检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：王一平刘丹郭龙军危艳武吴洪丽刘建波李胜斌黄立平刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失。PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2... 详细信息

引言猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原,该病原现已在世界各地广泛流行,给养猪业造成巨大经济损失。PCV2 Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,能诱导产生PCV2特异性中和抗体和保护性免疫力,是研制PCV2基因工程疫苗的理想靶抗原。研究表明,IFN-γ、IL-2和GM-CSF等细胞因子佐剂对疫苗具有免疫增强作用,可显著增强疫苗的免疫保护效力。本研究采用细胞因子佐剂与PCV2-Cap蛋白组合的策略来研制预防PCV2感染的新型基因工程亚单位疫苗,目的是验证猪源IFN-γ(PoIFN-γ)、IL-2(PoIL-2)和GM-CSF(PoGM-CSF)这3种细胞因子能否增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫效力。方法采用杆状病毒表达系统表达PCV2-Cap蛋白、PoIFN-γPoIL-2、PoGM-CSF及这3种细胞因子与PCV2-Cap蛋白的融合蛋白Cap-PoIFN-γ、Cap-PoIL-2和Cap-PoGM-CSF,制备几种不同形式的PCV2亚单位疫苗,并经鼠体模型鉴定其免疫原性;采用IPMA和阻断ELISA方法测定免疫及攻毒后PCV2特异性抗体滴度,通过监测淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌水平评价细胞免疫应答;采用常规PCR检测PCV2病毒血症,并经定量PCR检测攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒载量。结果采用杆状病毒表达系统成功地表达了PCV2-Cap蛋白、PoIFN--γ及Cap-PoIFN-γ融合蛋白,制备了3种PCV2亚单位疫苗:Cap-poIFN-γ疫苗、PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+PoIFN-γ疫苗能诱导产生更高水平的PCV2特异性IPMA抗体和中和抗体滴度,明显提高T淋巴细胞的增殖能力,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。以杆状病毒表达系统成功地表达了PoIL-2、PoGM-CSF、Cap-PoIL-2融合蛋白及Cap-PoGM-CSF融合蛋白,制备了5种PCV2亚单位疫苗:Cap-PoIL-2疫苗、PCV2-Cap+PoIL-2疫苗、Cap-PoGM-CSF疫苗、PCV2-Cap+PoGM-CSF疫苗及PCV2-Cap疫苗,并经鼠体试验证实,PCV2-Cap+PoIL-2疫苗、Cap-PoGM-CSF疫苗和PCV2-Cap+PoGM-CSF疫苗均可明显提高T淋巴细胞的增殖能力,刺激淋巴细胞分泌更高水平的IFN-γ和IL-2,并显著降低攻毒后鼠肺脏中PCV2病毒核酸载量。结论研究表明,用PoIFN-γ与PCV2-Cap蛋白混合免疫时,PoIFN-γ能显著增强PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的免疫保护效力,但以Cap-PoIFN-γ融合蛋白免疫时,PoIFN-γ对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用;用PoIL-2或PoGM-CSF与PCV2-Cap蛋白混合免疫或以Cap-PoGM-CSF融合蛋白免疫时,PoIL-2和PoGM-CSF对PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗的抗体应答均无增强作用,但可促进免疫应答向Th1型免疫应答转变,从而增强疫苗的免疫保护效力,然而以Cap-PoIL-2融合蛋白免疫时,PoIL-2对PCV2-Cap蛋白无免疫增强作用。

关键词： CSF 亚单位疫苗 PCV2)Cap 猪圆环病毒免疫增强作用 IFN GM-CSF

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伪狂犬病病毒(PRV)UL42蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定

伪狂犬病病毒(PRV)UL42蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：杜文娟王一平黄立平危艳武陈冬杰孙建慧吴洪丽冯力刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

引言伪狂犬病病毒（PRV）是引起伪狂犬病的主要病原。伪狂犬病广泛存在于世界范围内的猪场中,给养猪业造成巨大的经济损失,不同年龄段的感染猪临床症状不同。PRV UL42蛋白,又被称为DNA的辅助性亚基,由PRV的UL42基因编码,在RRV的复制过... 详细信息

引言伪狂犬病病毒（PRV）是引起伪狂犬病的主要病原。伪狂犬病广泛存在于世界范围内的猪场中,给养猪业造成巨大的经济损失,不同年龄段的感染猪临床症状不同。PRV UL42蛋白,又被称为DNA的辅助性亚基,由PRV的UL42基因编码,在RRV的复制过程中发挥重要的作用。关于UL42蛋白的体外作用,在1995年已经有所报道。而到目前为止,关于PRV UL42蛋白的B细胞的抗原表位仍未见有报道。在本研究中,我们制备了6株针对PRV UL42蛋白的单抗,利用这些单抗,希望能对UL42蛋白在PRV复制过程中的亚细胞定位进行描述并能从感染PRV的PK-15细胞中将UL42蛋白沉淀出来以方便研究与UL42相互作用的蛋白。从而达到利于UL42功能研究的目的。方法利用原核表达系统表达了UL42蛋白,将其免疫6周龄的BALB/c小鼠,经过细胞融合和亚克隆,成功的筛选到6株能够稳定分泌UL42抗体的杂交瘤细胞。利用这些单抗,通过Western Blotting和间接ELISA方法,鉴定出了三个不同的抗原表位。利用DNA star软件对所鉴定的三个不同的抗原表位的保守性和特异性进行分析。通过间接免疫荧光方法对UL42蛋白的亚细胞定位进行描述,利用免疫共沉淀将UL42蛋白从感染PRV的PK-15细胞中沉淀出来,利用IPMA建立了一种新的测定PRV梯度的方法。结果 SDS-PAGE和Western Blotting结果表明UL42蛋白获得了正确表达。将切胶纯化的蛋白免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,成功筛选到6株UL42的单抗。通过Western Blotting和间接ELISA方法,鉴定出了UL42蛋白的三个不同的线性抗原表位,其中SGGVLDALK位于UL42的N端,KRPAAPR和RMYTPIAAK位于UL42的C端。序列比对发现,三个抗原表位在不同的PRV毒株间具有很高的保守性,而在疱疹病毒属的其它成员所对应的部分中有较高的特异性。间接免疫荧光表明UL42蛋白在PRV的复制中定位于细胞核中。免疫共沉淀表明这些单抗能够将UL42从感染PRV的PK-15细胞中沉淀出来。所建立的检测PRV梯度的IPMA方法比传统的只观察细胞病变的方法有更高的敏感性且更容易观察。结论所鉴定的三个不同的抗原表位中,其中一个位于UL42蛋白的N端,另两个位于UL42蛋白的C端,这种现象和同属于疱疹病毒属的人的单纯疱疹病毒1型的UL42蛋白的抗原表位相似。而序列比对发现这些抗原表位在不同的PRV毒株间保守性很高,这将有利于建立以抗原表位为基础的PRV的诊断方法。这些单抗能够被应用于UL42蛋白功能的研究中,比如对UL42蛋白的核定位,发现UL42定位于细胞核中,这从侧面反映了UL42蛋白作为DNA聚合酶的辅助因子的作用。此外我们还可以利用这些单抗将UL42蛋白从感染了PRV的细胞中沉淀出来,这对于研究与UL42蛋白相互作用的蛋白打下了基础。所建立的用于测定PRV病毒梯度的IPMA方法比传统的只看细胞病变的方法具有更高的敏感性和较易观察。这些单抗在PRV UL42蛋白的功能研究中将会是非常有用的工具。

关键词： PRV)UL42 保守性抗原表位伪狂犬病病毒单克隆抗体制备

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禽流感病毒通用型RT-LAMP快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 383-386页

作者：石霖王秀荣孙阮洋李雁冰程荣华于学武曹东薛树山赵培徐晓龙马勇郑世民东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110164 吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062

为建立一种禽流感病毒（AIV）的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术（LAMP）原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检... 详细信息

为建立一种禽流感病毒（AIV）的快速检测方法,本研究根据环介导等温扩增技术（LAMP）原理,设计了针对AIV M基因4个不同区段的特异性引物,并对反应条件和反应体系进行优化,建立了AIV的RT-LAMP方法。结果表明,该方法对AIV H1~H16亚型的检测结果均为阳性,而对其他禽类病毒的扩增均为阴性,具有良好的特异性。对AIV的最低检测限为13.43 EID50/m L,灵敏度为普通一步RT-PCR的10倍;扩增反应可以在恒温水浴内60 min内完成;在反应体系中添加荧光染料后,肉眼即可判定检测结果。该检测方法与RT-PCR方法和荧光定量RT-PCR方法对临床样品检测的符合率均为81.8%。该方法能够简便、快速、灵敏、特异地检测AIV。

关键词：禽流感 RT-LAMP 诊断方法

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二株鸭源H11N9亚型禽流感病毒的遗传进化及致病性分析

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动物医学进展 2015年第2期36卷 30-33页

作者：谭丹黄建龙王昌建何世成王卫国唐小明朱春霞范仲鑫汪洪冰刘道新邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市动物疫病预防控制中心湖南长沙410006 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410129

为了解从湖南省洞庭湖区鸭群中分离的2株H11N9亚型禽流感病毒变异特点、进化规律及生物学特性,本研究对2株H11N9亚型禽流感病毒的HA、NA序列进行同源性和遗传进化分析,并用2株毒株对SPF鸡进行致病性试验。结果显示,本试验分离到2株H11N... 详细信息

为了解从湖南省洞庭湖区鸭群中分离的2株H11N9亚型禽流感病毒变异特点、进化规律及生物学特性,本研究对2株H11N9亚型禽流感病毒的HA、NA序列进行同源性和遗传进化分析,并用2株毒株对SPF鸡进行致病性试验。结果显示,本试验分离到2株H11N9亚型禽流感毒株的HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性毒株;HA基因的受体结合位点均非常保守,具有典型的禽源性特征;NA基因序列与在周边国家野鸟中分离的H11N9亚型毒株的氨基酸同源性较高;鼻腔接种SPF鸡后,均能使鸡感染并通过喉头或泄殖腔排毒,但感染的鸡均不表现明显的临床症状,并且不能使同居鸡感染排毒。

关键词： H11N9亚型禽流感遗传进化致病性

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猪细小病毒基因组特性的研究

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猪业科学 2015年第4期32卷 100-101页

作者：王正阳罗亚坤吕世明崔尚金贵州大学动物科技学院药理实验室贵州贵阳550025 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪细小病毒（PPV）属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年，Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本... 详细信息

猪细小病毒（PPV）属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年，Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本病，并从猪的流产胎儿中分离到PPV。目前，此病在世界范围内广泛流行，是造成母猪繁殖障碍的主要病因之一。

关键词：猪细小病毒病基因组特性母猪繁殖障碍流产胎儿世界范围 PPV 传染病病原学

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猪传染性胃肠炎病毒NSP8蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的初步鉴定

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中国畜牧兽医 2015年第2期42卷 358-364页

作者：董慧张鑫陈建飞时洪艳石达常铁城谷凤丽徐天王智琴刘明春冯力沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 首都医科大学基础医学院北京100069

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经... 详细信息

为鉴定猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)NSP8蛋白的抗原表位,本研究对GST-NSP8重组蛋白进行了原核表达,并用纯化后的重组蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏,采用常规杂交瘤细胞融合方法,经3次亚克隆后制备了1株稳定分泌抗NSP8蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。分泌的单克隆抗体亚类鉴定其重链为IgG1型,轻链为κ链;杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶3 200。Western blotting试验结果表明该单克隆抗体能识别原核及真核表达的NSP8重组蛋白。利用截短表达的方法对NSP8蛋白进行抗原表位的鉴定,初步确定了单克隆抗体针对的抗原表位序列为31SPQILKQLTKAFNIAKSDFEREASV55。本研究制备的单克隆抗体及对抗原表位的鉴定,为TGEV NSP8蛋白相关功能的研究奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 NSP8基因单克隆抗体抗原表位

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北里乳杆菌97-1产细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的研究

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 934-937页

作者：张旺刘琳琳王云峰王宏磊祁小乐高玉龙王永强高宏雷李凯刘长军张艳萍卢彤岩何高明王笑梅崔红玉石河子大学动物科技学院新疆石河子832002 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司黑龙江哈尔滨150028 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070

为鉴定北里乳杆菌97-1(*** 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数... 详细信息

为鉴定北里乳杆菌97-1(*** 97-1)所产细菌素的抑菌活性及生物特性,本研究利用菌体吸附法在北里乳杆菌97-1厌氧静置培养后的上清中初步提取细菌素97-1,其抗菌活性在培养稳定期后达到最高值6 400(AU/m L),经试验显示该细菌素能够被大多数蛋白酶降解,但耐受过氧化氢酶的处理;进一步研究表明其细菌素对单核细胞增生李斯特菌的生长具有明显抑制作用,同时可以抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,具有广谱抗菌活性;温度和酸碱耐受试验表明该细菌素对高温、强酸和强碱具有高度耐受性。本研究对细菌素97-1的抑菌活性及生物特性的鉴定,为微生态制剂的研制和开发提供了良好的候选资源。

关键词：细菌素抑菌活性北里乳杆菌

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禽网状内皮组织增殖病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立

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黑龙江农业科学 2015年第4期 47-52页

作者：牛秀杰赵妍薛美王云峰东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了探究禽网状内皮组织增殖病的快速检测方法,根据禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立检测插入感染与全病毒感染的SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR)。以pMD-LTR,pMD-gag... 详细信息

为了探究禽网状内皮组织增殖病的快速检测方法,根据禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)LTR和gag基因的保守区域各设计并合成一对引物,建立检测插入感染与全病毒感染的SYBR Green I模式的实时荧光PCR方法(Real-time PCR)。以pMD-LTR,pMD-gag重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明:该方法线性关系良好;敏感性能检测到10拷贝标准品;能特异性检测REV样品,不与其它禽相关病原发生交叉反应;板内、板间重复试验的变异系数均低于3%。应用该方法对人工感染REV的鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、腺胃和法氏囊进行初步检测,结果显示法式囊中的含量最高。

关键词： SYBR GreenⅠ 实时荧光PCR 禽网状内皮增殖病毒 gag基因 LTR基因

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天然免疫限制因子Tetherin的抗病毒机理研究进展

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生物化学与生物物理进展 2014年第1期41卷 32-40页

作者：尹鑫魏萍王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

天然免疫限制因子Tetherin(骨髓基质细胞抗原2)是Ⅰ型干扰素诱导产生的Ⅱ型跨膜蛋白.Tetherin通过其特殊的拓扑结构,在病毒出芽过程中将病毒粒子连接在细胞膜表面,限制病毒的有效释放,从而发挥广谱性的抗病毒活性,而病毒也可以通过多种... 详细信息

天然免疫限制因子Tetherin(骨髓基质细胞抗原2)是Ⅰ型干扰素诱导产生的Ⅱ型跨膜蛋白.Tetherin通过其特殊的拓扑结构,在病毒出芽过程中将病毒粒子连接在细胞膜表面,限制病毒的有效释放,从而发挥广谱性的抗病毒活性,而病毒也可以通过多种策略拮抗Tetherin的抗病毒活性.病毒与宿主长期抗争进化的结果表现为病毒特定拮抗蛋白对抗不同种属细胞Tetherin的限制存在种属特异性.本文通过对Tetherin的分子结构、抗病毒活性及其拮抗蛋白的对抗机制等最新进展进行综述,为研究病毒与宿主相互作用的分子机制以及新型抗病毒药物的筛选提供借鉴.

关键词： Tetherin 抗病毒活性拮抗蛋白进化

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猪传染性胃肠炎病毒NSP5蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 220-224页

作者：董慧张鑫陈建飞时洪艳石达常铁城谷凤丽徐天王智琴冯力沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 首都医科大学基础医学院北京100069

为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白... 详细信息

为制备猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NSP5蛋白的单抗隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究以原核表达并纯化的重组NSP5蛋白(r NSP5-GST)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛出一株稳定分泌抗TGEV NSP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(5C3)。MAb亚类鉴定结果显示其抗体亚类为Ig G1/κ链。杂交瘤细胞培养上清液和腹水的效价分别为1∶6 400和1∶105。Western blot鉴定表明该MAb能够识别原核及真核表达的NSP5重组蛋白。利用肽扫描法鉴定显示,该MAb识别的抗原表位为286EFTPTEVIR QMYGVN300。本研究制备的MAb及其抗原表位的鉴定,为TGEV NSP5蛋白结构和功能的研究奠定了基础。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 nsp5基因单克隆抗体抗原表位

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