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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的：沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一，经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此，构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株，并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体... 详细信息

目的：沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一，经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此，构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株，并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力岛免疫效力活疫苗载体

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猪细小病毒病的流行与防治进展

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养猪 2015年第1期 123-128页

作者：崔宇超崔尚金黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

猪细小病毒感染呈世界分布,在许多地方甚至已经成为地方性疾病,给养猪业造成严重的经济损失。本文对猪细小病毒病的流行、防治、疫苗研究进展进行了简述。1 PPV简介猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原... 详细信息

猪细小病毒感染呈世界分布,在许多地方甚至已经成为地方性疾病,给养猪业造成严重的经济损失。本文对猪细小病毒病的流行、防治、疫苗研究进展进行了简述。 1 PPV简介猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,以产死胎、木乃伊胎、死产、流产、延期发情和产弱仔为主要特征。

关键词：猪细小病毒病母猪繁殖障碍地方性疾病防治进展胎盘屏障 parvovirus 疫苗研究灭活疫苗木乃伊化非结构蛋白

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定量分析马传贫病毒抗原捕获ELISA方法的建立

定量分析马传贫病毒抗原捕获ELISA方法的建立

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：胡哲常浩戈曼林跃智王雪峰郭巍王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室马传染病与慢病毒病研究创新团队哈尔滨150001

EIAV(马传贫)病毒与HIV病毒同属于逆转录病毒科慢病毒属,马传贫弱毒疫苗是目前世界上唯一成功应用的慢病毒疫苗,对于该疫苗作用机制的阐明将为艾滋病疫苗的研究提供借鉴.在基础研究和临床检测中,病毒载量的定量分析至关重要,以往对EIAV...

EIAV(马传贫)病毒与HIV病毒同属于逆转录病毒科慢病毒属,马传贫弱毒疫苗是目前世界上唯一成功应用的慢病毒疫苗,对于该疫苗作用机制的阐明将为艾滋病疫苗的研究提供借鉴.在基础研究和临床检测中,病毒载量的定量分析至关重要,以往对EIAV的检测方法有基于探针的荧光定量PCR,敏感特异,但价格昂贵;还有的方法因需要感染细胞或者测量量子点发射峰等,使得操作技术要求高、实验时间长而未得到广泛的应用,因此,急需建立一种特异、敏感和快速的马传贫病毒蛋白检测盒定量分析方法,为相关的慢病毒基础研究提供技术工具.

关键词：

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HBK-SPF鸭MHCI区域微卫星标记分析

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实验动物科学 2015年第3期32卷 6-9页

作者：韩凌霞武永淑吴少莲彭蔚宇王兴童韩建林陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 中农威特生物科技股份有限公司兰州730046

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B... 详细信息

禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群,与免疫反应或敏感性密切相关,鸭MHC I区域全长36.8 kb,由TAP1、TAP2和5个MHC I拷贝基因(UAA-UEA)组成。HBK-SPF鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭,分为B和Q 2个品系,已封闭繁育了7个世代。本文在鸭MHC I区域筛选了4个微卫星位点,通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序,发现A位点具有多态性,为(GT)n的重复结构,第6代HBK-B和HBK-Q的31个个体和第7代的140个个体进行聚合酶链式反应,结果直接测序,在重复结构之前的108bp中,发现了4种纯合单倍型和6种杂合单倍型;B位点未得到目的产物;C位点位于MHC I拷贝基因UDA和UEA之间,扩增结果与UAA和UBA之间序列高度同源,无法判断基因型;D位点表现为单态,为(ATA)15的固定重复结构。本研究为进一步研究鸭MHC I基因结构和建立家系提供了依据。

关键词： HBK鸭主要组织相容性复合体经典I类分子无特定病原体微卫星标记

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猫杯状病毒新型变异株的遗传特征分析

猫杯状病毒新型变异株的遗传特征分析

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第十一届全国病毒学学术研讨会暨第六届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：刘春国刘永相刘大飞郭东春田进李志杰刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自然疫源性人兽共患病团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自然疫源性人兽共患病团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科、水疱疹病毒属成员之一,也是感染猫的重要病原之一,能够导致猫发生一系列严重的临床症状.FCV基因组包含一个单股正链RNA,极易产生遗传和抗原变异,这也是导致FCV毒力差异和疫苗免疫失败... 详细信息

猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)是杯状病毒科、水疱疹病毒属成员之一,也是感染猫的重要病原之一,能够导致猫发生一系列严重的临床症状.FCV基因组包含一个单股正链RNA,极易产生遗传和抗原变异,这也是导致FCV毒力差异和疫苗免疫失败的基础.因此,对FCV基因组进行分析具有重要意义.

关键词：猫杯状病毒变异株遗传特征超变区

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5株水禽细小病毒全基因组序列分析

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畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1837-1843页

作者：贺亦龙邵周伍林白小飞张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编... 详细信息

利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编码732个氨基酸。GPV、MDPV NS蛋白不同毒株之间相似性分别为95.9%~99.8%和96.8%~99.0%;而GPV与MDPV NS蛋白之间相似性为88.9%~90.4%。GPV、MDPV VP蛋白不同毒株之间的相似性分别为90.2%~100.0%和96.9%~99.3%,而GPV与MDPV VP蛋白之间的相似性为79.5%~81.6%,表明GPV抗原性不同于MDPV。MDPV与GPV NS蛋白均含有4个潜在的糖基化位点;在结构蛋白区域,MDPV VP含有8个潜在的糖基化位点,而GPV为6个糖基化位点,G3与LJY毒株分别缺失582—584NTT和703—705NRT潜在的糖基化位点。5株水禽细小病毒的进化分析表明,GPV、MDPV在进化上形成两个独立的分支,各个基因片段之间未发生重组。

关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒 NS基因 VP基因序列分析

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猪细小病毒1型VP2蛋白的表达与单克隆抗体的制备及应用

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中国兽医科学 2014年第12期44卷 1279-1285页

作者：孙建慧黄立平危艳武吴洪丽王一平张辉刘丹陈冬杰张智慧刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研制抗猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白的单克隆抗体,用重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,融合后采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验筛选抗PPV1VP2的单克隆抗体阳性细胞株,并对单克隆抗体的腹水效价、免疫反应特性及亚类进... 详细信息

为研制抗猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白的单克隆抗体,用重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,融合后采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验筛选抗PPV1VP2的单克隆抗体阳性细胞株,并对单克隆抗体的腹水效价、免疫反应特性及亚类进行了系统鉴定。结果显示,共获得8株阳性杂交瘤细胞株,其腹水抗体效价均达1∶51 200,其中7株的重链亚类为IgG1,另1株(4A1)为IgM;6株的轻链为κ型,另2株(8D7和4A1)为λ型。这些单克隆抗体均可与PPV1感染的猪睾丸细胞呈阳性反应;Western-blot结果显示,这些单克隆抗体可与自然PPV1VP2蛋白产生良好的免疫反应。以其中1株单克隆抗体(8E4)建立了间接ELISA,通过对重组杆状病毒表达的PPV1VP2蛋白产物进行的动力学检测表明,第72小时蛋白表达量最高;对PPV1感染细胞增殖规律的测定结果显示,接种后第16小时可检测到病毒感染的阳性细胞,说明该病毒复制周期小于24h。本研究获得的单克隆抗体可用于重组VP2蛋白抗原的检测及病毒繁殖规律的研究。

关键词：猪细小病毒1型 VP2蛋白单克隆抗体

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肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

肠炎沙门氏菌三种主要毒力岛基因缺失株的构建及其免疫效力研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：吕雪莲周薇刘松艳曹俊张童利王曼宇刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内... 详细信息

目的 :沙门氏菌病属于重要的食源性致病菌之一,经常通过污染的水和食物引起人类疾病。沙门氏菌的致病性与其毒力岛基因密切相关。因此,构建沙门氏菌单个或多个毒力岛的基因缺失株,并评估这些毒力岛对沙门氏菌致病性的影响以及在鸡体内诱导免疫应答变化是非常重要的。方法 :本实验利用改进的Red同源重组系统成功构建SPI-1、SPI-2、SPI-3三种主要毒力岛的单缺失、双缺失及三缺失菌株。结果 :敲除SPI-1后的单缺失、双缺失和三缺失菌株的侵袭力均下降,而其他缺失菌株和野生菌株相比侵袭能力差别不大;所有缺失株对细胞的粘附力均显著低于野生菌株(P<0.001)。将上述毒力岛缺失株分别接种7日龄SPF鸡,评价缺失株的致病力、定殖能力以及对鸡只的免疫效力。结果表明,毒力岛缺失菌株可以在肝脏、脾脏和盲肠中定殖,但不会引起鸡只发病,且SM6ΔSPI-1-3在脾脏和肝脏中的定殖效率低于SM6,接种第8天即被机体迅速清除;毒力岛缺失菌株产生的抗体均处于较高水平;毒力岛缺失菌株免疫后机体CD4+T和CD8+T亚群的均有明显变化。免疫后检测血清中IL-4和IFN-γ的细胞因子水平也有上升趋势,并且病理学结果表明鸡只无明显的病理改变。结论 :毒力岛缺失菌株中SM6ΔSPI-1-3有较好的免疫效果及保护效率。三种主要毒力岛缺失菌株的成功构建为阐明肠炎沙门氏菌致病机制和研发安全有效的减毒活疫苗载体奠定了良好的基础。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力岛免疫效力活疫苗载体

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2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

2009-2011年环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病禽流感监测情况

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2015年中国微生物学会学术年会

作者：黄建龙王昌建邓国华谭丹范仲鑫何世成朱春霞汪洪冰刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙 410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001 湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙 410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据.方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的...

目的了解环洞庭湖区主要活禽批发市场低致病性禽流感病毒的分布和流行情况,为该地区活禽批发市场低致病性禽流感的防控措施提供一些依据.方法对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI)和RT-PCT方法相结合鉴定病毒的亚型.结果 2009年-2011年冬春季节,我们在环洞庭湖地区主要活禽批发市场上共分离到627株低致病性禽流感病毒,总的分离率为22.2％,其中鸭拭子低致病性禽流感病毒的分离率最高,达到24.6％,其次是鸡拭子,达到21.5％,鹅拭子为11％.在所监测的5家活禽批发市场中共分离到H3、H4、H6、H9、H10型和H11等6种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H9、H6和H4亚型比较高,其分离率分别可达到11％、6.3％和3.4％.结论活禽批发市场中低致病性禽流感隐性带毒的情况普遍存在,其发生禽流感疫情的威胁较大.建议整顿规范市场经营管理,特别是要建立活禽交易市场定期休市制度.

关键词：

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猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究

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石河子大学学报（自然科学版） 2015年第2期33卷 188-191页

作者：高明明王淑杰王俊金家民张璐刘永刚李爱东陶冶李莉姜成刚王刚申红石河子大学动物科技学院石河子832003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断及技术服务中心哈尔滨150001 北京市畜牧总站北京100107

为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a... 详细信息

为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。

关键词：猪链球菌乳酸脱氢酶反应原性原核表达

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