检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2014年第3期 4-8,207页

作者：王雪枝朱远茂史鸿飞严昊蔡红王姝马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室哈尔滨150001

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得... 详细信息

为了制备BVDV的E0蛋白兔源多克隆抗体,试验采用大肠杆菌对E0蛋白进行了表达,根据已发表的BVDV的VEDEVAC株的全基因组序列设计1对扩增E0的引物,经RT-PCR扩增出长约680 bp的E0基因片段,然后将目的基因克隆到pET-30a载体上,经酶切鉴定获得阳性重组质粒后进行测序,再将测序正确的阳性重组质粒转化BL21表达菌,经扩大培养及IPTG诱导后获得以包涵体形式存在的重组E0蛋白,经亲和层析法纯化后进行Western-blot检测,同时以纯化的E0蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并对E0多克隆抗体进行了中和试验和免疫荧光检测。结果表明:E0蛋白具有良好的反应性;E0多克隆抗体的病毒中和试验测定其中和抗体效价达到1∶128,具有良好的反应性和特异性。说明制备的重组E0蛋白多克隆抗体可以用于BVDV的检测。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E0蛋白家兔多克隆抗体 RT—PCR Western—blot IFA

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一株H5N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 672-675页

作者：慈彦鹏王德丽樊兆斌刘丽玲贾莹李鑫磊田国彬曾显营陈化兰李雁冰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

2013年12月在河北省保定市某鸡场分离到一株H5N2亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/3/2013(H5N2)。本研究对其全基因组序列进行测序,并对鸡进行静脉接种指数(IVPI)测定,同时对BALB/c小鼠进行致病性试验。病毒的各基因节段序列... 详细信息

2013年12月在河北省保定市某鸡场分离到一株H5N2亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/chicken/Hebei/3/2013(H5N2)。本研究对其全基因组序列进行测序,并对鸡进行静脉接种指数(IVPI)测定,同时对BALB/c小鼠进行致病性试验。病毒的各基因节段序列分析表明:该病毒的HA基因属于Clade 7.2分支,HA蛋白的裂解位点处具有多个连续碱性氨基酸(342RRRKR346),具备高致病性AIV(HPAIV)的典型分子特征。BLAST分析显示该分离株的各个基因节段分别与H5N1和H9N2亚型AIV的相应基因节段具有很高的同源性,推测该分离株可能为一株重组病毒。该病毒的IVPI为2.94,对鸡呈高致病性;对鼠的半数致死量(MLD50)>6.0 logEID50,呈低致病性,病毒仅在小鼠的肾和鼻甲骨中进行较低程度的复制。以上结果表明,Clade 7.2分支HPAIV仍保持对鸡高致病性而对小鼠低致病性的特征。

关键词：禽流感病毒 H5N2 重组进化分析致病性

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结核分枝杆菌Rv1400c多抗制备及反应原性分析

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经济动物学报 2015年第1期19卷 16-19+24页

作者：陶荣珊胡太超李金伟刘思国王全凯吉林农业大学动物科学技术学院北海绿瑞贸易有限责任公司东丰药业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室吉林省中韩动物科学研究院

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白... 详细信息

将pET28b-Rv1400c重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选出阳性菌株并增菌培养后IPTG诱导表达,离心后沉淀用SKL变性溶解,用亲和层吸树脂纯化Rv1400c蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白表达与纯化情况;利用Rv1400c蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;Western-blot分析鹿结核阳性血清的反应情况。SDS-PAGE和Western-blot结果显示:Rv1400c以包涵体形式表达,蛋白分子质量为39 ku;目的蛋白免疫新西兰兔后,ELISA检测血清效价达到1∶51 200。纯化的Rv1400c重组抗原蛋白能与鹿的阳性血清发生体外结合反应。

关键词：结核分枝杆菌 Rv1400c 包涵体复性反应原性

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鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2014年第10期 15-17,21页

作者：陈玉明高玉龙张礼洲王念高立任宪刚姜莉莉高宏雷秦立廷王永强祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001

为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-... 详细信息

为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-Rec共同转化Y187酵母感受态细胞,通过同源重组构建酵母表达文库。结果表明:所构建cDNA文库的效价为9.5×107cfu/mL,重组率为100%,可以用于酵母双杂交试验。

关键词：法氏囊 B淋巴细胞酵母双杂交 cDNA文库

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重组鸡β-防御素12蛋白的原核表达及其生物学特性分析

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东北农业大学学报 2014年第10期45卷 49-56页

作者：马得莹徐杨李妍妍徐倩倩张婷婷韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室哈尔滨150001

为探讨鸡β-防御素12(AvBD12)的生物学特性,试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上,进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明,重... 详细信息

为探讨鸡β-防御素12(AvBD12)的生物学特性,试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上,进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明,重组鸡AvBD12融合蛋白分子质量约为14 ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定,结果显示,纯化后的重组鸡AvBD12融合蛋白对金黄色葡萄球菌和兔波氏杆菌有较高抗菌活性,对猪霍乱沙门氏菌和乳酸菌的抗菌活性较弱。高盐浓度对其抗菌活性有显著影响。该重组蛋白对鸡红细胞无显著溶血活性。荧光定量PCR结果表明,AvBD12基因在所测定的15个鸡组织器官中均有表达。

关键词：鸡β-防御素12 重组蛋白抗菌活性组织分布

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鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备

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中国家禽 2014年第20期36卷 17-21页

作者：臧凤霞张雅春王伟赵颖慧李越周长良陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表... 详细信息

利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(m Ab),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析。获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性。制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础。

关键词：鸭RIG-Ⅰ helicase结构域 RD结构域原核表达单克隆抗体

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三株传染性法氏囊病病毒超强毒株全基因组的克隆与序列分析

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中国兽医科学 2014年第9期44卷 887-894页

作者：高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150001

为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,... 详细信息

为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,3株毒株对SPF鸡的致死率均在60%以上,为IBDV超强毒株(vvIBDV)。遗传进化分析表明,3株分离毒株的A节段均位于超强毒分支。IBDV的B节段分为明显的3个亚群,其中HuB-1、SD10LY01的B节段属于第Ⅲ亚群,HeB10XS02的B节段则属于第Ⅱ亚群。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚群之间在VP1蛋白上存在17个保守氨基酸差异位点,其中第145~147位氨基酸形成独特的'三联体'基序,不同亚群具有不同的基序。本研究结果为更好地了解vvIBDV基因组特征以及致病性分子基础的研究提供了重要理论依据。

关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV) 全基因组克隆序列分析

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猪源化嵌合抗体在杆状病毒中的表达

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中国预防兽医学报 2014年第7期36卷 559-562页

作者：杨玉菊姜福成柴政符芳郑楠王香玲郭殿磊李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨学院黑龙江哈尔滨150086

为构建具有活性的抗副猪嗜血杆菌(***)鼠-猪嵌合单链抗体(scFv),本研究以***单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞1D8株的总RNA制备的cDNA为模板,通过RT-PCR分别扩增抗MAb轻链、重链可变区序列及猪抗体轻链和重链恒定区序列,并将这些片段经重叠延... 详细信息

为构建具有活性的抗副猪嗜血杆菌(***)鼠-猪嵌合单链抗体(scFv),本研究以***单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞1D8株的总RNA制备的cDNA为模板,通过RT-PCR分别扩增抗MAb轻链、重链可变区序列及猪抗体轻链和重链恒定区序列,并将这些片段经重叠延伸PCR分别扩增可变区与恒定区的轻链与重链的序列。将扩增的两个目的基因克隆于双向表达载体pFast-Bac-Dual中,并进一步以其构建的重组杆粒,转染Sf9昆虫细胞筛选制备稳定表达的抗***猪源化嵌合的scFv重组杆状病毒。Western blot、ELISA、体外和体内的抑菌试验表明,抗***猪源化嵌合scFv具有中和活性和抑制细菌增殖的能力,可以为进一步的***的抗体治疗奠定基础。

关键词：副猪嗜血杆菌猪源化嵌合抗体杆状病毒表达

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表达流行毒株VP2蛋白的IBDV重组疫苗株rGtHLJVP2的构建及其免疫效力的评价

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 794-799页

为应对传染性法氏囊病病毒(IBDV)变异毒株及超强毒株(vvIBDV)等突发疫情的出现,解决传统疫苗株筛选费时费力的难题,在流行病学调查的基础上,克隆了超强毒株HLJ0504的VP2基因,并突变细胞嗜性决定氨基酸位点(Q253H/A284T),用其替换IBDV弱... 详细信息

为应对传染性法氏囊病病毒(IBDV)变异毒株及超强毒株(vvIBDV)等突发疫情的出现,解决传统疫苗株筛选费时费力的难题,在流行病学调查的基础上,克隆了超强毒株HLJ0504的VP2基因,并突变细胞嗜性决定氨基酸位点(Q253H/A284T),用其替换IBDV弱毒株Gt基因组的相应区段,成功获得1株表达流行vvIBDV VP2蛋白的重组病毒rGtHLJVP2。体内、外复制动力学研究表明,该重组病毒与亲本病毒Gt的复制能力相当。动物试验结果表明,该重组病毒对接种鸡无明显致病性,接种鸡法氏囊指数均在0.7以上,法氏囊无明显萎缩现象。该重组病毒可以诱导机体产生良好的免疫应答,其抗体水平明显高于亲本毒,能够完全抵抗vvIBDV的攻击。另外,该重组病毒具有良好的遗传稳定性。本研究结果为新型传染性法氏囊病疫苗的研发奠定了基础,对于IBDV突发疫情的应急防控具有重要意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒重组病毒 VP2蛋白免疫效力

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表达马尔堡病毒囊膜糖蛋白GP重组新城疫病毒的构建及免疫原性评估

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 667-671页

作者：胡旭乐温志远宋坤王喜军陈伟业葛金英步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为研制安全、有效的抗马尔堡病毒(MARV)疫苗,本研究将人工合成的MARV GP基因利用新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统构建并拯救得到表达MARV糖蛋白GP的重组病毒(rLa-MARVGP),并以小鼠为动物模型对其安全性和免疫原性进行评价。West... 详细信息

为研制安全、有效的抗马尔堡病毒(MARV)疫苗,本研究将人工合成的MARV GP基因利用新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统构建并拯救得到表达MARV糖蛋白GP的重组病毒(rLa-MARVGP),并以小鼠为动物模型对其安全性和免疫原性进行评价。Western blot和间接免疫荧光试验表明MARV GP能够正确表达,其分子量为130 ku;动物实验结果表明rLa-MARVGP对小鼠高度安全;rLa-MARVGP免疫小鼠能够诱导产生抗MARV GP囊膜嵌合水疱性口炎病毒假病毒的特异性中和抗体。本研究表明rLa-MARVGP作为防控MARV的储备性疫苗具有潜在的应用价值。

关键词：马尔堡病毒囊膜糖蛋白重组新城疫病毒

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