检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽药杂志 2018年第8期52卷 7-11页

作者：朱庆贺张鹏宇崔红玉王观悦王爽陈曦刘力威史同瑞黑龙江省兽医科学研究所黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150000

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5... 详细信息

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5、7、9型,新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒阳性血清检测均为阴性;与PCR方法的阳性符合率为83.3%。试验表明,建立的以重组hexon蛋白为包被抗原检测FAdV-4血清抗体的ELISA方法可以用于检测FAdV-4的感染及相关流行病学调查。

关键词： 4型禽腺病毒 hexon蛋白原核表达间接ELISA

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具有免疫反应活性的猪源重组抗体的原核表达及鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 220-224页

作者：沈旦枫王睿郭佃磊霍琳琳刘永刚郭龙军王玉娥李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA... 详细信息

为制备与猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)具有反应活性的猪源化原核表达抗体(Pr Ab),本实验通过流式细胞技术,以PRRSV GP5蛋白多肽及抗猪Ig G抗体,筛选出能够与PRRSV抗原表位结合的阳性B淋巴细胞,利用RT-PCR从筛选得到的B细胞的mRNA中扩增出编码抗体重链可变区(VH)基因序列和轻链可变区(VL)基因序列,将扩增的可变区基因序列分别与本实验室前期克隆的猪源抗体轻链恒定区(CL)和重链恒定区(CH)基因序列连接后,以Linker序列将轻链和重链全长基因序列相连,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L)。将该基因克隆于原核表达载体p ET-28a中进行原核表达及纯化。Western blot鉴定结果显示,表达的重组蛋白能够被抗猪IgG抗体所识别,表明表达的重组蛋白为PrAb;经PRRSV包被的ELISA鉴定,PrAb与PRRSV弱毒株CH1R和强毒株HuN4呈阳性反应,表明所制备的PrAb为PRRSV特异性抗体。本实验为进一步制备诊断PRRS的猪源化重组抗体奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒原核表达猪源化重组抗体

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 225-228页

作者：杨婷周跃辉朱远茂宋文凤马磊薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白单克隆抗体抗原表位

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猪戊型肝炎病毒黑龙江分离株SWHLJ-BXBX全基因组序列的测定与分析

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黑龙江畜牧兽医 2017年第6期 176-178页

作者：李海王刚张交儿何希君刘永刚姜成刚王淑杰涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心哈尔滨150001

为了研究猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)黑龙江分离株SWHLJ-BXBX的全基因组序列,并对其序列特征和进化关系进行分析,试验采用RT-n PCR、5'-RACE、3'-RACE方法和Megalign、MEGA 6等生物学软件对SWHLJ-BXBX的全基因组序... 详细信息

为了研究猪戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)黑龙江分离株SWHLJ-BXBX的全基因组序列,并对其序列特征和进化关系进行分析,试验采用RT-n PCR、5'-RACE、3'-RACE方法和Megalign、MEGA 6等生物学软件对SWHLJ-BXBX的全基因组序列进行了研究。结果表明:SWHLJ-BXBX全基因组序列去除poly A后全长为7 240 bp,5'UTR有25个碱基,3'UTR全长为70 bp,ORF1编码1 707个氨基酸,ORF2编码674个氨基酸,ORF3编码114个氨基酸,进化树分析表明SWHLJBXBX属于HEVⅣd基因亚型。

关键词：猪戊型肝炎病毒(HEV) Ⅳd基因亚型序列分析全基因组测序序列特征进化树

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与自噬相关蛋白Becline 1相互作用的猪伪狂犬病毒蛋白的筛选与鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2017年第2期 14-17,287页

作者：侯琳琳孙明霞王海明汤艳东刘永刚涂亚斌姜成刚王淑杰王刚蔡雪辉东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了对与自噬相关蛋白Becline 1相互作用的猪伪狂犬病毒蛋白进行筛选和鉴定,试验进行了pull-down、Shotgun质谱分析和免疫共沉淀(Co-IP)以及激光共聚焦检测。结果表明:病毒蛋白UL36与Becline 1之间可能存在相互作用关系;UL36-1与Beclin... 详细信息

为了对与自噬相关蛋白Becline 1相互作用的猪伪狂犬病毒蛋白进行筛选和鉴定,试验进行了pull-down、Shotgun质谱分析和免疫共沉淀(Co-IP)以及激光共聚焦检测。结果表明:病毒蛋白UL36与Becline 1之间可能存在相互作用关系;UL36-1与Becline 1蛋白之间具有稳定的相互作用关系,相互作用区域位于UL36的去泛素酶区域;UL36-1与Becline 1共定位于胞浆中。说明自噬相关蛋白Becline 1与猪伪狂犬病毒蛋白UL36的去泛素酶区域存在相互作用。

关键词：猪伪狂犬病毒自噬 Becline 1 UL36 pull—down 蛋白相互作用

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1株猪源2009/H1N1流感病毒反向遗传系统的建立

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畜牧与兽医 2017年第1期49卷 61-64页

作者：许榜丰孟沙沙吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明... 详细信息

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明,R-HLJ44与亲本病毒HLJ44的核苷酸序列完全一致;二者在细胞上具有相似的增殖特性;抗原性未发生变化;分别以106TCID50的剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,结果显示R-HLJ44与亲本HLJ44在小鼠脏器中的复制滴度也基本一致。以上结果表明拯救的重组病毒保持了与亲本病毒一致的生物学特性。该病毒反向遗传系统的建立,为进一步研究H1N1亚型流感病毒的致病分子机制及新型疫苗研制等奠定了基础。

关键词：流感病毒猪 2009/H1N1 反向遗传系统

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ST细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

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中国畜牧兽医 2017年第3期44卷 667-672页

作者：王鑫石达董慧曹丽艳陈建飞时洪艳张鑫冯力东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART... 详细信息

为了筛选与猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)结构蛋白VP2相互作用的宿主蛋白,深入研究病毒入侵及致病的分子机制,本试验建立了ST细胞酵母双杂交cDNA文库。采用RNeasy Min Kit提取ST细胞的总RNA,反转录合成cDNA第一链之后,通过SMART技术合成了双链cDNA,并利用同源重组的方法,构建了ST细胞的酵母cDNA文库。结果显示,文库滴度为8.1×108 CFU/mL,插入的双链cDNA片段大小为250~1 000bp,平均大小约为500bp,文库的重组率为96%。此文库可用于筛选与病毒相互作用的ST细胞宿主蛋白,为进一步阐明病毒的致病机制奠定了基础。

关键词：猪细小病毒酵母双杂交 ST细胞 cDNA文库

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上海市某奶牛场一起破伤风疫情的紧急流行病学调查

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中国动物检疫 2018年第6期35卷 1-4,7页

作者：杨德全陈冈杨显超鞠厚斌沈莉萍卢军徐锋周锦萍刘春国王靖飞上海市动物疫病预防控制中心上海201103 金山区动物疫病预防控制中心上海201500 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2017年7月,上海市金山区某奶牛场出现未知原因的奶牛死亡病例。为查明疫病发生原因,分析可能的风险因素,以便及时提出防控建议,采用现场流行病学调查和实验室检测相结合的方式,对该起疫情进行了调查。调查结果显示:该奶牛场陆续有10头... 详细信息

2017年7月,上海市金山区某奶牛场出现未知原因的奶牛死亡病例。为查明疫病发生原因,分析可能的风险因素,以便及时提出防控建议,采用现场流行病学调查和实验室检测相结合的方式,对该起疫情进行了调查。调查结果显示:该奶牛场陆续有10头奶牛出现牙关紧闭、流涎、全身肌肉紧张等症状,袭击率为4.7%(10/211);6头奶牛死亡,死亡率为2.8%(6/211)。根据发病情况和"木马样"特异性症状,结合有断尾伤口以及破伤风抗毒素干预有效,确定患病奶牛为断尾引起的破伤风感染。追溯调查发现:牛场牛粪清理不及时,牛舍消毒频次低,再加上发病前及发病期间适宜的气候条件,导致牛舍环境中的破伤风梭菌大量繁殖;而奶牛断尾前未严格消毒,以及高温、断尾对奶牛产生了应激,使其抵抗力下降,导致断尾奶牛感染了破伤风梭菌。通过对发病奶牛注射破伤风抗毒素,同时加强生物安全,改善环境卫生,减少奶牛应激反应,最终疫情得到了有效控制。

关键词：破伤风紧急流行病学调查奶牛断尾伤口

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鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的截短表达及其兔抗血清制备

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江苏农业科学 2018年第17期46卷 175-177页

作者：孙芬芬高玉龙潘伟王笑梅徐州医科大学形态学实验教学中心江苏徐州221004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004

通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a... 详细信息

通过制备原核表达鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白(VP1),以进行抗VP1蛋白兔源血清制备。首先以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增N末端截短129个氨基酸的VP1基因片段(VP1Nd129),经EcoRⅠ/SalⅠ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的p ET28a(+)载体连接,获得阳性重组子p ET-28a-VP1Nd129,将其转化入*** BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,表达出VP1Nd129蛋白;后者通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,用间接免疫荧光试验和Western blot试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。结果显示,CAV VP1Nd129基因在大肠杆菌中正确表达,并主要以包涵体形式存在;纯化后免疫兔获得的抗血清可与真核细胞表达的全长VP1蛋白特异性反应。表明本试验成功对VP1蛋白进行截短表达,制备的兔抗血清反应性好,为深入开展CIAV的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白原核表达纯化兔抗血清

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2015—2016年湖南省长沙市活禽批发市场禽流感流行病学调查

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中国动物检疫 2018年第2期35卷 5-8页

作者：黄建龙王昌建邓国华何世成宁华杰张朝阳林源湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市动物疫病预防控制中心湖南长沙410013

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3... 详细信息

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3、H5、H6、H7、H9和H10等6种亚型禽流感病毒。其中,H9和H5亚型禽流感病原阳性率较高,分别为8.7%和3.8%。调查结果表明,长沙市活禽批发市场中的禽流感病毒污染面较广。建议加强活禽市场管理,特别要做好市场的清洗消毒工作。

关键词：活禽批发市场禽流感病毒分离流行病学调查长沙市

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