检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第4期36卷 289-292页

作者：刘晓婧王芳赵权于力吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247... 详细信息

为建立阿卡斑病ELISA血清学诊断方法,本研究利用原核表达的阿卡斑病毒(AKAV)核衣壳(N)蛋白和全病毒作为包被抗原,分别建立两种AKAV抗体的间接ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。应用两种间接ELISA检测方法分别对不同省份来源的247份牛血清样本进行检测,与中和试验结果进行比较。结果表明,中和试验抗体检出阳性率为29.55%,N蛋白间接ELISA(N-ELISA)和AKAV全病毒间接ELISA(AKAV-ELISA)与中和试验的符合率分别为72.5%和76.5%。本研究建立的N-ELISA及AKAV-ELISA方法均可以用于AKAV感染的流行病学调查。其中,N-ELISA方法安全性好,更适合推广应用。

关键词：阿卡斑病毒核衣壳N蛋白间接ELISA 中和试验

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A群猪轮状病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第2期41卷 70-74页

作者：迟延彬陈建飞时洪艳张鑫石达李长龙韩斅陈洪岩冯力东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。将A群G11血清型PoRVVP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化融合... 详细信息

试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。将A群G11血清型PoRVVP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化融合蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞并进行有限稀释法克隆化筛选。经3次筛选,最终得到1株能与GST-VP7蛋白反应的特异性、稳定分泌抗体的阳性细胞克隆。Western blotting鉴定结果显示该单克隆抗体具有良好的免疫原性及特异性;MTT法中和试验结果显示其具有中和活性;分泌的单克隆抗体亚型为IgG2b。本试验结果表明A群PoRV VP7蛋白在大肠杆菌中成功表达且制备了单克隆抗体,可用于PoRV VP7蛋白结构和功能的研究,也为猪轮状病毒病的预防、诊断和治疗等研究奠定基础。

关键词： A群猪轮状病毒 VP7基因单克隆抗体

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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第10期41卷 33-37页

作者：徐天石达陈建飞谷凤丽时洪艳张鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的... 详细信息

为了更系统的研究病毒在猪肠道内侵入及致病的分子机制,本试验以猪小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）为模型,应用RNeasy Min Kit从猪IEC中提取细胞总RNA,反转录后,利用SMART技术合成双链cDNA（ds-cDNA）,通过同源重组的方法构建猪IEC酵母双杂交cDNA文库。结果显示,文库的滴度为8.4×108 CFU/mL,插入的ds-cDNA片段大小为0.5~2.0kb,平均长度约为1.1kb,文库重组率为100%。此文库为筛选与猪腹泻病毒相互作用的宿主蛋白及进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础,为研制有效的药物或疫苗提供了依据。

关键词：猪腹泻病毒猪小肠上皮细胞酵母双杂交 cDNA文库

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口蹄疫病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2014年第12期36卷 948-951页

作者：胡晓亮姜骞仇铮郭东春刘家森林欢刘培新田进李志杰刘大飞刘春国曲娟娟曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为建立检测口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据Gen Bank中FMDV的2B基因序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,将2B基因克隆到p Blue Script SK(-)载体中,利用T7体外转录试剂盒制备标准品,通过优化反应条件,建立了Taq Man荧光定量PCR... 详细信息

为建立检测口蹄疫病毒(FMDV)的方法,本研究根据Gen Bank中FMDV的2B基因序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,将2B基因克隆到p Blue Script SK(-)载体中,利用T7体外转录试剂盒制备标准品,通过优化反应条件,建立了Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到102拷贝/μL;与其它主要相关病毒均不发生交叉反应,批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于3%。本研究建立的FMDV Taq Man荧光定量PCR方法对FMDV的快速检测具有重要意义。

关键词：口蹄疫病毒 TaqMan探针荧光定量PCR

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VeroE6细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 124-127页

作者：迟延彬石达朱庆贺陈建飞时洪艳张鑫李长龙韩斅刘宁赵鑫冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术... 详细信息

为寻找与猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）相互作用的VeroE6细胞蛋白，深入研究病毒感染机制，本试验建立了一个VeroE6细胞酵母杂交cDNA文库。采用Trizol试剂从培养的VeroE6细胞中提取细胞总RNA，通过SMART技术合成双链cDNA，并利用同源重组的方法构建VeroE6细胞的酵母cDNA文库。结果显示，文库滴度为9．7×10^8 CFU／mL，插入的双链cDNA片段大小为0．5～3kb，平均长度约为1．6kb，文库重组率为87％，此文库可以用来筛选与病毒相互作用的VeroE6蛋白。该文库的构建为发现和研究与PEDV结构蛋白相互作用的宿主细胞蛋白奠定基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 Vero E6细胞 cDNA文库 SMART技术酵母双杂交

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传染性法氏囊病病毒自然重配株全基因组序列分析

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中国兽医学报 2014年第2期34卷 219-226页

作者：朱向东王永山欧阳伟潘群兴毕振威李月华范红结王笑梅江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒（IBDV），分别命名为QL和ZZ—ll，对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征，对其全基因组序列进行了测定，2个病... 详细信息

从具有新的流行病学特征的传染性法氏囊病（IBD）发病鸡群中分离到2株传染性法氏囊病病毒（IBDV），分别命名为QL和ZZ—ll，对4周龄SPF鸡的致死率分别为94％和86％。为分析该毒株的分子生物学特征，对其全基因组序列进行了测定，2个病毒株基因组A节段长度为3260bp、B节段长度2827bp。病毒演化分析结果显示2个病毒基因组A节段的核苷酸序列与已发表的强毒株序列的同源性分别为96．8％～98．1％和96．9％～98．4％，处在IB—DV超强毒株分支上；而B节段与已发表的弱毒株序列的同源性分别为89．7％～90．4％和90．0％～90．7％，位于弱毒株分支上。IBDV超强毒株和弱毒株序列特征氨基酸残基与基序分析表明，QL和ZZ—11两个病毒株的A节段VP2基因的氨基酸残基为222A、249Q、253Q、254G、256I、294I和299S，七肽基序为SWSASGS，均符合超强毒株的分子特征；而B节段777～782位核苷酸序列为GGTGCC，没有KpnI酶切位点，具有弱毒株的序列特点。以上分析结果表明，QL和ZZ—11为IBDV自然重配株，A节段源于超强毒株，而B节段源于弱毒株。

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) 病毒演化重配病毒序列分析

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多重耐药基因cfr在广东地区猪源肠球菌中的流行特点

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中国预防兽医学报 2014年第11期36卷 859-862页

作者：牟迪王秀梅初胜波刘琪张万江刘思国东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学吉林长春130118

为调查多重耐药基因cfr在广东地区猪源肠球菌中的流行特点及分离株对临床常用药物的耐药情况,本研究通过对临床分离的8株携带cfr基因的肠球菌进行最小抑菌浓度(MIC)测定,脉冲凝胶电泳(PFGE)分型和southern杂交定位,确定分离株的耐药表型... 详细信息

为调查多重耐药基因cfr在广东地区猪源肠球菌中的流行特点及分离株对临床常用药物的耐药情况,本研究通过对临床分离的8株携带cfr基因的肠球菌进行最小抑菌浓度(MIC)测定,脉冲凝胶电泳(PFGE)分型和southern杂交定位,确定分离株的耐药表型和cfr基因在肠球菌中的传播方式。研究表明,8株菌对氟苯尼考、庆大霉素和红霉素耐药率均为100%;对四环素、环丙沙星和利福平的耐药率高达75.0%以上。PFGE结果显示在同一猪场分离的28株cfr阳性肠球菌共有8种不同的PFGE谱型,表明cfr基因在同一猪场中存在克隆传播的现象。Southern杂交结果显示,cfr基因在6株菌中定位于20 kb^50 kb的质粒。本研究为临床制定合理措施控制cfr快速传播提供实验依据。

关键词： cfr基因脉冲凝胶电泳最小抑菌浓度 Southern杂交肠球菌

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抗原处理相关转运体(TAP)的结构和功能研究进展

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实验动物科学 2014年第3期31卷 56-59页

作者：张晓娜韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室哈尔滨150001

抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)转运体超家族的B亚家族,是由主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)上2个紧密连锁的基因TAP1和TAP2编码蛋白组成的异二聚体,位于内质网和顺式高尔基膜上,... 详细信息

抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)转运体超家族的B亚家族,是由主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)上2个紧密连锁的基因TAP1和TAP2编码蛋白组成的异二聚体,位于内质网和顺式高尔基膜上,功能是将抗原肽从细胞质转运进入内质网池,组装到MHC I类分子上构成复合体。TAP蛋白的缺乏和突变会影响抗原肽的提呈,最终损害免疫应答功能。

关键词：抗原处理相关转运体抗原呈递 MHC Ⅰ类分子

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1株H12N7亚型禽流感病毒全基因组测定及遗传演化分析

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畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1844-1850页

作者：谭丹崔鹏飞黄建龙王昌建李文辉范仲鑫张芳何世成唐小明刘道新邓国华湖南省动物疫病预防控制中心长沙410014 长沙市动物疫病预防控制中心长沙410013 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

2011年冬对湖南环洞庭湖地区散养鸭群进行禽流感病毒(AIV)感染情况调查时从一鸭场环境粪便拭子中分离一株H12N7亚型AIV,命名为A/Environment/Hunan/S4484/2011(H12N7),对其进行全基因序列测定及分析。结果显示该毒株HA基因裂解位点无多... 详细信息

2011年冬对湖南环洞庭湖地区散养鸭群进行禽流感病毒(AIV)感染情况调查时从一鸭场环境粪便拭子中分离一株H12N7亚型AIV,命名为A/Environment/Hunan/S4484/2011(H12N7),对其进行全基因序列测定及分析。结果显示该毒株HA基因裂解位点无多个连续的碱性氨基酸(PQAQDR↓GLF),具有低致病性AIV的特征,对其全基因进行遗传进化分析表明8个基因片段来源非常复杂,与周边国家野禽中分离的毒株相似性很高,可能有共同的祖先来源,同时提示该毒株可能是不同亚型禽流感毒株之间基因交换所形成的重组体。

关键词：禽流感病毒 H12N7亚型序列测定与分析

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鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子基因的克隆及序列分析

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中国畜牧兽医 2014年第12期41卷 85-89页

作者：万春和程龙飞陈红梅傅光华施少华黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究根据鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子(RaDtxR)基因序列特征设计特异性引物,利用PCR方法从已鉴定为2型鸭疫里默氏菌RA-FJ株的基因组DNA中扩增目的基因片段,胶回收PCR扩增片段,克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。采用生物信息学软件对测... 详细信息

本研究根据鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子(RaDtxR)基因序列特征设计特异性引物,利用PCR方法从已鉴定为2型鸭疫里默氏菌RA-FJ株的基因组DNA中扩增目的基因片段,胶回收PCR扩增片段,克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。采用生物信息学软件对测序结果进行分析,结果表明所获得的RaDtxR基因编码完整的开放阅读框,全基因长度为654bp,编码217个氨基酸。所编码的蛋白大小为24.82ku,理论等电点为5.69,不稳定系数为38.45,属于稳定蛋白质类。将其与GenBank中已发表的RaDtxR基因序列进行核苷酸同源性比对分析,结果显示其与鸭疫里默氏菌疫苗株RA-CH-1株(GenBank登录号:CP003787)的核苷酸同源性为100.0%,与其他4株核苷酸同源性均为99.8%,仅在186位处存在无义突变。利用该基因对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的鸭大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌和沙门氏菌进行扩增,结果显示均未扩增到条带,对福建省农业科学院畜牧兽医研究所分离鉴定的1型、2型、3型、11型和13型鸭疫里默氏菌均可扩增出特异性目的条带,表明RaDtxR基因可作为鸭疫里默氏菌鉴别诊断的靶基因。试验结果表明,本研究成功克隆到鸭疫里默氏菌RaDtxR基因,为研究其功能奠定基础。

关键词：鸭疫里默氏菌铁依赖抑制子基因克隆生物信息学分析

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