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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：祁小乐高立王永强高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病.超强毒(vvIBDV)的感染造成50％以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展.IBD疫苗目前存在问题:... 详细信息

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病.超强毒(vvIBDV)的感染造成50％以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展.IBD疫苗目前存在问题:技术瓶颈是疫苗株需要通过人工盲传驯化获得,费事费力;使用误区是中等或中等偏强毒力毒株被用作疫苗,存在生物安全隐患.目的:优化基于反向遗传操作的IBD疫苗研究新型技术平台,研制高效低毒的IBD新型重组疫苗.方法:建立IBD反向遗传操作技术;研究IBDV毒力和细胞嗜性的分子基础;构建和拯救重组病毒;通过动物实验评估重组疫苗株的有效性和安全性.

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗反向遗传

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口蹄疫病毒3C蛋白酶切割宿主蛋白PCBP2

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 419-422页

作者：杨春梅黄丽王海伟于会彬李一经蔡雪辉于力唐丽杰翁长江东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著降低。为鉴定FMDV 3Cpro是否具有切割PCBP2蛋白的功能,本研究采用免疫共沉淀试验和激光共聚焦检测显示,FMDV 3Cpro和PCBP2在细胞内存在相互作用,并且共定位于细胞质中。进一步研究显示,FMDV 3Cpro能够切割PCBP2,而且具有剂量依赖性。此外,FMDV 3Cpro活性位点突变(H46Y)试验结果表明,FMDV 3Cpro的蛋白酶活性是切割蛋白PCBP2所必需的。FMDV 3Cpro切割PCBP2靶位点序列的鉴定及FMDV 3Cpro切割PCBP2的生物学意义有待深入研究。

关键词：口蹄疫病毒 3C蛋白酶 PCBP2 切割

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兔出血症病毒肝细胞表面蛋白受体的筛选

兔出血症病毒肝细胞表面蛋白受体的筛选

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：刘家森陈淑慧黄艳秋单丽玲郭东春姜骞李志杰崔玉东曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

病毒识别细胞表面的受体是病毒感染的第一步,为了筛选兔出血症病毒(RHDV)的肝脏细胞表面受体,成年兔肝脏组织经胰酶消化及300目铜网过滤,得到完整的兔肝脏细胞,用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离;采用病毒铺覆蛋白技术(Virus overla... 详细信息

病毒识别细胞表面的受体是病毒感染的第一步,为了筛选兔出血症病毒(RHDV)的肝脏细胞表面受体,成年兔肝脏组织经胰酶消化及300目铜网过滤,得到完整的兔肝脏细胞,用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离;采用病毒铺覆蛋白技术(Virus overlay protein blot assay,VOPBA)分析兔肝脏细胞表面蛋白,结果表明在130 ku-170 ku的位置上存在与RHDV相互作用的特异性蛋白条带,利用液相色谱联合质谱技术(LC MS/MS)对特异蛋白条带进行shotgun分析,鉴定得到39个候选蛋白,其中3种蛋白在病毒感染过程中具有重要作用.本研究将为RHDV受体的进一步探索奠定基础.

关键词：兔出血症病毒肝脏细胞表面蛋白受体筛选

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白细胞ADAM17在急性炎症中的调节作用及机制研究

白细胞ADAM17在急性炎症中的调节作用及机制研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

ADAM 17为金属蛋白酶家族的重要成员之一,为Ⅰ型跨膜蛋白,在组织中广泛表达,因能水解膜结合型TNFα前体释放可溶性TNFα,又被称作肿瘤坏死因子α前体转换酶(tumor necrosis factor α converting enzyme,TACE).该蛋白酶参与了许多粘附... 详细信息

ADAM 17为金属蛋白酶家族的重要成员之一,为Ⅰ型跨膜蛋白,在组织中广泛表达,因能水解膜结合型TNFα前体释放可溶性TNFα,又被称作肿瘤坏死因子α前体转换酶(tumor necrosis factor α converting enzyme,TACE).该蛋白酶参与了许多粘附分子、细胞因子、配体和受体的水解过程,迄今为止已鉴定的底物超过40种.在急性炎症的动物模型中,发现该蛋白酶发挥着重要作用.具体的机制则是该蛋白酶通过对细胞-细胞和细胞-基质相互作用的修饰,如:粘附分子L-selectin、ICAM、VCAM,炎性受体IL-6R、趋化受体CXCR2,IgG Fc受体等,调整免疫细胞进入炎症反应部位的速度;同时,通过对可溶性炎症因子TNFα、IFN-γ等分泌水平的调节控制炎症反应的进程;随着炎症反应的发展,该蛋白酶则修饰免疫细胞表面分子,如TNFR-Ⅰ/Ⅱ,降低细胞的免疫应激能力,促进细胞发生凋亡,发起结束炎症反应的信号.在本研究中从多角度揭示了急性炎症条件下ADAM17在平衡免疫细胞功能,调节炎症反应中的重要作用.

关键词：动物免疫学急性炎症白细胞金属蛋白酶调节机制

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猪源金属蛋白酶ADAM17免疫调节作用及分析

猪源金属蛋白酶ADAM17免疫调节作用及分析

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：谷伟红郭龙军牛军伟黄明明王玉娥中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究则从猪源ADAM17角度出发，推测分析猪源ADAM17在免疫调节中的作用。首先对ADAM17分子在猪体内转录图谱进行绘制，进而探知ADAM17对免疫细胞表面IgG Fc受体的剪切分析。通过对不同组织中ADAM17 mRNA进行定量检测，发现该分子... 详细信息

本研究则从猪源ADAM17角度出发，推测分析猪源ADAM17在免疫调节中的作用。首先对ADAM17分子在猪体内转录图谱进行绘制，进而探知ADAM17对免疫细胞表面IgG Fc受体的剪切分析。通过对不同组织中ADAM17 mRNA进行定量检测，发现该分子在不同组织中均有转录，而在免疫器官在表达水平相对较高，如扁桃体、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结等。此外，该分子在巨噬细胞和嗜中性粒细胞也高效表达。这些结果提示该分子在猪体内也具有免疫调节的作用。为了进一步分析该分子的免疫调节作用，克隆并表达了猪源IgG Fc受体CD16，运用过表达、特异性抑制剂及siRNA相结合的技术，分析ADAM17对IgG Fc受体CD16的剪切调节作用，结果发现ADAM17可以剪切巨噬细胞和嗜中性粒细胞表面的CD16，释放可溶性胞外域分子。本次研究证实猪源金属蛋白酶ADAM17在多方面与人源及鼠源ADAM17相似，具有重要的免疫调节作用。

关键词：猪免疫学金属蛋白剪切酶免疫调节

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伪狂犬病病毒变异株gl/gE基因缺失毒株的构建及免疫效力评价

伪狂犬病病毒变异株gl/gE基因缺失毒株的构建及免疫效力评价

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：王春花袁晋秦华洋丛鑫罗玉子孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

近年来,在中国很多地区的伪狂犬病Bartha-K61疫苗免疫猪群中接连爆发了新的伪狂犬病疫情.研究表明,现行的Bartha-K61疫苗株不能对当前流行的伪狂犬病病毒变异株(PRV TJ株)提供完全免疫保护.本研究以PRV变异株TJ株为亲本病毒,参照Bartha-... 详细信息

近年来,在中国很多地区的伪狂犬病Bartha-K61疫苗免疫猪群中接连爆发了新的伪狂犬病疫情.研究表明,现行的Bartha-K61疫苗株不能对当前流行的伪狂犬病病毒变异株(PRV TJ株)提供完全免疫保护.本研究以PRV变异株TJ株为亲本病毒,参照Bartha-K61株的基因缺失部位,采用改进的方法构建了gI/gE双基因缺失毒株rPRVTJ-delgE,并进行了安全性和免疫原性评价.结果显示,将rPRVTJ-delgE以不同剂量(103 TCID50～105 TCID50)接种猪只后,免疫猪未出现任何异常临床症状,产生了PRV特异性抗体,用PRV变异株TJ株攻击后,不同剂量rPRVTJ-delgE免疫猪均得到了完全保护,表现为无临床症状、不排毒、无病理变化,而Bartha-K61疫苗株免疫猪攻毒后出现了伪狂犬病临床症状,并在攻毒后4d～5d出现排毒,未免疫猪则全部出现严重的伪狂犬病症状,并且大部分死亡.这表明,rPRVTJ-delgE是一株很有希望的PRV基因缺失疫苗候选株,可望用于防控当前流行的伪狂犬病变异株.

关键词：猪伪狂犬病病毒变异株双基因缺失毒株构建免疫效力

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稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白细胞系的构建

稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白细胞系的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：华荣虹李业南陈振师柳金雄步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为了构建稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的哺乳动物细胞系及研制鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗,本研究构建了鸭坦布苏病毒prM-E蛋白基因真核表达质粒,转染BHK-21细胞后经免疫荧光与western blot筛选,获得了稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的... 详细信息

为了构建稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的哺乳动物细胞系及研制鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗,本研究构建了鸭坦布苏病毒prM-E蛋白基因真核表达质粒,转染BHK-21细胞后经免疫荧光与western blot筛选,获得了稳定表达鸭坦布苏病毒prM-E蛋白的细胞系.分析细胞表明细胞系表达蛋白分泌至细胞培养上清液中,表达量高且稳定,细胞传代结果分析表达该细胞系在经多次传代后仍保持大于90％的阳性细胞率.表达产物与佐剂配制成疫苗免疫鸭后能诱导免疫鸭产生病毒中和抗体,免疫鸭能抵抗病毒攻击.该细胞系的构建为鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的研制提供了基础.

关键词：鸭坦布苏病毒丙种球蛋白细胞系亚单位疫苗

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DDX19参与PRRSV复制及在NLRP3介导的炎症反应中的功能

DDX19参与PRRSV复制及在NLRP3介导的炎症反应中的功能

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：李江南李园园胡亮黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

炎症反应在机体天然免疫和获得性免疫中有重要作用.NLRP3介导的炎症小体通过激活caspase-1,促进白介素-18(IL-18)、白介素1β(IL-1β)等细胞因子的分泌介导炎症病理的发生.发现高致病蓝耳病病毒(HP-PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后能形... 详细信息

炎症反应在机体天然免疫和获得性免疫中有重要作用.NLRP3介导的炎症小体通过激活caspase-1,促进白介素-18(IL-18)、白介素1β(IL-1β)等细胞因子的分泌介导炎症病理的发生.发现高致病蓝耳病病毒(HP-PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后能形成NLRP3介导的炎症小体,激活caspase-1和增强IL-1β的分泌,但HP-PRRSV如何激活炎症反应小体的形成机制还不是很清楚. 在本研究中，发现PRRSV的RNA能激活NLRP3炎症小体。利用抗猪斑点样蛋白ASC 的单克隆抗体做免疫沉淀并用质谱分析免疫沉淀蛋白，发现DDX19是HP-PRRSV介导NLRP3炎症小体的一个新的组分，参与NLRP3炎症小体的形成。DDX19与NLRP3相互作用，不与ASC和caspase-1作用。深入的研究发现，DDX19还是一个RNA结合蛋白，能与PolyI:C和PRRSV的RNA结合。进一步研究发现，DDX19能识别PRRSV的RNA，可能通过NLRP3激活caspase-1，促进IL-1β的分泌。令人感兴趣的是，发现DDX19与PRRSV的NSP2和NSP10相互作用，直接参与PRRSV复制复合体的形成。利用siRNA敲低和过表达试验，发现DDX19的蛋白水平与PRRSV的复制相关。根据以上试验结果，认为DDX19A参与PRRSV复制并在NLRP3介导的炎症反应中有重要的作用。

关键词：猪病蓝耳病病毒炎症反应免疫学基因复制炎性小体

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鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性及受体研究现状

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中国家禽 2014年第20期36卷 2-5页

作者：张礼洲祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白... 详细信息

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白、热休克蛋白90(c Hsp90)、整合素α4β1、Toll样受体(TLR)。本文对IBDV细胞嗜性及细胞受体相关研究进行了综述。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性受体

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基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

基于反向遗传操作的传染性法氏囊病新型重组疫苗研究

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第九届全国免疫学学术大会

作者：祁小乐高立王永强高玉龙高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病。超强毒(vvIBDV)的感染造成50%以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展。IBD疫苗目前存在问题... 详细信息

背景:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种重要免疫抑制病。超强毒(vvIBDV)的感染造成50%以上的致死率,耐过鸡呈现严重的免疫抑制,严重威胁养禽业健康发展。IBD疫苗目前存在问题:技术瓶颈是疫苗株需要通过人工盲传驯化获得,费事费力;使用误区是中等或中等偏强毒力毒株被用作疫苗,存在生物安全隐患。目的:优化基于反向遗传操作的IBD疫苗研究新型技术平台,研制高效低毒的IBD新型重组疫苗。方法:建立IBD反向遗传操作技术;研究IBDV毒力和细胞嗜性的分子基础;构建和拯救重组病毒;通过动物实验评估重组疫苗株的有效性和安全性。结果:1、建立了RNA聚合酶Ⅱ介导的IBDV新型反向遗传操作系统,比国际同类系统更高效陕捷。2、构建和拯救系列氨基酸突变病毒,证明了VP2的253、284位氨基酸突变协同决定IBDV的细胞嗜性;VP2的253、284位氯基酸是IBDV重要的毒力位点。Q253H/A284T可以使vvIBDV毒力降低,且适应体外细胞培养。3、构建了一株以弱毒疫苗株为亲本骨架、表达流行毒株主要保护性抗原的IBDV重组病毒rGtktLJVP2,该候选疫苗株抗原性与流行毒株更匹配、安全、有效。已获国家发明专利。4、重组病毒rGtHLJVP2,对鸡无致病力。在CEF细胞和SPF鸡上分别盲传15代和5代,毒力没有返强,遗传稳定性良好。已获国家"农业转基因安全证书"。5、rGtHLJVP2免疫效果良好。能100%保护同源(HLJ-0504株)和异源强毒(HuB-1)的攻击,免疫效果和中等毒力疫苗株(B87)相当。目前,正在进行系统的临床评估。结论:建立了IBD疫苗株新型培育平台,构建了一株IBDV重组疫苗株rGtHLJVP2,安全稳定,免疫效果良好,为疫苗株培育方法的升级和疫苗的更新换代奠定了坚实基础。

关键词：传染性法氏囊病(IBD) 重组疫苗反向遗传

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