检索结果-内蒙古大学图书馆

传染性法氏囊病病毒VPP5酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选

中国家禽 2015年第3期37卷 22-26页

作者：王念张礼洲陈玉明卢珍高立高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉李凯王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p G... 详细信息

VP5蛋白是传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种非结构蛋白,在病毒感染、释放、致病性方面起着重要作用。为了研究VP5蛋白与宿主细胞的相互作用,本试验首先将IBDV VP5基因克隆入p GBKT7,构建诱饵载体p GBGt VP5,通过自激活试验证明其没有自激活活性,对酵母细胞没有毒性。然后,运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)c DNA文库中筛选与VP5互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得5个互作宿主细胞蛋白,为进一步深入研究IBDV VP5与宿主互作的效应和机制奠定基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5蛋白酵母双杂交诱饵载体互作蛋白

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一株致病性血清2型猪链球菌的多位点序列分型及其灭活后对小鼠的免疫保护效果评价

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中国预防兽医学报 2015年第1期37卷 57-61页

作者：高明明王淑杰金家民刘永刚陶冶李爱东张璐李莉姜成刚王刚申红蔡雪辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断及技术服务中心黑龙江哈尔滨150001 动物用生物制品国家工程研究中心黑龙江哈尔滨150001

为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(***);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P... 详细信息

为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(***);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型*** WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型***攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防***病的有效灭活疫苗候选株。

关键词：猪链球菌 MLST分型分析灭活疫苗免疫保护

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应用宏基因组学鉴定国内第一株鸭2型腺病毒

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 903-907页

作者：陈峰招丽婵覃健萍周庆丰罗玉子林丽苗操胜李海燕华南农业大学动物科学院广东广州510642 广东温氏食品集团股份有限公司温氏集团研究院(技术中心) 广东云浮527439 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为分离鉴定广东某养鸭场疑似"肝坏死"病例的病原,本研究将采集的病料样品感染番鸭胚及番鸭胚成纤维细胞(MDEF)进行病原分离,提取出现细胞病变培养物的核酸,采用宏基因组学方法,以随机引物反转录并合成双链DNA进行PCR扩增,扩... 详细信息

为分离鉴定广东某养鸭场疑似"肝坏死"病例的病原,本研究将采集的病料样品感染番鸭胚及番鸭胚成纤维细胞(MDEF)进行病原分离,提取出现细胞病变培养物的核酸,采用宏基因组学方法,以随机引物反转录并合成双链DNA进行PCR扩增,扩增产物进行分子克隆和测序分析。结果显示:F6代分离的病毒滴度为log10^(5.0)TCID_(50)/m L,能够导致9日龄~11日龄番鸭胚死亡及MDEF产生明显细胞病变。50个随机克隆经Gen Bank检索有28个为鸭2型腺病毒(DAd V-2)同源序列,核苷酸同源性为92%~99%。28个同源序列形成8个毗连序列群,共计15 107 bp,覆盖DAd V-2基因组全长的34.54%,分离株与Gen Bank中唯一的DAd V-2 GR分离株亲缘关系最近,其部分hexon基因编码的氨基酸同源性为83.3%。参照测定序列设计的引物能够特异性扩增病毒基因。本研究首次应用宏基因组学分离获得国内首株DAd V-2,也是迄今除了法国以外国内首次报道的DAd V-2分离株。

关键词：宏基因组鸭2型腺病毒分离鉴定

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猫杯状病毒的分离鉴定及超变区基因序列分析

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 885-887页

作者：刘春国刘永相刘大飞郭东春田进仇铮刘鑫蒋艳妹刘家森彭永刚李岩刘明曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省青冈县畜牧兽医局黑龙江绥化151600

为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCV HRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析... 详细信息

为了解猫杯状病毒(FCV)的生物学特性,本研究对猫体内分离到的一株FCV HRB-SS株进行了病毒学、分子生物学鉴定和遗传学分析。结果显示该分离株能够在猫肾细胞系(CRFK)中产生明显的细胞病变,形成蚀斑。FCV的VP1基因超变区核苷酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与疫苗株CVXPOLYCAP同源性最高,为78.2%,而与中国分离株CH-JL和GD的同源性最低,仅为67.9%和68.8%;推导氨基酸序列分析结果显示,HRB-SS分离株与12Q087-5、UTCVM-NH12和FCLF4的同源性最高,为86.7%,而与中国分离株的同源性仅为73.9%。系统发育树分析结果显示,HRB-SS分离株与中国分离株亲缘关系较远。本研究结果表明,FCV HRB-SS与我国FCV具有不同的遗传起源。

关键词：猫杯状病毒分离鉴定超变区序列分析

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鸡痘病毒复制非必需位点的筛选及鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 422-425页

作者：张雪梅赵妍张晓彩王云峰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物科学与技术学院黑龙江哈尔滨150030 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150001

为筛选新的高效的鸡痘病毒(FPV)中外源基因的插入位点,本研究选择FPV ORF161与ORF162之间的基因间隔区作为重组位点,构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转移载体,以表达鸡传染性喉气管炎病毒g B基因的重组FPV(r FPV-g B)为亲本病毒,通... 详细信息

为筛选新的高效的鸡痘病毒(FPV)中外源基因的插入位点,本研究选择FPV ORF161与ORF162之间的基因间隔区作为重组位点,构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转移载体,以表达鸡传染性喉气管炎病毒g B基因的重组FPV(r FPV-g B)为亲本病毒,通过在鸡胚成纤维细胞(CEF)中同源重组,并经过蚀斑纯化筛选获得能够稳定表达gfp报告基因的重组病毒,命名为r FPV-g B161gfp。将r FPV-g B161gfp与亲本病毒连续传代20代,每5代进行荧光显微镜观察、PCR检测及复制动力学比较,结果表明重组病毒遗传稳定性良好,而且重组病毒与亲本病毒生长特性一致。本研究鉴定的新外源基因插入位点为构建多价重组FPV疫苗奠定了基础。

关键词：重组鸡痘病毒插入位点增强型绿色荧光蛋白

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A群轮状病毒NSP5蛋白在细胞器中定位特性

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 143-145页

作者：谷凤丽石达时洪艳陈建飞张鑫袁婧徐天董慧冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110866

为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5... 详细信息

为研究A组猪轮状病毒(Po RV)非结构蛋白NSP5在MA-104细胞中的定位情况,本研究将NSP5蛋白基因克隆于表达载体p EGFP-C2中构建重组质粒p EGFP-NSP5,将其转染于MA-104细胞中进行NSP5瞬时表达,并于转染48 h后利用激光共聚焦显微镜分析NSP5表达蛋白在细胞中的定位情况。结果表明,表达蛋白在MA-104细胞中的线粒体、内质网、高尔基体中均有分布,主要定位于细胞质。本研究为进一步分析病毒的复制和致病机理提供依据。

关键词： A组猪轮状病毒 NSP5蛋白 MA-104细胞共定位

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Gln对鸭瘟感染鸭十二指肠免疫调节相关基因表达量的影响

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实验动物科学 2015年第3期32卷 10-12,43页

作者：张圆圆赵丽丽王蕾牛银杰韩凌霞刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队哈尔滨150001

目的为谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在正常鸭及鸭瘟(Duck plague,DP)模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)7日龄雏鸭随机分为8组,四组梯度剂量每天灌喂Gln(0、0.5、1、2 g/kg饲料... 详细信息

目的为谷氨酰胺(Glutamine,Gln)在正常鸭及鸭瘟(Duck plague,DP)模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)7日龄雏鸭随机分为8组,四组梯度剂量每天灌喂Gln(0、0.5、1、2 g/kg饲料)6d,及另四组灌喂同等梯度剂量Gln 6 d,于第一天灌喂30 min后攻0.2 m L2000TCID50鸭瘟病毒,观察Gln对正常雏鸭的免疫促进作用及攻毒鸭免疫应激的缓解作用。测定Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路基因表达量。结果 Gln显著提高正常组TLR4通路mRNA表达量(P<0.05),显著降低攻毒组表达量(P<0.05)。结论 Gln通过TLR4通路提高正常雏鸭肠道的免疫力,降低鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)造成的肠道免疫损伤。

关键词：谷氨酰胺鸭鸭瘟十二指肠 TLR4通路

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地塞米松对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪的影响

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中国预防兽医学报 2015年第8期37卷 590-594页

作者：佟杰王刚于颖张冲常亚飞刘永刚涂亚斌汤艳东姜成刚王淑杰蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 西北农林科技大学动物医学学院陕西杨凌712100 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为研究地塞米松（DEx）对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PRRSV）感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响，本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后，肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状，检测其免疫系统相关指标的变化... 详细信息

为研究地塞米松（DEx）对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PRRSV）感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响，本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后，肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状，检测其免疫系统相关指标的变化。结果显示：不同剂量DEX注射组实验猪均表现典型临床症状，虽然其外周血中的促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及TNF—d水平降低，CD4＋CD8‘T淋巴细胞亚群比例较HuN4单独感染组升高，CD8＋CD4-T细胞比例较HuN4单独感染组降低，但DEX注射组仔猪体温始终维持在40℃-42℃，肺部、胸腺和淋巴组织病变加重，死亡率达到100％（10／10），而HuN4单独感染组仔猪死亡率仅为25％（1／4）。表明DEX对HP—PRRSV感染的断奶仔猪虽具有一定的抑制炎症反应作用，但加重了HP-PRRSV感染的不利影响。本研究为全面防控HP—PRRSV提供新的实验依据。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸系统综合征病毒地塞米松促炎性细胞因子

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猪轮状病毒(G9型)TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 846-849页

作者：王宇飞时洪艳朱向东陈建飞袁婧张鑫石达刘建波王潇博高晶冯力东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(Po RV)Taq Man的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的G9型Po RV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针。以104TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,... 详细信息

为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(Po RV)Taq Man的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的G9型Po RV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针。以104TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了检测G9型Po RV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法的相关系数R2=0.991,对其它常见的Po RV(G5)、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法最低可以检测到的病毒滴度为10-3TCID50,比普通RT-PCR方法灵敏度高约1 000倍;组内和组间变异系数均小于0.87%,稳定性高,重复性好。对疑似感染Po RV的45份临床病料样品进行检测,结果表明,该方法阳性率(64.4%)高于普通RT-PCR(44.4%),两者总符合率为80%。本研究建立的方法为Po RV的流行病学调查和早期诊断奠定基础。

关键词：轮状病毒 G9基因型 VP7基因 TaqMan荧光定量RT—PCR

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B19单倍型鸡BNK蛋白单克隆抗体的制备

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实验动物科学 2015年第3期32卷 1-5页

作者：吴少莲彭蔚宇王兴童文辉强廉传江陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)... 详细信息

目的体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞(Natural killer,NK)BNK蛋白的细胞系,制备BNK蛋白的单克隆抗体,为鸡BNK蛋白及NK细胞的研究提供便利。方法利用BNK19原核表达产物免疫BALB/c小鼠,体外稳定表达疫病敏感性B19单倍型鸡BNK蛋白(BNK19)的真核细胞系筛选单克隆抗体。结果用稳定表达BNK蛋白的真核细胞系筛选到2株BNK19特异性单克隆抗体。结论获得的单克隆抗体经鉴定具有免疫学活性,为鸡BNK蛋白及NK细胞的作用机制研究提供了条件。

关键词： B19单倍型鸡 BNK 单克隆抗体

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