检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2000年第3期20卷 216-218页

作者：刘思国江国托康丽娟刘忠贵卢景良刘明春中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 沈阳农业大学动物医学系辽宁沈阳110161

为了给鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)核蛋白基因的遗传变异以及主要功能区的定位研究奠定基础 ,应用特异性引物扩增了 1 0株 IBV中国分离株的核蛋白基因 ,PCR产物全长为 1 .5kb。用 Eco RV和 Kpn 限制性内切酶进行酶切修饰后 ,连接到经... 详细信息

为了给鸡传染性支气管炎病毒 ( IBV)核蛋白基因的遗传变异以及主要功能区的定位研究奠定基础 ,应用特异性引物扩增了 1 0株 IBV中国分离株的核蛋白基因 ,PCR产物全长为 1 .5kb。用 Eco RV和 Kpn 限制性内切酶进行酶切修饰后 ,连接到经过同样处理的载体 p UC1 1 9上。经 PCR、酶切、斑点杂交及 Southernblotting杂交鉴定 ,证实获得了含有

关键词： IBV 核蛋白基因分子克隆鸡免疫预防

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

干酪乳杆菌胸苷酸合成酶基因的分子克隆与序列测定

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 55-58页

作者：王春凤王春凤秦泽荣孙哲崔尚金崔尚金何昭阳刘尚高中国农业大学动物医学院北京100094 吉林农业大学动物科技学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究的目的是以干酪乳杆菌Ｌ．ｃａｓｅｉ３４１０３染色体ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术扩增出胸苷酸合成酶（Ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，　ｔｈｙＡ）基因，利用玻璃奶回收纯化试剂盒回收纯化ｔｈｙＡ基因，并... 详细信息

本研究的目的是以干酪乳杆菌Ｌ．ｃａｓｅｉ３４１０３染色体ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术扩增出胸苷酸合成酶（Ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，　ｔｈｙＡ）基因，利用玻璃奶回收纯化试剂盒回收纯化ｔｈｙＡ基因，并将其克隆入以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒ｐＷ４２５ｅ，再转化Ｘ５１感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒，进行酶切鉴定、ＰＣＲ扩增鉴定，并对ｔｈｙＡ基因片段进行测序，与已知序列进行同源性比较，结果表明成功克隆了ｔｈｙＡ基因，全长约１．１ｋｂ，与国外报道的ｔｈｙＡ基因同源性达９９％。这为构建以ｔｈｙＡ基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体奠定了基础。

关键词：胸苷酸合成酶基因分子克隆序列测定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡贫血病病毒套式PCR检测方法的建立及应用

引用

中国预防兽医学报 2000年第3期22卷 220-223页

作者：宋秀龙陈奖励辛九庆周方红杨雨辉章金刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国人民解放军军需大学动医系传染病室长春130062

鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性... 详细信息

鸡贫血病病毒不仅引起鸡的传染性贫血 ,而且也是引起鸡免疫抑制病的主要病原。本研究首次在国内建立了鸡贫血病病毒的套式PCR检测方法。试验证明此方法具有高度的特异性和敏感性 ,以鸡马立克氏病毒、鸡网状内皮组织增生病毒、鸡传染性法氏囊病毒、正常MDCC_MSB1细胞DNA作为模板扩增时均未出现可见带 ,在检测鸡的各种组织病料时均未出现假阳性结果 ,该法比一次性PCR的敏感性高约 1 0 0 0倍 ,能检测到约一个拷贝的鸡贫血病病毒DNA ,而一次性PCR只能检测到3.6× 1 0 3 个拷贝。此方法已成功地应用于临床试验。对于鸡贫血病毒的许多鸡胚分离物和细胞分离物 ,一次性PCR不能扩增出可见电泳条带 ,而套式PCR都能扩增出特异的DNA片段 ,从而说明 ,套式PCR的敏感性大大高于一次性PCR 。

关键词：鸡套式PCR 贫血病病毒检测方法敏感性特异性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

IBV地方分离株致病原性和血清学分型的比较

引用

上海农业学报 2000年第2期16卷 74-76页

作者：祁贤叶向阳张婉华朱永军徐平曹伟民江国托步志高刘思国上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

将 6株分离自国内不同地方的 IBV流行株分别感染 SPF鸡 ,对气管和肾脏进行系统病理观察 ,发现 6株 IBV在致病原性和组织嗜性上存在显著差异 ,其中 QD可引起严重的呼吸道损伤 ,并伴有相对较轻的肾脏损伤 ,其余 5株对肾脏损伤较为严重而... 详细信息

将 6株分离自国内不同地方的 IBV流行株分别感染 SPF鸡 ,对气管和肾脏进行系统病理观察 ,发现 6株 IBV在致病原性和组织嗜性上存在显著差异 ,其中 QD可引起严重的呼吸道损伤 ,并伴有相对较轻的肾脏损伤 ,其余 5株对肾脏损伤较为严重而对呼吸道损伤相对温和。用气管环组织培养交叉中和实验 (SN)和 SAS软件对 6株分离毒进行血清学分型研究 ,结果显示 QD株属于 M型 ,ZZ、GZ属于 T型 ,而 TJ、DL和 YC株是不同于 M和 T血清型的变异株。研究结果表明 ,不同 IBV毒株的致病原性和血清型有一定的相关性 ,同时也说明我国 IBV流行株已发生变异 ,并存在所谓肾型

关键词：鸡传染性支气管炎病毒致病原性血清型

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

鸡传染性支气管炎病毒地方分离株S1基因克隆和基因型鉴定

引用

上海农业学报 2000年第4期16卷 52-56页

作者：祁贤叶向阳张婉华朱永军步志高刘思国上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 201106 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨 150001

利用IBV全长S1基因特异性引物 ,以纯化的 3个标准株M4 1、H52 、T和 6个地方分离株 (QD、ZZ、GZ、TJ、DL和YC)的基因组RNA为模板 ,用RT PCR方法扩增出预期大小约 1.73kbcDNA片段 ,经BAMHI和HindIII酶切插入到质粒 pUC18中 ,并在大肠杆菌... 详细信息

利用IBV全长S1基因特异性引物 ,以纯化的 3个标准株M4 1、H52 、T和 6个地方分离株 (QD、ZZ、GZ、TJ、DL和YC)的基因组RNA为模板 ,用RT PCR方法扩增出预期大小约 1.73kbcDNA片段 ,经BAMHI和HindIII酶切插入到质粒 pUC18中 ,并在大肠杆菌JM 83中实现了克隆。对 6个分离株的S1基因PCR产物进行HaeIIIRFLP分析 ,表明QD、TJ属于M4 1基因型 ,ZZ和GZ与T基因型一致 ;而DL、YC表现为不同的基因型 ,这一结果与血清中和实验结果基本吻合 ,证实我国IBV流行株已发生基因变异。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 RFLP 基因型鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 177-页

作者：刘明于康震张云孔宪刚徐宜为中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子ｐＵＣＨ５。然后将ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移... 详细信息

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因，将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点，筛选到阳性重组子ｐＵＣＨ５。然后将ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ，筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后，在脂质体转染试剂介导下，ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－ＢｌｕｅＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化，获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验结果表明ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞，血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达，为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：流感病毒血凝素基因杆状病毒表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

编码EIAV核输出因子蛋白Rev的cDNA克隆和序列测定

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 11-页

作者：张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

ＥＩＡＶ在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节，其中Ｒｅｖ蛋白是病毒编码的转录后调节因子，决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Ｒｅｖ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬... 详细信息

ＥＩＡＶ在繁殖过程中涉及到多种转录因子的调节，其中Ｒｅｖ蛋白是病毒编码的转录后调节因子，决定了病毒复制由早期到晚期的过渡。Ｒｅｖ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒繁殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较，确定了编码Ｒｅｖ蛋白的病毒基因组转录产物的编码序列和拼接位点。

关键词： EIAV核输出因子蛋白 cDNA克隆序列测定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

编码EIAV反式激活蛋白Tat的cDNA克隆和序列测定

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 93-页

作者：张宝山孙成群刘相冬刘永刚周家喜王凯波刘建华孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

ＥＩＡＶ在繁殖过程中的转录涉及到多种因子的调节，其中ＴＡＴ蛋白是病毒编码的反式激活因子，是病毒复制必须成分。ＴＡＴ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在... 详细信息

ＥＩＡＶ在繁殖过程中的转录涉及到多种因子的调节，其中ＴＡＴ蛋白是病毒编码的反式激活因子，是病毒复制必须成分。ＴＡＴ是非结构蛋白，由病毒基因组全长转录产物经多次拼接而成。本研究使用ＥＩＡＶ疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物，在病毒增殖早期提取细胞总ＲＮＡ，反转录后使用中国ＥＩＡＶ毒株特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆后经过核苷酸序列分析，和与基因组全序列的比较。确定了编码ＥＩＡＶ反式激活蛋白的转录产物及阅读框架及转录后拼接位点，研究发现至少有两种拼接产物编码ＴＡＴ。

关键词：

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

马传染性贫血病病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 175-页

作者：王柳杨志彪刘红全智海东仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

采用ＰＣＲ方法分三段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（ＥＬＡＶ　ＤＬＡ）的前病毒ＤＮＡ，这三个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组，ＰＣＲ产物经克隆后顺次连接，获得一个含有ＥＬＡＶ全基因（８．０Ｋｂ）的重组... 详细信息

采用ＰＣＲ方法分三段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（ＥＬＡＶ　ＤＬＡ）的前病毒ＤＮＡ，这三个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组，ＰＣＲ产物经克隆后顺次连接，获得一个含有ＥＬＡＶ全基因（８．０Ｋｂ）的重组质粒，将其命名为ｐ８．０。将此８．０ＫｂＥＩＡＶ全基因再亚克隆到含有一完整ＥＩＡＶＤＬＡ株长末端重复序列的质粒中，获得一含有ＥＩＡＶ驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒，将其命名为ｐ８．２，经核苷酸序列分析，证明ｐ８．２含有ＥＩＡＶ前病毒的全基因。用ｐ８．２转染驴白细胞，将其作为种毒进行传代，于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶，说明在驴白细胞中由ｐ８．２衍生出了ＥＩＡ病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后，第４天出现病变，经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子，进一步证明ｐ８．２具有感染性，我们获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆，为进一步在分子水平上阐明我国ＥＩＡＶ疫苗株的减毒机理和免疫保护机制奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克降

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

表达H5N1亚型高致病性禽流感病毒HA基因的DNA疫苗可保护SPF鸡抵抗同型病毒的致死性攻击

引用

中国预防兽医学报 2000年第S1期22卷 173-页

作者：姜永萍姜永萍陈化兰陈化兰于康震于康震张建林张建林步志高唐秀英田国彬中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感研究中心哈尔滨150001

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的... 详细信息

将高致病力禽流感病毒分离株Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（ＨＳＮ１）（ＧＤ／１／９６）的ＨＡ基因ｃＤＮＡ片段克隆于强启动子ＣＭＶ下游，构建了ＤＮＡ疫苗质粒ｐＣＩＨ５，对其免疫保护性进行了三批不同层次的动物保护试验。试验Ｉ分为两部分，第一部分为ｐＣＩＨ５一次免疫组（１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ、１５０μｇ）、油苗组及空白对照组，第二部分为ｐＣＩＨ５两次免疫组（５μｇ、２０μｇ、３５μｇ、５０μｇ）及其对照组，ｐＣＩＨ５以２００μｌ腿肌两点注射，一次免疫组于免疫后３周以１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，两次免疫组首免后３周加强免疫一次，二免后２周以５０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６攻毒，免疫及攻毒前后均采血检测ＨＩ抗体和ＡＧＰ抗体，攻毒后７天采集泻殖腔棉拭子分离病毒。试验Ⅱ分为５０μｇ和１００μｇ（１００μｌ）两次免疫组及对照组，攻毒剂量为１０ＬＤ５０ＣＤ／１／９６。试验Ⅲ为试验Ⅱ的重复试验，但免疫注射体积为２００μｌ。结果，三批试验的所有对照鸡在攻毒后２－８天全部死亡；试验Ⅰ中１０μｇ、４０μｇ、７０μｇ、１００μｇ和１５０μｇｐＣＩＨ５一次免疫，但免疫保护率分别为１２．５％（１／８?

关键词：禽流感病毒血凝索基因 DNA疫苗免疫保护

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：