检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1034-1038页

作者：冯笑艳包媛玲于蒙蒙孟令宅刘鹏王素艳李欣翼张卓张艳萍刘长军王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 扬州大学、江苏动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

为研究B亚型禽偏肺病毒(aMPV)对商品肉鸡的致病性,本实验将前期分离的鸡源B亚型aMPV LN16株通过滴鼻的方式感染21日龄商品肉鸡,感染后1 d~7 d观察临床症状,可见感染组肉鸡出现了流鼻涕、鼻痂等临床症状,发病率达100%,空白组肉鸡未出现... 详细信息

为研究B亚型禽偏肺病毒(aMPV)对商品肉鸡的致病性,本实验将前期分离的鸡源B亚型aMPV LN16株通过滴鼻的方式感染21日龄商品肉鸡,感染后1 d~7 d观察临床症状,可见感染组肉鸡出现了流鼻涕、鼻痂等临床症状,发病率达100%,空白组肉鸡未出现任何临床症状。感染后1 d~7 d采集各组肉鸡鼻腔拭子,采用荧光定量PCR检测肉鸡的排毒情况,结果显示,感染组肉鸡的排毒期为感染后1 d~6 d,感染后第3 d达到排毒高峰期(6.31×10^(4)拷贝/200μL),空白组肉鸡未检测到排毒。感染后第4 d采集鸡鼻甲骨、肺脏、气管、哈氏腺,利用荧光定量RT-PCR检测病毒的组织分布,结果显示可以在肉鸡的鼻甲骨、气管、喉头、哈氏腺中检测到该病毒,其中鼻甲骨的病毒拷贝数最高,达3.53×10^(4)拷贝/0.1 g,而空白组鸡未检测到病毒。感染后7 d~21 d内每7 d采集各组鸡血清,采用ELISA方法检测抗体水平,结果显示,感染后第7 d血清抗体全部转阳,且血清抗体效价随着时间的延长呈上升趋势,空白组鸡未检测到抗体。感染后第9 d取各组鸡鼻甲骨、肺脏和气管制作病理切片,观察各组鸡的组织病变,结果显示,商品肉鸡感染B亚型aMPV后上呼吸道出现不同程度的病理损伤,空白组鸡未见异常。本研究结果证实B亚型aMPV对商品肉鸡具有较强的致病性,为商品肉鸡养殖场鸡aMPV病的诊断及防控提供了重要参考依据。

关键词： B亚型禽偏肺病毒肉鸡致病性

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基于病毒载体的非洲猪瘟疫苗研究进展及展望

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中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 903-909页

作者：张新王秋霞李文霞袁梦淇赵小天杨晓柯刘兴友李永锋仇华吉河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 新乡学院河南新乡453003 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染引起的一种急性、高度传染性、致死性动物传染病[1],临床上以高热、皮肤发绀和脏器广泛性出血为主要特征[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染引起的一种急性、高度传染性、致死性动物传染病[1],临床上以高热、皮肤发绀和脏器广泛性出血为主要特征[2]。世界动物卫生组织(WOAH)将ASF列为法定报告动物疫病,我国将其列为一类动物疫病[3]。ASFV可感染所有品种和年龄的家猪和野猪,持续感染的野猪和软蜱是家猪感染ASFV的重要传染源。

关键词：高度传染性世界动物卫生组织动物传染病一类动物疫病猪瘟疫苗非洲猪瘟法定报告软蜱

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非洲猪瘟疫苗研究进展及其难点和突破点

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中国预防兽医学报 2021年第2期43卷 219-225页

作者：马玉腾韩玉莹金鑫李永锋仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 延边大学农学院吉林延吉133000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种烈性传染病。该病发病快、病程短,病死率可高达100%[1]。ASF对养猪业危害极大,是世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,OIE)规定须申报... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由ASF病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种烈性传染病。该病发病快、病程短,病死率可高达100%[1]。ASF对养猪业危害极大,是世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,OIE)规定须申报的动物疫病。其传播方式复杂多样,可在家猪-野猪、野猪-软蜱-家猪间循环传播,并可通过直接、间接接触或短距离气溶胶在猪群中传播[2-6]。

关键词：世界动物卫生组织烈性传染病猪瘟疫苗非洲猪瘟间接接触动物疫病养猪业软蜱

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基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 307-313页

作者：张佳琦王亚玉郭兴林跃智廖化新王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632

马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒囊膜蛋白单个B淋巴细胞扩增单克隆抗体

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消毒技术在非洲猪瘟防控中的应用现状与问题

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中国农业科技导报 2021年第4期23卷 93-102页

作者：王巍罗玉子张丽马吉飞仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗,我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染家猪和野猪引起的一种急性出血性烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定必须上报的动物疫病。由于目前还没有针对非洲猪瘟的有效疫苗,我国主要采取检疫、扑杀以及严格的生物安全措施进行防控。消毒是生物安全防控ASF的重要手段。目前针对ASFV的灭活方式多种多样,但其灭活效果还有待进一步检验。当前的ASF分子病原学诊断技术无法确定样品的感染性,因此不能用于准确评价消毒剂对病原的杀灭效果。对ASFV的消毒技术及其作用机理、杀灭效果、优缺点、注意事项等进行了总结,并对当前消毒技术存在的问题以及检测技术的局限性进行了分析,在此基础上对ASFV的消毒剂评价技术进行了探讨,旨在为我国ASF检测技术的创新与完善以及现地防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒灭活技术诊断技术

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抗低温消毒剂“抗冻消-30”对非洲猪瘟病毒的杀灭效果

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中国预防兽医学报 2021年第9期43卷 972-977,1007页

作者：祁梦南潘力孙元殷生章仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 海南育奇药业有限公司海南定安571200

为评估抗低温消毒剂"抗冻消-30"对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果,本研究通过观察不同稀释度的"抗冻消-30"对细胞形态的影响,并计算相应细胞的活性确定该消毒剂对细胞的安全浓度。结果显示,"抗冻消-30"对... 详细信息

为评估抗低温消毒剂"抗冻消-30"对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果,本研究通过观察不同稀释度的"抗冻消-30"对细胞形态的影响,并计算相应细胞的活性确定该消毒剂对细胞的安全浓度。结果显示,"抗冻消-30"对细胞的安全浓度为≤1 g/L,细胞存活率高于95%,且形态正常。将不同浓度的ASFV报告病毒(rASFV-HLJ/2018-EGFP株)与不同浓度"抗冻消-30"在不同温度下作用30 min后,分别感染HEK293T细胞,通过倒置荧光显微镜观察,评估在不同温度下"抗冻消-30"对ASFV报告病毒的杀灭效果;将不同浓度的ASFV亲本病毒(HLJ/2018株)与不同浓度"抗冻消-30"在-30℃作用30 min后,分别感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs),一定时间后加入猪红细胞,利用倒置显微镜观察红细胞吸附现象,评估-30℃条件下,"抗冻消-30"对ASFV亲本病毒的杀灭效果。结果显示,常温和4℃时,400 g/L、160 g/L、80 g/L、40 g/L、8 g/L的"抗冻消-30"可完全杀灭106TCID50及以下浓度、105TCID50及以下浓度、1104TCID50及以下浓度、104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度的ASFV报告病毒;-20℃时,上述浓度的"抗冻消-30"可完全杀灭105TCID50及以下浓度、1104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、102TCID50 ASFV报告病毒;-30℃和-40℃时,上述浓度的"抗冻消-30"可完全杀灭1104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、102TCID50及以下浓度、102TCID50 ASFV报告病毒。-30℃时,400 g/L、160 g/L、80 g/L、40 g/L的"抗冻消-30"可完全杀灭1104TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、103TCID50及以下浓度、102TCID50及以下浓度的ASFV亲本病毒。本研究在细胞水平上系统评价了该消毒剂对ASFV报告病毒和亲本病毒的杀灭情况,表明"抗冻消-30"在常温和低温条件下对ASFV均具有良好的杀灭效果,可以作为防控ASF的有效消毒剂。

关键词：抗低温消毒剂抗冻消-30 非洲猪瘟病毒杀灭效果

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高增殖猪流感重组病毒GX1659/PR8的制备与鉴定

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1103-1107页

作者：宋祖晨孟飞张丹丹王飞飞刘雅茹陈艳乔传玲陈化兰杨焕良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种... 详细信息

为构建一株具有高复制能力的流感病毒疫苗株,本研究利用反向遗传技术以PR8的6个内部基因为骨架,以一株H3N2亚型低致病力猪流感病毒(SIV)GX1659株的HA和NA表面基因为供体,构建了pBD-GX1659-HA和pBD-GX1659-NA重组质粒,转染293T细胞并接种SPF胚,经血凝试验、测序筛选获得了一株重组病毒GX1659/PR8。该重组病毒在鸡胚传20代,血凝价均能达到8 log2以上。每5代病毒的全基因组经PCR和测序鉴定,结果显示,PCR产物均无任何缺失或突变,表明GX1659/PR8具有遗传稳定性。分别利用100 EID_(50)剂量的GX1659和GX1659/PR8感染鸡胚,在不同时间测定鸡胚尿囊液的血凝效价和EID_(50),绘制其生长曲线。结果显示,GX1659和GX1659/PR8分别在接种后60 h和48 h时血凝效价达到峰值,GX1659/PR8效价滴度明显高于亲本病毒GX1659。利用亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8的抗原和阳性血清进行交叉HI试验,测定HI效价及交叉HI效价并对抗原性进行分析。结果显示,亲本病毒GX1659与重组病毒GX1659/PR8抗原性无明显差异。本研究拯救出一株具有稳定遗传性和高增殖性能的H3亚型重组病毒GX1659/PR8,为H3N2亚型流感病毒疫苗株的构建奠定了重要基础。

关键词： H3N2流感病毒 PR8 反向遗传技术生物学特性疫苗株

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流感病毒PA蛋白与宿主SSR4蛋白的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1029-1033页

作者：王倩李俊平梁立滨赵玉辉温霞孔凡迪王广文石文军李奇兵姜丽陈化兰李呈军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开发实验室黑龙江哈尔滨150069

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病... 详细信息

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病毒PA蛋白可能存在相互作用的宿主因子,其中之一为Signal sequence receptor subunit 4(SSR4)。为研究流感病毒PA蛋白与宿主蛋白SSR4的相互作用,本研究采用酵母回交试验验证二者之间是否存在相互作用,结果显示PA蛋白与SSR4之间存在相互作用;在真核细胞中利用免疫共沉淀(Co-IP)试验检测,结果进一步证实了PA蛋白与SSR4蛋白之间的相互作用。利用慢病毒包装系统构建SSR4蛋白的过表达细胞系,并感染病毒后进行噬斑滴定,结果显示SSR4过表达可以抑制流感病毒的复制。瞬时转染过表达SSR4后再转染流感病毒聚合酶复合体表达质粒及荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测SSR4蛋白对聚合酶活性的影响,结果显示SSR4过表达后可以显著抑制流感病毒的聚合酶活性。本研究首次证实SSR4可以抑制流感病毒复制,并可使流感病毒RNP聚合酶活性显著降低,上述结果进一步完善了PA蛋白与宿主因子的互作网络,丰富了对宿主因子参与流感病毒复制周期的认识。

关键词：流感病毒 PA蛋白 SSR4蛋白相互作用

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非洲猪瘟病毒A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位分析

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1525-1532页

作者：孙茂文周萍萍王涛李永锋潘力韩玉孙元杨玉莹仇华吉长江大学动物科学学院湖北荆州434023 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位,本研究构建了原核表达质粒pGEX-6p-1-A137R,表达与纯化了A137R蛋白,并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。经间接免疫荧光试验(IFA)分析,抗体效价达1∶25600;Western-blotting... 详细信息

为了探究非洲猪瘟病毒(ASFV)A137R蛋白的表达动力学与亚细胞定位,本研究构建了原核表达质粒pGEX-6p-1-A137R,表达与纯化了A137R蛋白,并制备了针对该蛋白的多克隆抗体。经间接免疫荧光试验(IFA)分析,抗体效价达1∶25600;Western-blotting和IFA证实,该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。利用该抗体分析了ASFV感染原代猪肺泡巨噬细胞中A137R蛋白的表达动力学及其亚细胞定位,发现A137R蛋白为晚期蛋白,主要定位于细胞质,且与ASFV的结构蛋白p72共定位。本研究为进一步解析ASFV A137R蛋白的功能奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 A137R蛋白原核表达多克隆抗体

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猪内源性逆转录病毒在3种不同品系猪中的分布及序列特征研究

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1141-1148,1168页

作者：冯天悦 Kamal Shah 张文立付利芝李昌文王玉娥陈洪岩东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069 重庆市畜牧科学研究院兽医兽药研究所重庆402460

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PE... 详细信息

为研究猪内源性逆转录病毒(PERV)在不同猪种中的分布情况、序列结构、遗传变异、表达特性等特征,本研究选取大白猪、荣昌猪、五指山小型猪3种常见猪种为研究对象,分别设计特异性引物,检测各猪种肺组织中PERV 3种亚型(PERV-A、PERV-B、PERV-C)的分布情况。结果显示,PERV在3种猪种中均有分布,其中PERV-A分布最广泛。进一步分段扩增3种猪的PERV-A全基因组序列并测序分析。全基因组序列进化树与囊膜(env)基因进化树分析均显示,东北地区的大白猪与荣昌猪PERV-A归为同一分支,亲缘关系较近;对测序结果进行生物信息学分析和蛋白二级结构预测,结果显示,PERV-A Gag蛋白和Pol蛋白的变异程度较大,有多种结构,但Env蛋白保守性较高,结构较为单一。采用荧光定量PCR法检测SPF大白猪不同组织中的PERV-A,结果显示从SPF大白猪心、肝、脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结等7种组织中均检测出PERV-A,且在扁桃体等免疫器官组织中的转录水平最高。本研究共获得了5条不同猪种的PERV-A全基因组序列,首次鉴定了荣昌猪PERV全基因组序列,提示东北地区大白猪的引种来源可能与韩国猪种存在一定同源性,且五指山小型猪与荣昌猪、大白猪亲缘关系较远,有助于PERV分子特性的研究,并为评估不同猪种PERV在异种移植中的安全性并筛选合适猪种提供参考。

关键词：猪内源性逆转录病毒序列分析囊膜基因遗传进化分析

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