检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 39-43页

作者：曹殿军郭鑫苑纯秀闫丽辉闵平刘培欣卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本试验采用RT_PCR方法对NDVV4 克隆株V4(Hr)的F基因进行了扩增与克隆,并以Sanger’s 双脱氧末端终止法测定出其核苷酸序列,推导出氨基酸序列。F基因全长为1662bp,单一的开放阅读框编码553 个氨基酸的长肽。F蛋白的疏水构型有3 个强疏水... 详细信息

本试验采用RT_PCR方法对NDVV4 克隆株V4(Hr)的F基因进行了扩增与克隆,并以Sanger’s 双脱氧末端终止法测定出其核苷酸序列,推导出氨基酸序列。F基因全长为1662bp,单一的开放阅读框编码553 个氨基酸的长肽。F蛋白的疏水构型有3 个强疏水区;F蛋白上共有12 个Cys 残基位点和5 个潜在糖基化位点。同其亲本毒株Queensland 相比,核苷酸同源率为99.3% ,氨基酸同源率98.7% 。上述主要功能区的序列完全一致,但其中7 个氨基酸的不同,的确导致了二级结构的变化(主要表现为α_螺旋、β_折叠、β_转角和β_卷曲的数量和位置的不同),而且单一的氨基酸差异足以导致二级结构的变化,如:214位的P对L的替换,就导致212 ～215

关键词：新城疫病毒 V4株 F基因核苷酸序列克隆

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传染性喉气管炎病毒(ILTV)gI-gE基因的PCR-RFLP分析

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 52-54页

作者：何召庆王云峰张绍杰孟松树童光志黄骏明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

根据ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株ＩＬＴＶｇＩ－ｇＥ基因的序列，在ＩＬＴＶｇＩ基因、ｇＥ基因及ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取的８株ＩＬＴＶＤＮＡ为模板，分别用这 ... 详细信息

根据ＵＳＤＡ（美国农业部）标准攻毒株ＩＬＴＶｇＩ－ｇＥ基因的序列，在ＩＬＴＶｇＩ基因、ｇＥ基因及ｇＩ－ｇＥ基因连接部的上下游分别设计了一对引物。以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取的８株ＩＬＴＶＤＮＡ为模板，分别用这３对引物进行ＰＣＲ扩增，均获得了与预期片段大小一致的ＤＮＡ片段。然后，用４种限制性内切酶（Ａｖａ Ⅱ、ＨｉｎｆⅠ、ＤｄｅⅠ和ＨａｅⅢ）对所有ＰＣＲ产物进行ＲＦＬＰ分析。结果发现，ＨｉｎｆⅠ和ＤｄｅｌⅠ可以分别将８株ＩＬＴＶｇＥ基因的酶切图谱分为两类，ＨａｅⅢ可将８株ＩＬＴＶ的ｇＩ－ｇＥ基因连接部的酶切图谱分为两类。这表明不同的ＩＬＴＶ毒株的ｇＥ基因变异较大，而ｇＩ基因则相对比较保守。

关键词：传染性喉气管炎病毒 gI-gE基因聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析

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禽轮状病毒感染研究进展

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中国预防兽医学报 2000年第6期22卷 468-470页

作者：崔尚金于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

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猪繁殖与呼吸综合征重组核衣壳蛋白(N)-ELISA诊断方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 127-130页

作者：王云峰周艳君仇华吉钱平蔡雪晖柴文君童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株ＣＨ－ｌａ的核衣壳蛋白基因定向克隆到ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ转移载体ＰＨ启动子下游，与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）的... 详细信息

将猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离株ＣＨ－ｌａ的核衣壳蛋白基因定向克隆到ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ转移载体ＰＨ启动子下游，与苜蓿银蚊夜蛾多核型多角体病毒线性化ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞。获得能隐定表达核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）的重组杆状病毒。利用昆虫杆状病毒表达系统表达的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组Ｎ蛋白作为抗原，包被聚苯乙烯微量反应板，建立了猪繁殖与呼吸综合征重组Ｎ蛋白－ＥＬＩＳＡ诊断方法。试验证明，该方法对其他８种猪疫病阳性血清均无交叉反应，对标准阳性样品的检出率为１００％，具有敏感性高、特异性强的特点。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征 ELISA 重组N蛋白

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鸡新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断方法

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中国预防兽医学报 2000年第6期22卷 415-417页

作者：曹殿军刘培欣闫丽辉孙建宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩... 详细信息

本研究通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列分析 ,根据毒力和序列间的相关规律 ,分别设计合成了两组引物 ,建立了一个可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT_PCR方法 ,对强毒株可扩增出 133bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段 ,弱毒株可以扩增出 2 5 2bp的特异性片段和 36 2bp的通用片段。只需一个RT_PCR反应 ,整个实验过程可在 5小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于 5 0 0pg的NDVRNA。为了增加方法的实用性。

关键词：新城疫病毒融合蛋白基因 RT-PCR

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从血清中分离纯化鸡IgG、IgM的实用方法

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中国预防兽医学报 2000年第5期22卷 378-380页

作者：孙建宏曹殿军刘培欣闫丽辉卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本试验用绵羊红细胞免疫鸡 ,免疫后 5天采血 ,制备富集IgM血清。应用硫酸铵粗提、Sepharose_4B分子筛层析方法 ,从富集IgM的鸡血清一次性分离提取高纯度的IgM及纯度较高的IgG ,并经DEAE_5 2纤维素离子交换层析进一步纯化 ,获得电泳纯的... 详细信息

本试验用绵羊红细胞免疫鸡 ,免疫后 5天采血 ,制备富集IgM血清。应用硫酸铵粗提、Sepharose_4B分子筛层析方法 ,从富集IgM的鸡血清一次性分离提取高纯度的IgM及纯度较高的IgG ,并经DEAE_5 2纤维素离子交换层析进一步纯化 ,获得电泳纯的IgG。经鉴定该方法制备的IgG ,IgM完全可以满足免疫学实验要求 ,从一份血清样品中同时纯化IgM、IgG两种免疫球蛋白。

关键词：硫酸铵 SEPHAROSE-4B IGG IGM 鸡血清分离纯化

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一株内源性猪细小病毒的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 90-93页

作者：李昌文仇华吉童光志田志军王玉春韩孝成刘红全董齐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究从不明病毒污染的ＰＫ１５细胞培养物中分离到了一株猪细小病毒，从形态学、血清学、分子生物学几个方面对其进行了鉴定，同时克隆了该毒株ＶＰ２基因，并测定了其核苷酸序列。将该毒株命名为ＳＹ－９９株。

关键词：猪细小病毒内源性病毒 PK15细胞系 VP2基因

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应用反转录聚合酶链式反应检测鸡Th1样淋巴因子mRNA表达的研究

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中国预防兽医学报 2000年第1期22卷 48-51页

作者：刘胜旺孔宪刚陈洪岩张宝山刘永刚童光志卢景良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR) 和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1 样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结果表明,ConA诱导培养3 小时的鸡脾细胞表达α_干扰素(ChIFN_α) 、γ_干扰素(... 详细信息

应用反转录聚合酶链式反应(RT_PCR) 和限制性酶切分析技术对鸡脾细胞体外受到有丝分裂原ConA刺激的情况下,其Th1 样淋巴因子mRNA的表达水平进行了研究。实验结果表明,ConA诱导培养3 小时的鸡脾细胞表达α_干扰素(ChIFN_α) 、γ_干扰素(ChIFN_γ)和白细胞介素_2(ChIL_2) 等鸡的Th1 样淋巴因子mRNA。未诱导但培养了3 小时的鸡脾细胞可表达ChIFN_α和ChIFN_γmRNA,而未检测到ChIL_2m RNA的表达。正常SPF鸡的脾细胞可表达ChIFN_αmRNA。本研究应用不同公司生产的反转录酶和Taq 多聚酶,取得了相同的结果。表明该方法具有很好的重复性,而且该法敏感而方便。

关键词：限制性酶切分析鸡 Th1样淋巴因子 mRNA RT-PCR

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鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果观察

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中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 179-181页

作者：孟松树张绍杰童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gB、gC和gD基因的重组真核表达质粒及空载体质粒分组肌肉注射雏鸡 ,攻毒后观察免疫保护效果。结果表明 ,重组质粒诱导了免疫应答 ,免疫保护率为 79% 。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 DNA疫苗免疫应管

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禽流感病毒重组核蛋白在琼扩诊断中的应用

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中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 25-27页

作者：邓国华邓国华唐秀英田国彬于康震于康震中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果... 详细信息

利用杆状病毒表达禽流感病毒型特异性抗原－核蛋白，并就重组核蛋白作为禽流感琼扩诊断抗原地特异性和敏感性及作为抗原的其它特性进行了研究，并与普通全病毒琼扩抗原进行了应用比较试验，对３５４份现地可疑血清样品进行了检测，结果表明：该抗原可以特异性地定性检测出所有１５个禽流感病毒亚型的抗血清，与普通全病毒琼扩抗原的检测结果一致，但沉淀线更细密、清晰，保存方便；与我国广泛流行的１５种禽类其它病原体的抗血清没有任何交叉反应，表明该重组核蛋白作为禽流感琼扩抗原特异、敏感、生物安全性更可靠和生产成本更低廉，有利于进一步扩大禽流感疫情调查范围和加大监测力度。

关键词：重组核蛋白琼扩抗原检测

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