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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 957-961页

作者：蔡文博吴少莲彭蔚宇王丽廷陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001 常州市金坛区动物疫病预防控制中心江苏常州213200 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(... 详细信息

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(dq RT-PCR)方法对接种后4 h、24 h、48 h和96 h肺淋巴细胞、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中MDV meq、IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的m RNA含量进行检测。结果显示,接种后96 h仅在两品系感染鸡的肺淋巴细胞和脾脏中检测到了meq m RNA,G2系鸡群肺淋巴细胞中病毒m RNA含量高于G5系,但脾脏中较低。96 h肺淋巴细胞和脾脏中IFN-γ、IL-4和IL-10转录水平大幅上调,并且G2系鸡群均略高于G5。本研究结果提示G2系对MDV的抵抗能力强于G5,这两种品系鸡感染MDV后可能主要启动以Th2型为主的细胞免疫反应,为研究MDV对不同MHC单倍型鸡的致病性提供了实验依据。

关键词：马立克氏病毒 IFN-γ IL-18 IL-4 IL-10

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牛支原体及其脂质相关膜蛋白诱导胎牛肺细胞IL-1β表达的分子机制研究

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 444-447页

作者：刘素丽汪洋李媛周玉梅高利萍邵佳日王琪陈莹辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物支原体病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为研究牛支原体(***)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以***及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组... 详细信息

为研究牛支原体(***)及其脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞IL-1β表达的分子机制,本研究首先以***及其LAMPs刺激EBL细胞,利用荧光定量PCR检测细胞因子IL-1β的动态变化;然后将融合表达的细胞p65(Rel A)蛋白和绿色荧光蛋白重组质粒p EGFP-p65转染EBL细胞,以LAMPs刺激EBL细胞,通过激光共聚焦观察p65的亚细胞分布。荧光定量PCR结果显示,***及其LAMPs能够诱导EBL细胞IL-1β的表达;而且LAMPs作用的最佳剂量为2μg/m L,最佳时间为12 h。同时,激光共聚焦试验检测到LAMPs能够诱导p65进入EBL细胞核中。上述实验结果表明LAMPs能够诱导EBL细胞中p65进入细胞核内,从而激活NF-κB信号通路,诱导IL-1β上调表达。

关键词：牛支原体脂质相关膜蛋白胎牛肺细胞 NF-κB信号通路 IL-1β IL-1β

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马源Slfn11蛋白抑制EIAV的产生

马源Slfn11蛋白抑制EIAV的产生

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：林跃智孙留克朱丹彤胡哲任慧玲王雪峰杜承王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

病毒感染后诱发Ⅰ型干扰素产生并激活IRF3/IRF7途径产生大量的ISGs,ISGs在多种病毒感染中发挥潜在的抗病毒活性,是机体天然免疫的重要部分。这些ISG存在于细胞的不同部位。包括细胞质、细胞核和细胞膜。亦可包装进病毒粒子中,在病毒复... 详细信息

病毒感染后诱发Ⅰ型干扰素产生并激活IRF3/IRF7途径产生大量的ISGs,ISGs在多种病毒感染中发挥潜在的抗病毒活性,是机体天然免疫的重要部分。这些ISG存在于细胞的不同部位。包括细胞质、细胞核和细胞膜。亦可包装进病毒粒子中,在病毒复制的不同阶段发挥抗病毒作用。

关键词： Slfn11 干扰素诱导因子马传染性贫血病毒(EIAV)

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马源Sifn11蛋白抑制EIAV的产生

马源Sifn11蛋白抑制EIAV的产生

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：林跃智孙留克朱丹彤胡哲任慧玲王雪峰杜承王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

病毒感染后诱发Ⅰ型干扰素产生并激活IRF3/IRF7途径产生大量的ISGs,ISGs在多种病毒感染中发挥潜在的抗病毒活性,是机体天然免疫的重要部分.这些ISG存在于细胞的不同部位.包括细胞质、细胞核和细胞膜.亦可包装进病毒粒子中,在病毒复制的... 详细信息

病毒感染后诱发Ⅰ型干扰素产生并激活IRF3/IRF7途径产生大量的ISGs,ISGs在多种病毒感染中发挥潜在的抗病毒活性,是机体天然免疫的重要部分.这些ISG存在于细胞的不同部位.包括细胞质、细胞核和细胞膜.亦可包装进病毒粒子中,在病毒复制的不同阶段发挥抗病毒作用.Slfn11是最新报道的以密码子依赖方式对HIV-1具有抑制作用的一类限制因子.也是唯一与HIV-1感染者体内病毒载体呈负相关的免疫限制因子.

关键词： Slfn11 干扰素诱导因子马传染性贫血病毒(EIAV)

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禽网状内皮组织增生病流行现状及防控

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中国家禽 2015年第1期37卷 1-4页

作者：邓小芸祁小乐李凯胡峰高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江职业学院黑龙江哈尔滨150111 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生... 详细信息

禽网状内皮组织增生病(RE)是危害养禽业的一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病。近年来,禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染范围不断扩大,已证明野鸟也能够携带该病毒。免疫抑制、混合感染、基因整合使得该病的防控形势日趋严峻。目前,生物制品的污染已经不是该病传播的主要原因,REV已经从早期的种源性病毒演变成了在自然界广泛存在的病原。通过疫苗免疫将该病控制到尽可能低的水平,进而进行REV的种群净化,是防控该病的科学策略。

关键词：禽网状内皮组织增生病流行免疫抑制混合感染亚单位疫苗

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马传染性贫血病毒弱毒疫苗基因组进化研究

马传染性贫血病毒弱毒疫苗基因组进化研究

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：王雪峰林跃智刘强杜承周建华王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗是通过经典弱毒疫苗致弱方式研制成功的首例慢病毒弱毒疫苗。为深入研究EIAV弱毒疫苗致弱机制，从基因水平确定影响病毒毒力和免疫原性的因素，本研究对EIAV疫苗株和亲本强毒株以及疫苗致弱过程中第3个... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗是通过经典弱毒疫苗致弱方式研制成功的首例慢病毒弱毒疫苗。为深入研究EIAV弱毒疫苗致弱机制，从基因水平确定影响病毒毒力和免疫原性的因素，本研究对EIAV疫苗株和亲本强毒株以及疫苗致弱过程中第3个中间代次(32代、62代和92代)病毒株的前病毒基因组进行测序分析。

关键词：慢病毒马传染性贫血弱毒疫苗基因进化

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浅析鸡马立克氏病毒毒力进化与疫苗防控

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中国畜禽种业 2015年第5期11卷 142-144页

作者：刘永振李凯刘长军高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队 150001

鸡马立克氏病是由鸡马立克氏病病毒引起鸡的一种高度传染性、以淋巴细胞增生为特征的肿瘤病。由于MDV疫苗的广泛使用,该病已基本得到控制;但近些年来,MD的危害有进一步加重的趋势,免疫失败时有发生。MDV毒株毒力的不断增强可能是近年来M... 详细信息

鸡马立克氏病是由鸡马立克氏病病毒引起鸡的一种高度传染性、以淋巴细胞增生为特征的肿瘤病。由于MDV疫苗的广泛使用,该病已基本得到控制;但近些年来,MD的危害有进一步加重的趋势,免疫失败时有发生。MDV毒株毒力的不断增强可能是近年来MD危害加重的主要原因之一。根据MDV毒力进化趋势分析,MDV毒株毒力大约每十几年发生一次毒力跃迁,与之对应的疫苗研究也几乎得到同步发展。本文对MDV毒力进化、疫苗防控以及我们将来可选择的其他防控措施等方面进行了简要分析和概述。

关键词：毒力疫苗免疫效果马立克氏病病毒鸡马立克氏病高度传染性肿瘤病疫苗研究免疫失败病已二次免疫

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1型鸭肝炎病毒强毒株在雏鸭体内分布情况研究

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实验动物科学 2015年第3期32卷 13-15页

作者：赵丽丽刘海燕牛银杰祝明皓刘胜旺陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150001

目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的... 详细信息

目的利用建立的Taq荧光定量RT-PCR检测方法研究鸭肝炎病毒(DHV-1)强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染3日龄雏鸭,利用已建立的Taq荧光定量RT-PCR方法,对接种24 h内DHV-1强毒株感染雏鸭的组织脏器进行了定量检测。结果接种后4 h即可在雏鸭心、肝、脑、肺、胰腺、回肠、盲肠、直肠、法氏囊和脾脏组织中检测到一定水平的病毒RNA,随着病程发展,RNA拷贝数持续升高,接种24 h后,肝脏中的病毒RNA拷贝数为最高,达到108.81copies/g,心、肺、肾、脾次之,约107copies/g。结论DHV-1强毒在雏鸭的早期感染雏鸭的实质器官、免疫器官和消化系统等均具有广泛的嗜性。

关键词：鸭肝炎病毒实时荧光定量PCR 雏鸭动态分布

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两株PCV2a-Cap蛋白和两株PCV2b-Cap蛋白免疫保护作用的比较性研究

两株PCV2a-Cap蛋白和两株PCV2b-Cap蛋白免疫保护作用的比较性研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄立平危艳武王一平刘丹陈冬杰孙建慧杜文娟夏得利吴洪丽刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。PCV2 Cap蛋白是主要免疫原性蛋白,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。PCV2分为多种基因型:包括PCV2a、PCV2b和PCV2c等,其中PCV2b为当前主要流行毒株,然而... 详细信息

引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。PCV2 Cap蛋白是主要免疫原性蛋白,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。PCV2分为多种基因型:包括PCV2a、PCV2b和PCV2c等,其中PCV2b为当前主要流行毒株,然而国际上现有的PCV2疫苗以PCV2a居多,虽然PCV2各基因型之间可以提供交叉保护,但是PCV2基因型之间是否存在免疫原性差异的研究鲜有报道。本研究分别选取两株PCV2a和两株PCV2b毒株,通过免疫攻毒实验综合评价这些蛋白的免疫保护作用。方法采用杆状病毒表达分别系统表达PCV2a/LG-Cap、PCV2a/CL-Cap、PCV2b/JF-Cap和PCV2b/YJ-Cap蛋白,制备四种PCV2亚单位疫苗,并经猪体免疫攻毒实验评价其免疫保护作用,同设商品化PCV2亚单位疫苗和PCV2灭活疫苗对照组、攻毒对照组及健康对照组。采用IPMA方法测定试验猪PCV2特异性抗体;通过常规PCR和定量PCR检测PCV2病毒血症和腹股沟淋巴结中的病毒载量,并采用免疫荧光和HE染色方法检测腹股沟淋巴结中PCV2抗原和微观病理变化。结果成功表达了PCV2a/LG-Cap、PCV2a/CL-Cap、PCV2b/JF-Cap和PCV2b/YJ-Cap蛋白并制备了4种PCV2-Cap亚单位疫苗:PCV2a/LG-Cap疫苗、PCV2a/CL-Cap疫苗、PCV2b/JF-Cap疫苗和PCV2b/YJ-Cap疫苗,同时经猪体试验证实:四种亚单位疫苗均可以诱导猪体产生PCV2特异性抗体,但是PCV2a/LG-Cap疫苗和PCV2a/CL-Cap疫苗免疫猪在二免后两周(攻毒时)PCV2抗体效价均大于1000倍,明显高于PCV2b/JF-Cap疫苗(533倍)和PCV2b/YJ-Cap疫苗免疫组(266倍);攻毒后两组商品化疫苗对照组未检测到病毒血症,PCV2a/LG-Cap疫苗和PCV2a/CL-Cap疫苗免疫组病毒血症检出率明显低于PCV2b/JF-Cap疫苗和PCV2b/YJ-Cap疫苗组,分别为0%、20%、40%和60%;两组PCV2b-Cap蛋白亚单位疫苗免疫组腹股沟淋巴结中PCV2载量明显高于两组PCV2a-Cap蛋白疫苗组和商品化疫苗组,并显著低于攻毒对照组;相同组织的免疫荧光结果显示,PCV2抗原在攻毒对照组中最多,其次是PCV2b/YJ和JF疫苗组,而在两种PCV2a疫苗组和商品化疫苗对照组中未检测到PCV2抗原;腹股沟淋巴结的微观病理学变化显示,攻毒对照组中淋巴细胞严重减少,同时出现多核巨细胞;两种PCV2b疫苗免疫组淋巴细胞有坏死和缺失,而在其他疫苗免疫组未出现这种病理变化。结论本实验所选取的两株PCV2a-Cap蛋白的免疫保护作用优于两种PCV2b-Cap蛋白,由此可以推测临床中流行的PCV2b毒株的免疫原性也许比PCV2a毒株的免疫原性差,而病毒的免疫原性差可能与病毒的致病性紧密相关,正由于一些PCV2b毒株免疫原性差、致病性强,所以导致PCV2b毒株在猪群中循环存在,高于PCV2a检出率。

关键词： PCV2b-Cap 攻毒实验免疫原性疫苗免疫病毒血症免疫保护作用比较性研究

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猪鼻支原体不同分离菌株对仔猪致病性试验

猪鼻支原体不同分离菌株对仔猪致病性试验

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：危艳武陈冬杰黄立平王一平刘丹孙建慧冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、关节炎、肺炎的重要病原,在机体免疫力降低的情况下该病的发生率就显著上升,在临床实践中,Mhr还经常与其他病原微生物混合感染,造成猪群极为严重的临床病理和解剖病理,... 详细信息

引言猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)是引起猪多发性浆膜炎、关节炎、肺炎的重要病原,在机体免疫力降低的情况下该病的发生率就显著上升,在临床实践中,Mhr还经常与其他病原微生物混合感染,造成猪群极为严重的临床病理和解剖病理,导致保育阶段仔猪死亡率显著升高,也可通过污染的饲料或饮水经消化道侵入机体,随血液到达相应的靶器官而致病。至今为止,尚无有效的药物防控该病。方法选用25日龄Mhr抗体和抗原均为阴性试验猪,由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心培育和提供,取Mhr-DL菌株和Mhr-SP菌株第5代培养物(2.1×1010CCU/mL)1mL,经气管和腹腔同时感染试验猪10头,同设未感染对照组5头。人工感染试验猪隔离饲养,逐日进行临床观察和体温测定。按表1制定标准评分,试验猪于感染后第28 d迫杀,采取心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结和小肠等组织做病理学观察和病毒分布测定。结果 Mhr-DL菌株感染组临床症状表现为精神沉郁、食欲不振、体温高达41.8℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏的多发性浆膜炎、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾肉样病变。Mhr-SP菌株感染组仅表现为一过性的体温升高,剖检病理仅表现为肺脏的虾肉样变。免疫组化法检测发现,Mhr感染后肺脏、扁桃体、肾脏、肝脏的检出率为最高。Mhr感染组的组织病理均存在间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生。抗体检测发现,感染后第5d这两个菌株抗体均阳转。细胞因子检测发现,感染组尤以TNF-α变化最为显著。-临床猪群中Mhr感染比较普遍,常与其他病原混合感染,显著提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床Mhr的综合防制提供科学依据。结论综上所述,Mhr通过气管和腹腔同时感染能够引起试验猪显著的临床病理和解剖病理,为Mhr人工感染模型的建立提供了良好的思路。另外,由于其引起试验猪的临床症状与猪副嗜血杆菌感染引起的临床症状极为相似。在临床诊断中Mhr引起的解剖病理极易与猪副嗜血杆菌引起的解剖病理相混淆,这也充分证明,我国Mhr流行菌株对猪群的危害虽未引起重视,但其对我国猪群的危害却是不可低估,并且随着我国猪群的集约化、规模化饲养,多病原混合感染日趋严重,Mhr在混合感染中对猪群危害有待于进一步澄清,加以科学评估,为今后开展Mhr防控技术和科学研究奠定理论基础。

关键词：猪鼻支原体猪副嗜血杆菌混合感染分离菌株

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