪瘟病毒衣壳蛋白核仁定位信号鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 93-96页

作者：张鑫刘宁时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)在细胞中的核仁定位信号(No LS),本研究采用截短表达的方法将含有C基因不同片段的真核表达重组质粒转染猪睾丸细胞(ST)。结果表明,瞬时表达的截短C蛋白的aa51-aa71多肽定位于ST细胞核仁中。而将C蛋白的a... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)在细胞中的核仁定位信号(No LS),本研究采用截短表达的方法将含有C基因不同片段的真核表达重组质粒转染猪睾丸细胞(ST)。结果表明,瞬时表达的截短C蛋白的aa51-aa71多肽定位于ST细胞核仁中。而将C蛋白的aa51-aa71缺失突变后,C蛋白则丧失了其核仁定位的能力。此外,将C蛋白的51KKK53突变为51AAA53,也同样导致C蛋白丧失核仁定位能力,表明该序列为核仁定位的核心基序。本研究为进一步分析C蛋白在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁定位信号

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猪瘟病毒衣壳蛋白与宿主细胞核仁素蛋白相互作用

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 430-433页

作者：张鑫时洪艳徐佳中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位... 详细信息

为鉴定猪瘟病毒(CSFV)衣壳蛋白(C)与宿主细胞核仁素(NCL)蛋白的相互作用,本研究将重组质粒p EGFP-CSFV-C转染至猪睾丸细胞(ST)中,采用GST pull-down和免疫共沉淀方法沉淀ST细胞中的NCL蛋白,通过共聚焦显微镜分析C蛋白和NCL蛋白的共定位情况。结果表明,CSFV C蛋白与NCL蛋白在核仁中存在共定位现象,并且在体外和转染细胞中均存在相互作用。NCL蛋白被抑制后,CSFV的复制能力下降。本研究为进一步分析C蛋白核转运机制以及在CSFV复制过程中的功能提供了实验依据。

关键词：猪瘟病毒衣壳蛋白核仁素相互作用

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蓝舌病病毒15型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 392-396页

作者：张沁孙恩成徐青元杨涛王海秀冯瑜菲李俊平吕爽吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为制备抗蓝舌病病毒(BTV)15型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白... 详细信息

为制备抗蓝舌病病毒(BTV)15型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达的重组VP2蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV15VP2蛋白的MAb(2D6)。通过western blot和间接免疫荧光试验对该MAb进行特异性鉴定。结果显示,其仅能够识别BTV15,而不能识别其他血清型BTV以及同种属的中山病毒和茨城病毒,表明该MAb具有良好的反应特异性。利用肽扫描技术对该MAb针对的B细胞表位进行鉴定,确定该MAb识别的抗原表位为15IAPAIIK RYP24。本研究为BTV15特异性抗原检测方法的建立奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒15型 VP2蛋白单克隆抗体抗原表位

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表达西尼罗病毒囊膜糖蛋白PrM/E重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 585-589页

作者：杨洁温志远葛金英王金良华荣虹邵钰步志高东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

西尼罗病毒(WNV)是一种可以导致人与动物死亡的人兽共患病的虫媒病毒。为构建表达WNV Pr M/E蛋白的重组新城疫病毒(NDV)La Sota疫苗株并对其免疫原性进行评价,本研究利用反向遗传学操作技术将人工合成的WNV pr M/E基因插入至NDV基因组P... 详细信息

西尼罗病毒(WNV)是一种可以导致人与动物死亡的人兽共患病的虫媒病毒。为构建表达WNV Pr M/E蛋白的重组新城疫病毒(NDV)La Sota疫苗株并对其免疫原性进行评价,本研究利用反向遗传学操作技术将人工合成的WNV pr M/E基因插入至NDV基因组P和M基因之间,构建重组病毒r La-WNV-Pr M/E。以重组病毒分别感染BHK-21细胞和免疫小鼠,利用RT-PCR、间接免疫荧光、ELISA和流式细胞术(FACS)检测Pr M/E蛋白的表达情况及免疫效果。结果显示,WNV-Pr M/E蛋白在BHK-21细胞中获得正确表达,免疫小鼠可以诱导其产生高水平的抗Pr M/E蛋白特异性Ig G,并且诱导产生WNV E蛋白表位特异性CD4+和CD8+T细胞免疫反应。以上结果表明本研究构建的r La-WNV-Pr M/E可以作为一种具有前瞻性和储备性且安全有效的西尼罗热防控候选疫苗,对我国应对该病的潜在威胁具有十分重要的意义。

关键词：西尼罗病毒 PrM/E蛋白重组新城疫病毒

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I型鸭肝炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用

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中国比较医学杂志 2015年第12期25卷 71-74,80页

作者：刘海燕赵丽丽牛银杰祝明皓刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室东北农业大学生命科学学院哈尔滨150001

目的建立快速诊断I型鸭肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据NCBI下载的20个来自我国不同省份的的I型鸭肝炎病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性。结果该方... 详细信息

目的建立快速诊断I型鸭肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据NCBI下载的20个来自我国不同省份的的I型鸭肝炎病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性。结果该方法敏感性达20拷贝,比常规PCR敏感性高。其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和禽流感(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,I型鸭肝炎病毒检测结果为阳性。用建立的方法检测了江苏徐州采集100份样品,阳性率为92%。说明I型鸭肝炎病毒在江苏徐州地区的鸭群中普遍存在。结论建立了I型鸭肝炎病毒荧光定量PCR方法。

关键词： I型鸭肝炎病毒荧光定量RT-PCR 应用

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一例猫胰腺癌的病理学诊断

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2015年第6期 70-70,184页

作者：杜凤林张卓张交儿胡守萍镇赉县畜牧业管理局吉林镇赉137300 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

胰腺癌多发生于中老年人,在发达国家的发病率高于发展中国家。近年来胰腺癌的发病率呈现上升的趋势,并且有年轻化的倾向。随着宠物猫饲养的增加,临床上猫患肿瘤疾病的比例也逐渐增多。哈尔滨兽医研究所病理研究室收到某宠物医院送检的... 详细信息

胰腺癌多发生于中老年人,在发达国家的发病率高于发展中国家。近年来胰腺癌的发病率呈现上升的趋势,并且有年轻化的倾向。随着宠物猫饲养的增加,临床上猫患肿瘤疾病的比例也逐渐增多。哈尔滨兽医研究所病理研究室收到某宠物医院送检的来自于猫体内的不明肿大物,经病理组织学及免疫组织化学检测,最终诊断为胰腺癌。

关键词：胰腺外分泌病理学诊断肿瘤疾病病理组织学宠物猫肿瘤病胰腺肿瘤免疫组织化学组织病理学变化胰腺腺泡

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