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第四十三届养猪产业博览会暨研讨会

作者：危艳武张志慧黄立平刘建波吴洪丽刘丹李胜斌王一平张辉夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和7... 详细信息

从临床呼吸道疾病的患猪肺脏分离到一株猪鼻支原体(Mhr),命名为Mhr-DL株.对该菌株16S rna基因序列分析证实,它与GenBank下载的Mhr(AB680688)、猪肺炎支原体(Mhp:NR_074745)和猪滑液支原体(My:KC512403)的同源性分别为99.3％、92.8％和74.0％.取Mhr-DL株培养物(1.8×109CCU/mL)经腹腔和气管途径接种SPF小型巴马猪,临床症状表现为精神沉郁、粪便干燥、食欲不振、结膜炎、体温高达41.6℃;剖检病理表现为肺脏、肝脏、脾脏等器官纤维渗出,淋巴结充血肿胀、胸膜炎、腹膜炎、肺脏呈虾肉样病变.菌株核酸检测发现,肺脏和扁桃体检出率最高;组织病理表现为间质性肺炎,淋巴细胞增生、坏死、崩解,肾毛细血管淤血,小肠固有层大量嗜酸性粒细胞浸润、肠绒毛结构不完整,心脏小血管淤血,脾白髓内淋巴细胞增生.本研究获得的Mhr-DL菌株,为开展Mhr感染引起的疫病防控技术的研究奠定了基础.

关键词：猪鼻支原体分离鉴定工艺巴马猪致病性

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临床条件下PCV2灭活苗仔猪免疫程序优化试验

临床条件下PCV2灭活苗仔猪免疫程序优化试验

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第四十三届养猪产业博览会暨研讨会

作者：张志慧危艳武黄立平吴洪丽刘丹夏伟刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序.在临床条件下,从试验猪场中选取2～4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头.采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清... 详细信息

为了比较PCV2灭活苗(LG株)不同免疫程序对临床仔猪的免疫效果,本研究依据不同的免疫时间、免疫剂量和免疫次数设计了10组免疫程序.在临床条件下,从试验猪场中选取2～4周龄仔猪50头,随机分组10组,每组5头.采用PCR和IPMA检测疫苗免疫血清中病毒核酸和抗体消长情况.检测抗体结果显示,对于疫苗单剂量一次免疫组,免疫后28d,4周龄仔猪PCV2抗体效价增长显著(p＜0.05);对于疫苗加强免疫组,免疫后28d各组抗体效价均显著提高(p＜0.05).病毒核酸检测显示,疫苗加强免疫组能够更好地清除病毒血症,4周龄仔猪疫苗单剂量免疫组效果次之.综合病毒核酸和抗体产生消长规律,推荐2种免疫程序:加强免疫:首免3周龄单剂量免疫,间隔3w加强免疫;一次性免疫:4周龄实施单剂量疫苗免疫.此外,仔猪疫苗免疫时母源抗体效价对疫苗免疫的影响试验表明,在低水平的母源抗体实施疫苗免疫时,免疫后产生的抗体水平较高,而高水平的母源抗体免疫时,仔猪抗体水平无明显变化.

关键词：仔猪养殖猪圆环病毒2型灭火疫苗免疫程序母源抗体

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细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株致病性变化的研究

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畜牧兽医学报 2016年第1期47卷 135-140页

作者：邵周伍林李晨曦刘明张青山张云中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

旨在观察细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株对易感雏鹅的致病性变化。将鹅细小病毒(GPV)YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)上进行交替传代培养,病毒在细胞上传至第12代时,开始出现细胞病变;间接免疫荧光试验(IFA)检测发现,... 详细信息

旨在观察细胞传代致弱的鹅细小病毒YG毒株对易感雏鹅的致病性变化。将鹅细小病毒(GPV)YG株在鹅胚成纤维细胞(GEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF)上进行交替传代培养,病毒在细胞上传至第12代时,开始出现细胞病变;间接免疫荧光试验(IFA)检测发现,随着病毒感染时间的延长,感染细胞数量呈现先增加随后减少的变化趋势,感染后96h阳性细胞数量最多;病毒的滴度随着传代次数的增加而逐渐升高;当病毒传至第50代时,细胞适应毒株毒价为106.5 TCID50·mL-1;雏鹅致病性试验结果显示,第50代病毒毒力明显减弱。细胞传代致弱的GPV YG株所感染雏鹅死亡和发病率降低,且死亡雏鹅无鹅细小病毒病的特征性病变及临床表现。

关键词：鹅细小病毒病毒致弱细胞适应致病性

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猪流行性乙型脑炎病毒纳米PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2017年第3期37卷 471-474页

作者：柴瑞影华荣虹袁万哲孙继国河北农业大学动物医学院河北保定071001 河北省兽医生物技术工程技术研究中心河北保定071001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 农业部动物疫病病原生物学华北区观测实验站河北保定071001

根据猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因的保守区域设计1对扩增270bp片段的特异性检测引物,将纳米金颗粒添加到PCR反应体系中,同时优化反应条件,建立了高效、灵敏的纳米PCR检测方法。采用该方法灵敏度可达3.26×10~2拷贝/μL,普通PCR... 详细信息

根据猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)E基因的保守区域设计1对扩增270bp片段的特异性检测引物,将纳米金颗粒添加到PCR反应体系中,同时优化反应条件,建立了高效、灵敏的纳米PCR检测方法。采用该方法灵敏度可达3.26×10~2拷贝/μL,普通PCR方法仅为3.26×10~4拷贝/μL,且与其他病毒没有交叉感染。试验结果表明,该纳米PCR检测方法不仅特异性好,而且其敏感性是普通PCR检测方法的100倍。采用纳米PCR方法和普通PCR方法对临床送检的32份样品进行检测,检测结果纳米PCR检出2份阳性样品,普通PCR检测均为阴性。

关键词：猪流行性乙型脑炎病毒纳米PCR E基因

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去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达

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实验动物科学 2017年第2期34卷 16-20,25页

作者：彭蔚宇王丽廷王兴童杨柳孟兴陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 山西农业大学动物科技学院太谷030801

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-... 详细信息

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克隆入含有报告基因e GFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M。分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位。结果通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euchIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低。结论去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达。

关键词：鸡白细胞介素-10 信号肽真核表达 CHO-K1细胞

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2009年-2014年我国H3N2亚型禽流感病毒生物学特性研究

2009年-2014年我国H3N2亚型禽流感病毒生物学特性研究

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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议

作者：关立峥张芳肖丽崔鹏飞胡永浩陈化兰邓国华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流... 详细信息

H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流行地区广,病毒分离阳性率有逐年增多的趋势.为了解近年来我国H3N2亚型禽流感病毒的流行情况,评估该亚型禽流感病毒对哺乳动物感染和传播的潜在风险,对2009-2014年间在我国南方省份的家禽交易市场、养殖场和家禽屠宰场的家禽群体中采集拭子样品,采集到的样品接种鸡胚后进行病毒分离,对不同群体分离到的H3亚型禽流感病毒进行病毒表面基因的序列测定和分析基础上,选取26株代表性病毒进行病毒的全基因组序列分析、抗原性分析、小鼠感染性和致病性实验、受体结合特异性分析以及病毒在豚鼠中的复制能力、直接接触传播和呼吸道飞沫传播能力的检测.

关键词：禽流感病毒全基因组序列抗原性感染性致病性

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上海市一起蛋鸡心包积水-肝炎综合征的紧急流行病学调查

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中国动物检疫 2017年第9期34卷 7-10页

作者：杨德全朱九超齐新永鞠厚斌周锦萍刘春国王靖飞上海市动物疫病预防控制中心上海201103 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

2016年7月1日,上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象,多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况,分析导致疫病发生的风险因素,以便及时提出行之有效的防控建议,通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查... 详细信息

2016年7月1日,上海市某蛋鸡场62日龄蛋鸡出现发病和死亡现象,多次用抗生素治疗无效。为详细了解鸡场发病情况,分析导致疫病发生的风险因素,以便及时提出行之有效的防控建议,通过询问、现场调查和实验室诊断等方式开展了紧急流行病学调查;采用描述性流行病学方法,对疫情特点、发病风险因素进行了分析。实验室诊断结果显示,Ⅰ群血清4型腺病毒核酸阳性。调查发现:发病的前一周,该地气温波动剧烈,造成鸡只应激;鸡场生物安全体系不健全,无针对车辆和人员的消毒措施。结合临床症状、病理剖检和实验室诊断结果,确诊该鸡场暴发了心包积水-肝炎综合征,是由Ⅰ群血清4型腺病毒引起的。通过注射特异性卵黄抗体及对症治疗,对可能引起此次暴发的风险因素进行控制,疫情得到了有效控制。

关键词：蛋鸡心包积水-肝炎综合征 .群血清4型腺病毒暴发调查风险因素

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高寒地区奶牛乳房炎凝固酶阴性致病葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

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中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 848-851页

作者：郝俊玺董志民王秋东华欣祝瑶杨亲鄢明华刘思国张万江内蒙古农业大学内蒙古呼和浩特010018 天津市畜牧兽医研究所天津西青300381 天津市畜禽健康养殖技术工程中心天津西青300381 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型... 详细信息

为调查高寒牧区引起奶牛乳房炎的凝固酶阴性致病葡萄球菌流行现状及耐药情况,本研究对呼伦贝尔地区3个规模化奶牛养殖场采用加州乳房炎测试法(CMT)进行高体细胞牛脂病检测,并采集330份牛奶样品,应用PCR方法、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和药敏试验等对样品中的葡萄球菌进行分离鉴定和耐药性分析。结果显示,该地区隐性乳房炎发病率达47.8%,共分离和鉴定出9种葡萄球菌60株(34.5%);60株葡萄球菌分为41个克隆谱型;60株葡萄球菌对青霉素和林可霉素的耐药率较高,分别为40.0%(24/60)和50.0%(30/60),表明这两种药是治疗乳房炎常用药物。本研究为高寒地区致病葡萄球菌引起的奶牛乳房炎临床合理用药及对病原菌的防控提供实验依据和指导。

关键词：葡萄球菌乳房炎药敏试验 PFGE分型

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鸡传染性贫血病毒VP2基因的原核表达及兔抗血清的制备

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黑龙江畜牧兽医 2017年第9期 67-70,291页

作者：孙芬芬高玉龙潘伟王笑梅徐州医科大学形态学实验教学中心江苏徐州221004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病科技创新团队哈尔滨150001 徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室/江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化*** BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达... 详细信息

为了用大肠杆菌原核表达系统表达鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制备其兔抗血清,试验以CIAV M9905株基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因,与p ET28a(+)载体连接后转化DH5α获得阳性重组子,将其转化*** BL21(DE3)菌,IPTG诱导表达出His-VP2重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后免疫新西兰白兔制备兔抗血清,采用IFA和Western-blot检测该血清的特异性,ELISA测定其效价。结果表明:重组His-VP2融合蛋白的分子质量约为36 ku,以包涵体形式存在。制备的兔抗VP2血清效价在1∶6 400以上,可特异性结合真核表达的VP2蛋白,表明其反应原性较好。说明试验成功表达VP2蛋白,并制备出兔抗血清,可用于该蛋白与病毒其他蛋白之间的相互作用的进一步研究。

关键词：鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白原核表达纯化兔抗血清

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编码基因完整的伪狂犬病毒细菌人工染色体的构建

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黑龙江畜牧兽医 2016年第12期 1-4,9,295页

作者：陈利红王靖飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

为了构建包含伪狂犬病毒(PRV)完整编码基因的细菌人工染色体(BAC),首先对PRV基因组进行了分析,确定了单一酶切位点AcclⅠ,用PCR方法扩增出上下游同源臂、EGFP表达盒并同BAC质粒一起克隆到p UC_(18)质粒,获得转移载体;将经限制性内切酶A... 详细信息

为了构建包含伪狂犬病毒(PRV)完整编码基因的细菌人工染色体(BAC),首先对PRV基因组进行了分析,确定了单一酶切位点AcclⅠ,用PCR方法扩增出上下游同源臂、EGFP表达盒并同BAC质粒一起克隆到p UC_(18)质粒,获得转移载体;将经限制性内切酶AcclⅠ处理过的病毒全基因组连同转移载体共同转染BHK21细胞,获得重组病毒;利用PCR检测、电镜观察及生长曲线测定对野毒与重组毒的基本特性进行了比较。结果表明:重组病毒可以稳定地表达绿色荧光,BAC在传代过程中能够稳定存在;重组病毒在电镜下的形态与野毒未见差异,其生长曲线也基本同野毒吻合。说明成功构建的编码基因完整的PRV细菌人工染色体可用于该病毒的结构生物学及致病机理研究。

关键词：伪狂犬病毒(PRV) 细菌人工染色体(BAC) 完整结构基因组重组病毒 EGFP

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