检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2020年第6期50卷 679-688页

作者：宋文平李雪峰秦亚萍刘胜旺李慧昕中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

自2015年我国鸡群大面积暴发肝炎-心包积水综合征以来,我国鸡群鸡腺病毒流行呈现多血清型的复杂情况,甚至同一鸡群有多种血清型鸡腺病毒同时存在,其中鸡腺病毒血清4型(FAdV-4)对鸡的致病性最强。为了解FAdV-4衣壳蛋白Hexon蛋白与其他血... 详细信息

自2015年我国鸡群大面积暴发肝炎-心包积水综合征以来,我国鸡群鸡腺病毒流行呈现多血清型的复杂情况,甚至同一鸡群有多种血清型鸡腺病毒同时存在,其中鸡腺病毒血清4型(FAdV-4)对鸡的致病性最强。为了解FAdV-4衣壳蛋白Hexon蛋白与其他血清型鸡腺病毒抗体之间的交叉反应性,本研究将FAdV-4 HN/151025毒株的Hexon基因进行分段表达,表达蛋白分别位于CH1(1~370 aa)、CH2(371~671aa)和CH3(672~937 aa)片段。将FAdV-4 HN/151025毒株的Hexon基因的3段表达产物分别与FAdV-4、FAdV-1、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11型抗血清进行Western-blot反应。结果显示,FAdV-4 Hexon蛋白与不同血清型抗体之间均有交叉反应,但不同片段的交叉反应强度有所差异。FAdV-1型血清可与FAdV-4Hexon蛋白CH1和CH2片段发生反应,说明FAdV-4 Hexon蛋白的1~671 aa与FAdV-1型血清有交叉反应。FAdV-8a和FAdV-8b型血清仅与FAdV-4 Hexon蛋白CH2片段发生反应,说明FAdV-8a和FAdV-8b型血清与FAdV-4 Hexon蛋白的交叉反应区域在371~671 aa内。FAdV-11型血清可与FAdV-4 Hexon蛋白的3个片段发生反应,提示FAdV-11与FAdV-4型之间有交叉保护。血清4型FAdV的Hexon蛋白与不同血清型FAdV抗体间的交叉反应及其主要反应区域的研究,将对不同血清型FAdV疫苗的研制及不同血清型FAdV鉴别诊断提供依据。

关键词：鸡腺病毒血清4型 Hexon蛋白交叉反应

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弓形虫RH株感染比格犬动物模型的建立

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实验动物科学 2022年第3期39卷 6-10,32页

作者：问婉欣陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室国家禽类实验动物资源库哈尔滨150069

目的建立实验用犬人工感染人源强毒力型弓形虫的发病模型。方法将3只76日龄人工哺乳、正压隔离器内生长的实验用比格犬腹腔注射1.5×10^(7)个RH株速殖子,每日2次检测直肠体温、采集口腔拭子、直肠拭子,感染8 d后(8 dpi)安乐死所有... 详细信息

目的建立实验用犬人工感染人源强毒力型弓形虫的发病模型。方法将3只76日龄人工哺乳、正压隔离器内生长的实验用比格犬腹腔注射1.5×10^(7)个RH株速殖子,每日2次检测直肠体温、采集口腔拭子、直肠拭子,感染8 d后(8 dpi)安乐死所有动物。利用PCR检测拭子和血液中的弓形虫B1基因,利用荧光定量法检测8 dpi犬主要组织脏器中弓形虫529 bp重复片段的拷贝数,并对主要脏器进行组织病理学检测。结果结果表明3只实验犬在4~5 dpi均出现了一过性体温升高,轻微腹泻;2~6 dpi的咽拭子或肛拭子中能检测到弓形虫B1基因的核酸,且肛拭子阳性率高于咽拭子;8 dpi剖检后,均产生较多腹水;肝组织均出现明显的炎性变化;盲肠和肝中的弓形虫529 bp片段的核酸拷贝数最高。结论利用SPF级比格犬腹腔接种弓形虫RH株,主要引起一过性体温升高和短时腹泻,可导致肝组织变性和坏死,发病模型较温和。

关键词：刚地弓形虫比格犬发病模型

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中国西部和北部边境4省区牛支原体血清流行病学调查及分析

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 717-721页

作者：李媛闫磊刘桐辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130018

为了解我国边境地区牛支原体的流行情况,本研究利用间接ELISA对2017年~2018年间收集自我国西部和北部4个省区的8 832份临床健康牛血清样品进行了牛支原体血清抗体的检测,并从地区、年份、季节、牛的品种及不同生长阶段牛对结果做了统计... 详细信息

为了解我国边境地区牛支原体的流行情况,本研究利用间接ELISA对2017年~2018年间收集自我国西部和北部4个省区的8 832份临床健康牛血清样品进行了牛支原体血清抗体的检测,并从地区、年份、季节、牛的品种及不同生长阶段牛对结果做了统计分析。结果显示,两年各地牛支原体血清抗体阳性率平均为8.37%(396/4 416,2017)、15.67%(760/4 416,2018),其中两年阳性率最高的省份均为云南(15.76%2017,36.32%2018),其次依次是内蒙古(9.15%2017,18.3%2018)、新疆(8.96%2017,12.22%2018)、西藏(1.99%2017,1.99%2018)。对检测数据按季节分析结果显示,春季牛支原体抗体阳性率最高,达18.31%(809/4 416),高于夏季的7.86%(347/4 416)。对检测数据从牛的品种因素分析显示,黄牛和奶牛血清抗体阳性率较高,分别为13.3%(183/1 375)和15.6%(159/1 021),显著高于水牛的3.85%(20/520)和牦牛的1.99%(22/1 104)(p<0.01)。从不同生长阶段牛的分析显示,与青年牛和成年牛相比较,犊牛牛支原体抗体的阳性率更高为19.90%(195/980)(p<0.01),犊牛对牛支原体更易感。本研究结果表明这几个地区均存在牛支原体抗体阳性牛,且2018年比2017年牛血清抗体阳性率大幅度增加(p<0.01)。本研究首次检测并分析了我国北部和西部边境地区牛支原体的血清流行病学状况,为明确牛支原体在我国的流行状况及制定有效防治措施提供了参考依据。

关键词：牛支原体抗体水平调查与分析 ELISA

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牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白的间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 252-257页

作者：陈瑞红林俊杨立新杨木娇朱远茂薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白... 详细信息

为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立了检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示,该方法与BVDV阳性血清反应呈阳性,而与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒等常见病原的阳性血清无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示本实验建立的间接ELISA方法在阳性血清11280倍稀释时检测结果仍呈阳性,而病毒中和试验结果显示该阳性血清稀释度在1512时检测结果就已为阴性,表明该方法的敏感性较高。重复性试验结果显示批内批间变异系数均小于10%,表明该方法重复性较好。采用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测90份牛血清,结果显示二者的符合率为95%。利用本研究建立的间接ELISA方法对188份采自国内两个不同地区的牛血清样品进行了检测,检出BVDV阳性血清162份,阳性血清检出率为86.2%。本研究建立的检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法可用于国内BVDV的血清流行病学调查,为相关疫病的防控提供技术支持。

关键词：牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白间接ELISA

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中国部分地区鸡传染性贫血流行病学调查及病原分离鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 760-765页

作者：李岳闫娜娜刘爱晶兰兴鸽杨搏刘长军高玉龙高宏雷祁小乐崔红玉高立李凯潘青王永强张艳萍王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为了调查近年来鸡传染性贫血病(CIA)在我国发病鸡群中的流行特点、分布及其危害,本研究于2016年1月~2019年9月,从黑龙江、北京、山东等13个省市的381个疑似CIA发病鸡群中采集肝脏样品1677份,PCR检出鸡传染性贫血病毒(CAV)阳性样品共242... 详细信息

为了调查近年来鸡传染性贫血病(CIA)在我国发病鸡群中的流行特点、分布及其危害,本研究于2016年1月~2019年9月,从黑龙江、北京、山东等13个省市的381个疑似CIA发病鸡群中采集肝脏样品1677份,PCR检出鸡传染性贫血病毒(CAV)阳性样品共242份,分布于85个鸡群,阳性样品检出率为14.43%(242/1677),阳性鸡群率为22.31%(85/381)。CAV与鸡马立克氏病病毒、鸡白血病病毒等免疫抑制病病毒混合感染在检测鸡群中普遍存在,占CAV感染总量的52.94%(45/85)。将来自山东临沂某CAV阳性鸡场的病鸡肝脏样品处理后接种MDCC-MSB 1细胞,连续传代6次,经PCR及间接免疫荧光鉴定,确定分离到一株CAV细胞适应病毒株,命名为CAV-SD19/4604。对分离株VP1基因测序并与GenBank中19株CAV参考株VP1基因序列比对,显示同源性为95.00%~98.80%,遗传进化树表明CAV-SD19/4604与多数亚洲病毒株位于同一分支。本研究为CAV感染的研究和疾病防控提供了数据支持。

关键词：鸡传染性贫血病鸡传染性贫血病毒流行病学调查分离鉴定序列分析

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豫西南猪主要病毒性传染病流行病学调查

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河南农业科学 2021年第1期50卷 152-157页

作者：鲍印翟洪月李慧敏袁志乔马玉静丁雨善阚云超姚伦广田志军冷超粮南阳师范学院河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室/河南省动物疫病诊断与综合防控工程技术研究中心河南南阳473000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和247... 详细信息

为了解豫西南地区规模化猪场主要病毒性疾病的流行情况和抗体水平,从而制订科学合理的疾病综合防控措施,采用PCR和ELISA方法对南阳、驻马店、信阳市2017—2019年57个猪场送检的723份病猪组织样品(淋巴结、肺脏、脾脏、肾脏、脑等)和2476份血液样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗原和抗体检测。结果表明,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的感染具有普遍性,病原平均阳性率分别达到了42.20%(192/455)、56.85%(328/577)、45.03%(136/302)和28.85%(73/253),且部分存在以PRRSV为主的混合感染。抗体检测结果显示,CSFV、PRRSV、PCV2、PRV gE和PRV gB抗体的平均阳性率分别为78.37%(1841/2349)、75.93%(1565/2061)、84.62%(682/806)、33.12%(627/1893)和94.00%(1504/1600)。此外,CSFV、PCV2和PRV的病原检出率在2019年大幅下降。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒猪圆环病毒2型猪伪狂犬病病毒病毒性传染病流行病学调查

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H10N8亚型禽流感病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2020年第12期42卷 1233-1238页

作者：包红梅田国彬曾显营王秀荣陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/国家禽流感参考实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方... 详细信息

为建立检测H10N8亚型禽流感病毒(AIV)的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究选取H10N8亚型AIV血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因中高度保守区域的核苷酸序列,设计引物和探针。通过反应条件优化,建立了针对H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法。该方法可特异性地检测出H10N8亚型AIV的HA和NA基因,与其它亚型AIV及其他常见禽呼吸道病原均无交叉反应;能够检测到AIV的最低检出量为10-1 EID50/0.1 mL,比常规RT-PCR方法敏感100倍;批内和批间重复性试验的变异系数(CV)均小于2%。SPF鸡感染试验样品检测结果显示,该双重荧光定量RT-PCR方法和病毒分离鉴定方法的符合率为94.44%,与常规RT-PCR方法的符合率为88.23%,而常规RT-PCR方法与病毒分离方法的符合率为83.33%,表明该方法与病毒分离方法的准确率更接近,可以用于临床检测。本实验结果表明H10N8亚型AIV的双重荧光定量RT-PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为H10N8亚型AIV的检测及监测提供了有力的技术手段。

关键词：禽流感 H10N8 双重荧光定量RT-PCR 检测方法

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荧光定量PCR方法在鸡马立克氏病疫苗免疫监测中的应用分析

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 727-733页

作者：兰兴鸽张艳萍于正浩王亚楠高玉龙祁小乐崔红玉高立李凯潘青王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协调创新中心江苏扬州225009

鸡马立克氏病(MD)的防控主要依靠疫苗免疫,MD疫苗株在鸡体内的有效复制与最终的免疫效果直接相关,可通过这种相关性对MD疫苗进行免疫监测。为有效监测MD疫苗的免疫效果,本研究共采用两种血清1型MD疫苗免疫不同的鸡:(1)实验鸡分为两组:... 详细信息

鸡马立克氏病(MD)的防控主要依靠疫苗免疫,MD疫苗株在鸡体内的有效复制与最终的免疫效果直接相关,可通过这种相关性对MD疫苗进行免疫监测。为有效监测MD疫苗的免疫效果,本研究共采用两种血清1型MD疫苗免疫不同的鸡:(1)实验鸡分为两组:一组在1日龄时免疫血清1型MD疫苗814株,另一组为不免疫的对照组,选用双重荧光定量PCR方法分别对两组鸡免疫后7 d和14 d的脾脏和羽髓中的马立克氏病病毒(MDV)载量(log10 MDV拷贝数/106个细胞)进行检测;(2)商品鸡:选用上述双重荧光定量PCR方法分别对经血清1型MD疫苗CVI988/Rispens株免疫后7 d和14 d的商品蛋鸡脾脏和羽髓中的MDV载量进行检测。并针对荧光定量PCR的检测结果结合常规PCR检测和meq基因的序列比对分析各组鸡脾脏和羽髓样品是否被野毒感染;同时监测正常免疫商品鸡的产蛋率和死淘率等至8个月鸡龄。结果显示,实验鸡免疫后7 d,免疫组鸡脾脏和羽髓的MDV载量为3.39~4.69,对照组鸡相应样品的MDV载量为3.36~4.90;免疫后14 d,免疫组鸡MDV载量为3.77~4.86,对照组鸡相应样品的MDV载量为5.06~6.22,对照组显著高于免疫组(p<0.01)。PCR鉴定和meq基因序列分析证实,对照组鸡被MDV野毒感染,导致其体内MDV载量的显著上升。商品鸡免疫后7 d,脾脏和羽髓的MDV载量为3.75~4.59;免疫后14 d,MDV载量为3.71~4.92,并且在监测期内没有发生MD。以上结果表明,利用双重荧光定量PCR方法对血清1型MD疫苗进行免疫监测时,免疫后7 d~14 d鸡体内的病毒载量为3.39~4.86,载量过高则可能发生了免疫失败或者野毒感染。本研究结果表明双重荧光定量PCR方法可以用于MD疫苗免疫效果的监测,为临床鸡MD疫苗的免疫监测提供了参考数据。。

关键词：马立克氏病病毒载量双重荧光定量PCR 免疫监测

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HN蛋白糖基化位点缺失的新城疫病毒的生物学特性研究

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中国兽医杂志 2020年第6期56卷 1-4页

作者：艾惠孙军峰陈琳娜李乐韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

从黑龙江某鸡场中分离到1株新城疫病毒(NDV),命名为ck/CH/LHLJ170302株。全基因组序列测定和遗传进化分析表明,ck/CH/LHLJ170302株属于NDV class II类中的基因II型,与LaSota疫苗株的亲缘关系较近。分析基因分子特征发现,与LaSota株相比,... 详细信息

从黑龙江某鸡场中分离到1株新城疫病毒(NDV),命名为ck/CH/LHLJ170302株。全基因组序列测定和遗传进化分析表明,ck/CH/LHLJ170302株属于NDV class II类中的基因II型,与LaSota疫苗株的亲缘关系较近。分析基因分子特征发现,与LaSota株相比,ck/CH/LHLJ170302株编码的HN蛋白缺失了433位的糖基化修饰位点,而其他基因之间没有明显差异。进一步比较分析了ck/CH/LHLJ170302株与LaSota株在生长特性、致病性、抗原相关性方面的差异。结果发现,接种SPF鸡胚后,ck/CH/LHLJ170302株在24 h、48 h和72 h的病毒滴度均显著高于LaSota疫苗株(P<0.05),表明ck/CH/LHLJ170302株的增殖速度要快于LaSota株。毒力指标测定结果显示,ck/CH/LHLJ170302株引起鸡胚死亡平均时间(MDT)较LaSota株提前了近20 h,1日龄SPF雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)略低于LaSota株。此外,ck/CH/LHLJ170302株与LaSota株的抗原相关性分析结果表明,ck/CH/LHLJ170302与LaSota株没有明显的抗原性差异。本研究结果为我国NDV的遗传变异的研究提供了参考数据。

关键词：新城疫病毒 HN蛋白糖基化位点生物学特性

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绵羊副流感病毒3型PE2019株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第5期42卷 434-438页

作者：朱远茂陈瑞红林俊杨木娇薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了确定引起绵羊呼吸道传染病的病原,本研究于2019年对一患急性呼吸道疾病死亡绵羊的病料进行了病毒分离,从其胸腔积液中分离到一株绵羊副流感病毒3型(OPIV3),命名为PE2019株。该病毒能够在MDBK细胞上增殖,产生细胞圆缩、集聚成簇等为... 详细信息

为了确定引起绵羊呼吸道传染病的病原,本研究于2019年对一患急性呼吸道疾病死亡绵羊的病料进行了病毒分离,从其胸腔积液中分离到一株绵羊副流感病毒3型(OPIV3),命名为PE2019株。该病毒能够在MDBK细胞上增殖,产生细胞圆缩、集聚成簇等为特征的细胞病变;电子显微镜观察可见OPIV3 PE2019株为直径约300 nm的圆形粒子;经检测该分离株病毒滴度为107.8TCID50/mL。分离株对小鼠和豚鼠的红细胞血凝价均为164,不凝集鸡、兔、绵羊和牛的红细胞。参考山羊副流感病毒3型全基因组序列(MK091103),设计其N和M基因特异性引物,通过RT-PCR可从病毒细胞培养物中扩增到特异性片段,对其进行序列分析,结果显示,分离株N基因序列与山羊、牛和人副流感病毒3型参考株的基因同源性分别为84.0%、82.1%和78.8%,M基因序列与山羊、牛和人副流感病毒3型参考株的基因同源性分别为81.5%、78.4%和77.6%,OPIV3 N和M基因均为独立一个分支。本研究首次于国内分离到OPIV3,为了解国内OPIV3的流行情况及疫苗的研制奠定了基础。

关键词：绵羊副流感病毒3型分离鉴定

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