检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 747-752页

作者：崔红亮张洪亮汪孟航贾梅玉孟凡丹蔡雪辉吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪肺脏组织中的感染特性,本研究建立了高度分化的猪呼吸系统体外培养模型-猪肺组织精细切片(PCLS)。该培养体系包含肺脏组织中多种相关细胞并能够体现出肺脏组织的生理结构和生物学功能。本研究... 详细信息

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪肺脏组织中的感染特性,本研究建立了高度分化的猪呼吸系统体外培养模型-猪肺组织精细切片(PCLS)。该培养体系包含肺脏组织中多种相关细胞并能够体现出肺脏组织的生理结构和生物学功能。本研究针对制备的猪PCLS进行生物学活性的鉴定,利用评估支气管上皮细胞纤毛摆动百分比的方法检测支气管上皮细胞纤毛活性,结果显示猪PCLS制备良好,在制备10 d以后仍保持95%以上的纤毛活性;利用活/死细胞染色法测定制备的猪PCLS体外培养后活细胞的比例,结果显示制备的猪PCLS在体外培养7 d后支气管上皮细胞和肺泡细胞仍为活细胞;利用间接免疫荧光试验测定猪PCLS中上皮细胞、杯状细胞和肺泡巨噬细胞(PAM)的完整性与分布情况,结果显示制备的猪PCLS上皮细胞和杯状细胞保存完整且猪PCLS中包含丰富的PAM。利用6株不同PRRSV分离株(HuN4、XD-15、WK-34、WK-38、LCL-75和DL-1510)以2.5×105TCID50/片的剂量感染猪PCLS,检测不同PRRSV分离株在猪PCLS中的感染特性,结果表明不同PRRSV分离株在该培养体系中表现出不同的增殖能力。本研究表明猪PCLS可用于PRRSV的体外感染试验。本研究为PRRSV的体外研究提供了新的模型与方法,同时也为其它猪呼吸道病原体提供了新的研究平台。

关键词：猪肺组织精细切片猪繁殖与呼吸综合征病毒上皮细胞纤毛活性

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新中国成立70周年兽医科学研究进展

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中国科学：生命科学 2019年第11期49卷 1441-1456页

作者：李慧昕刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本文从兽医学发展历史沿革,各时期国家对兽医事业的规划,国家对兽医科学研究的支持,兽医科研人员在基础研究,基础应用和应用研究方面的进展,取得的重大成果以及在党中央的领导下对动物疾病的综合防控效果等方面,对我国兽医事业取得的研... 详细信息

本文从兽医学发展历史沿革,各时期国家对兽医事业的规划,国家对兽医科学研究的支持,兽医科研人员在基础研究,基础应用和应用研究方面的进展,取得的重大成果以及在党中央的领导下对动物疾病的综合防控效果等方面,对我国兽医事业取得的研究进展进行简要总结和回顾,并对未来兽医工作进行了展望,以期对兽医领域从业人员提供借鉴和参考.

关键词：新中国成立70周年兽医科学研究进展

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结核分枝杆菌TetR家族蛋白Rv3295新调控靶点及辅助因子的初步研究

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中国预防兽医学报 2020年第7期42卷 643-649页

作者：吕明月崔莹莹唐祎依党光辉崔子寅刘思国宋宁宁黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝... 详细信息

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝胶迁移试验(EMSA)和染色质免疫沉淀(ChIP)试验结果显示,Rv3295与rv3229c(desA3)启动子在体外与体内均能够结合。DNA大沟小沟结合试验表明,Rv3295与rv3229c DNA的大沟结合。通过EMSA小分子筛选,结果显示,小分子(VB1、VB3、VB6、VC)和金属离子(Fe3+和Zn2+)在体外均可降低Rv3295与rv3229c启动子区域的结合,而氨基酸及其它小分子对该结合无影响。分子对接试验表明Rv3295的Glu 67和Glu 105氨基酸残基在该蛋白质与小分子及金属离子的相互作用中起重要作用。以上试验结果表明rv3229c为TetR家族蛋白Rv3295新的调控靶点。本研究首次揭示了MTB中的Rv3295调控蛋白可直接调控rv3229c(desA3)的表达,进而参与油酸合成的调控。

关键词：结核分枝杆菌 Rv3295 转录调控 rv3229c

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欧亚类禽型H1N1猪流感病毒HA蛋白的表达及免疫原性评估

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中国农业科学 2019年第5期52卷 930-938页

作者：贾云慧许程志隋金钰吴运谱许榜丰陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室

【目的】表达欧亚类禽型(eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白,并对其免疫原性进行测定。【方法】利用RT-PCR技术扩增病毒A/swine/Zhejiang/245/2013(H1N1)(ZJ245)的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGS中,获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),将其转染293T细胞,采用间接免疫荧光(IFA)检测和Western blot检测HA蛋白在体外的表达;将重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)经肌肉注射途径、以100μg/只剂量免疫16只6周龄BALB/c小鼠(I组和II组),间隔3周后进行加强免疫(二免);同等数量的小鼠以相同方式注射100μL无菌PBS作为非免疫对照组(III组和IV组)。首免和二免每周采血,分别采用血凝抑制(HI)试验和病毒中和(VN)试验两种方法测定不同类型的血清抗体效价;二免2周后,其中两组小鼠(I组和III组)用50μL(106.0EID50)的ZJ245病毒经滴鼻感染途径进行攻毒,另外两组(II组和IV组)用A/swine/Heilongjiang/44/2009(H1N1)(HLJ44)病毒进行攻毒。攻毒后14 d内每天观察小鼠的临床症状、统计发病与死亡情况,且每天称量小鼠体重,在体重下降比率超过25%时判定为小鼠死亡。攻毒后第3天,每组随机剖杀3只小鼠,分别采集脑、鼻甲、肺、脾和肾等脏器,匀浆处理后通过接种10日龄的非免疫鸡胚测定脏器的病毒含量。通过小鼠体重变化以及脏器滴定的病毒含量评估重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫保护效果。【结果】经酶切鉴定和测序验证表明ZJ245的HA基因的已正确克隆至真核表达质粒p CAGGS中获得重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245),经体外转染293T细胞后,IFA和Western blot证实了病毒的HA蛋白能够正确表达,并具有良好的生物学活性;小鼠的免疫与攻毒试验结果表明,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)首免后一周可检测到针对同源病毒ZJ245的低水平HI和VN抗体,加强免疫后抗体水平明显升高,HI抗体达到76.88、VN抗体达到152.5;同时针对异源病毒HLJ44也产生了较低水平的HI和VN抗体。106.0 EID50的同源病毒ZJ245攻毒时,与非免疫组小鼠相对比,重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)的免疫完全阻止了因病毒攻击而导致的小鼠体重下降以及肺脏和鼻甲内病毒的复制;106.0 EID50的异源病毒HLJ44攻毒时,相比非免疫组小鼠,质粒免疫组小鼠体重的下降比率、以及肺脏和鼻甲内的病毒滴度均显著降低(P<0.0001、P <0.001、P <0.05)。【结论】重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)能够有效表达病毒HA蛋白,免疫后可使小鼠获得完全抵抗ZJ245感染及部分抵御HLJ44感染的免疫保护力,表明重组质粒pCAGGS-HA(ZJ245)具有良好的免疫原性。

关键词：欧亚类禽型H1N1猪流感病毒 HA蛋白重组质粒免疫原性 DNA疫苗

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K亚群禽白血病病毒细胞受体的鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第8期42卷 802-808页

作者：邢立晓俞燕于蒙蒙常方方包媛玲王素艳高立祁小乐王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125

禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实... 详细信息

禽白血病病毒(ALV)进入细胞启动感染依赖于其囊膜表面蛋白gp85与细胞受体的结合。K亚群ALV(ALV-K)是2012年从我国本地芦花鸡中分离到的一个ALV新亚群。为了鉴定ALV-K的细胞受体,本研究利用真核细胞表达了A和K亚群ALV gp85蛋白,并利用实验室前期拯救的重组病毒RCAS-A-GFP和RCAS-K-GFP进行病毒受体的交叉干扰试验,结果显示A亚群ALV(ALV-A)gp85蛋白能够抑制ALV-K的感染,同样ALV-Kgp85蛋白也能够抑制ALV-A的感染,存在受体交叉干扰现象,因而推测二者可能共用细胞受体。已有研究表明Tva是ALV-A的细胞受体,本研究利用Co-IP和Pull-down试验检测了ALV-Kgp85与Tva的互作,结果显示ALV-Kgp85蛋白能与可溶性的Tva(sTva)相互作用。进一步的流式细胞术结果显示ALV-Kgp85能够高效结合Tva,结合率在90%以上。为进一步验证Tva是否能介导ALV-K进入细胞,利用ALV的非易感细胞HEK293T进行了Tva受体重建试验,结果显示RCAS-K-GFP能够进入表达Tva的293T细胞并复制产生较强的绿色荧光。以上结果充分表明Tva也是ALV-K的细胞受体,能够介导ALV-K进入宿主细胞,启动其感染。该研究为阐明ALV-K侵入宿主细胞机制及抗病毒靶点筛选奠定了基础。

关键词： K亚群禽白血病病毒细胞受体 Tva蛋白结合进入

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一株新型三源重配H1N2亚型猪流感病毒的进化分析及对小鼠的感染性研究

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中国预防兽医学报 2020年第9期42卷 861-866页

作者：钟秋张丹丹宋祖晨孟飞陈艳乔传玲陈化兰曹允考杨焕良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨150069 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分... 详细信息

为了研究我国广西地区流行的猪流感病毒分子特征和感染性,本研究对分离自广西临床健康猪群中的H1N2亚型猪流感病毒(SIV)A/swine/Guangxi/238/2018(H1N2)(简称GX238株)进行了分子进化分析和致病性研究。扩增该病毒株8个基因节段后进行分子进化分析,结果显示其8个节段均与2015年~2016年在美国分离的H1N2亚型SIV有高度同源性(98.9%~99.7%),其中HA基因可能来自于2009年之前的人季节性H1N1亚型流感病毒,PB2、PB1、PA、NP、NA和NS可能来自北美三重配H1N2亚型SIV,M基因可能来自H1N1/2009。以106 EID50 SIV GX238株病毒鼻腔感染BALB/c小鼠后记录小鼠的体质量变化及死亡情况,感染后第3 d检测小鼠各脏器病毒复制情况。结果显示,感染组小鼠体质量与PBS对照组小鼠相比有明显下降趋势,感染小鼠40%死亡;在小鼠肺脏和鼻甲中病毒滴度分别达6.3 Log10EID50/mL、4.8 Log10EID50/mL,表明该病毒对小鼠表现出中等的致病力。本研究结果表明输入型SIV持续对我国猪群造成威胁,凸显了在世界范围内开展猪流感监测的必要性。

关键词：猪流感病毒 H1N2亚型序列分析致病性

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人工感染禽腺病毒血清4型对鹅天然免疫反应的影响

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中国兽医科学 2020年第2期50卷 222-232页

作者：李雪峰姜磊孙金艳李慧昕马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院畜牧研究所黑龙江哈尔滨150086

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。... 详细信息

将50只30日龄的健康鹅随机分为攻毒组、观察组和对照组,观察并采集样品,检测抗体水平、病毒血症、病毒载量,应用real-time PCR(RT-PCR)方法检测肝、心脏组织中β-防御素(Av BDs)、Toll样受体(TLRs)、细胞因子(cytokines)等基因表达量。初探人工感染鸡源禽腺病毒血清4型(FAdV-4)对鹅的致病性及机体对该病毒形成的天然免疫反应机制。结果显示,感染该FAdV-4毒株后,鹅均没有明显病症和死亡发生。宿主产生特异性抗体,并且肝、心脏组织出现病理学变化,宿主排毒率和病毒载量呈上升趋势。感染早期(36 h和72 h),Av BD1、2、5、9、16,TLR2、3、7、15,IL-1β、2、6、8、18以及髓样分化因子(My D88)在肝中的基因表达量显著上调(P<0.05)或有上调趋势。证实,鸡源FAdV-4对鹅的致病性较弱,可能与实验动物品种、日龄差异或感染途径等条件有关。宿主可通过TLRs-My D88途径引起机体产生大量的免疫因子,参与机体抗病毒免疫反应。本试验结果为深入研究FAdV-4与宿主早期天然免疫间的相互作用提供了新的参考。

关键词：禽腺病毒血清4型禽β-防御素 Toll样受体细胞因子天然免疫反应

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α疱疹病毒gE和gI蛋白的多样化功能

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病毒学报 2019年第3期35卷 549-556页

作者：尹航周末仇华吉孙元中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

疱疹病毒为双股线性DNA病毒,是引起人与动物疾病的一类重要病原,成熟的病毒粒子由核心、衣壳、间层及囊膜组成。近年来,对以单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)及伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)等为代表的α疱疹病毒在病毒... 详细信息

疱疹病毒为双股线性DNA病毒,是引起人与动物疾病的一类重要病原,成熟的病毒粒子由核心、衣壳、间层及囊膜组成。近年来,对以单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)及伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)等为代表的α疱疹病毒在病毒复制和增殖、毒力、神经系统侵染机制以及对机体免疫应答影响等方面的研究取得了显著进展,在病毒基因组编码的多种蛋白中,gE和gI蛋白在上述各方面均发挥关键作用。本文就gE和gI蛋白在α疱疹病毒中的多样化功能的最新研究成果进行了总结,并指出其未来研究趋势。

关键词：疱疹病毒 gE和gI蛋白功能

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NLRC5基因在SPF大白猪不同器官中的表达与分布

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黑龙江畜牧兽医 2020年第15期 23-27,32页

作者：王有祺刘英华马丽娜李昌文陈洪岩高彩霞于天飞齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

为了研究NLRC5基因在SPF大白猪不同组织中的表达和分布,试验以稀释的标准重组质粒为模板绘制标准曲线,建立实时荧光定量PCR方法,检测SPF大白猪肺脏、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、空肠、胃、小肠、直肠、肾脏、心脏、回肠、肝脏、... 详细信息

为了研究NLRC5基因在SPF大白猪不同组织中的表达和分布,试验以稀释的标准重组质粒为模板绘制标准曲线,建立实时荧光定量PCR方法,检测SPF大白猪肺脏、颌下淋巴结、腹股沟淋巴结、脾脏、空肠、胃、小肠、直肠、肾脏、心脏、回肠、肝脏、结肠、盲肠、扁桃体、肠系膜淋巴结等16种器官中NLRC5基因mRNA的表达差异和分布,并用Western-blot方法检测16种器官中NLRC5基因编码蛋白表达差异和分布。结果表明:NLRC5基因在SPF大白猪16种器官中均能表达,mRNA和蛋白表达水平大体一致,其中在淋巴结、脾脏和扁桃体等免疫器官中的表达量均较高,在胃和肠道等具有黏膜免疫功能的器官中表达量次之,在心脏和肝脏等非免疫器官中的表达量相对较低。说明试验获得了SPF大白猪不同器官中NLRC5基因的天然表达量,并且在免疫器官和具有黏膜器官中有较高的表达。

关键词： NLRC5基因 SPF 大白猪器官表达差异

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小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

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中国动物检疫 2021年第12期38卷 91-98页

作者：杨鸣发马云云于志亚刘家森康洪涛姜骞曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人畜共患病团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 b... 详细信息

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMD^(TM)18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示:当质粒标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(2))copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×(10^(5)~10^(-3))copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR测定结果(13.29±6.74)copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为(0.44±0.14)copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率(25.5%)高于RT-qPCR(17.0%)。结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV) 芯片式数字PCR(cdPCR) 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)

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