检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物检疫 2018年第11期35卷 75-78页

作者：高许雷孙国强李永锋青岛市崂山区农业和水利局山东青岛266061 青岛农业大学山东青岛266109 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,通过对PRRSV基因连续缺失片段dNsp2(87)进行诱导表达,重组pUC57-dNsp2蛋白,经镍柱纯化后,作为抗原包被微量反应板,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。经反应条件优化,确... 详细信息

为建立一种准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,通过对PRRSV基因连续缺失片段dNsp2(87)进行诱导表达,重组pUC57-dNsp2蛋白,经镍柱纯化后,作为抗原包被微量反应板,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。经反应条件优化,确定抗原的最适包被浓度为40μg/mL,最适封闭液为5%脱脂奶粉,检测血清稀释度为1:40,酶标二抗的最适工作浓度为1:5 000,最佳显色时间为1 h,确定阴阳性临界值为0.35(OD450)。该方法均不与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。与IDEXX PRRSV Kit进行重复性、敏感性、符合性试验,证明该方法具有较好的重复性、敏感性、符合性。结果表明,该方法可用于临床PRRSV抗体的检测。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒基因连续缺失片段间接ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪伪狂犬病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

引用

中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 456-460页

作者：张闪闪刘永刚涂亚斌王刚张交儿陈金顶蔡雪辉华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种快速检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的血清学方法,本实验采用原核重组表达的g E蛋白作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测PRV血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测PRV阳性血清和其它猪病病原阳性血清,除了PRV阳性血清... 详细信息

为建立一种快速检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的血清学方法,本实验采用原核重组表达的g E蛋白作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测PRV血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测PRV阳性血清和其它猪病病原阳性血清,除了PRV阳性血清呈阳性外,对其它猪病病原阳性血清的检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复试验的最大变异系数分别是5.95%和9.62%。此外,使用该方法对250份临床血清进行检测,与国内外4种商品化试剂盒的检测结果比较符合率最高为83.6%。表明该方法可以用于PRV的临床检测,为PRV流行病学调查和防控提供了一种快速有效的检测方法。

关键词：伪狂犬病毒 gE 间接ELISA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

共表达H5亚型AIV HA基因和IBDV VP2基因重组DEV的构建及免疫效力评价

引用

农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1197-1206页

作者：李爱心丁蕾蕾刘璐高立胡玉珍陈普成姜永萍柳金雄王笑梅陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室甘肃农业大学动物医学学院

禽流感(Avian influenza,AI)和传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)严重危害家禽养殖业,疫苗免疫是防治的主要手段之一。为探索以鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)(又称鸭病毒性肠炎病毒)为载体,研制在鸡(Gallus gallus)中使用的AI-IBD二联疫苗的可行性,本研究利用overlap PCR及Gateway LR克隆技术,扩增出血凝素(hemagglutinin,HA)-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-病毒蛋白2(virus protein 2,VP2)和VP2-IRES-HA基因片段,并将其克隆入DEV多片段拯救系统T-us78Kan ccd B粘粒短独特区7(unique short region 7,US7)和US8位点之间,利用该系统成功拯救出两株共表达H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)HA基因和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)VP2基因的重组病毒r DEV-HA/VP2和r DEV-VP2/HA,并对其进行了初步免疫效果评价。经系统体外实验表明,病毒传至20代,外源基因均能在重组病毒中稳定遗传和表达,且不影响载体病毒的增殖。但免疫效力实验显示,重组病毒以103半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)、104TCID50、105TCID50免疫鸡后14 d,r DEV-HA/VP2最高仅诱导对同源AIV强毒70%的免疫保护和对超强IBDV(very virulent IBDV,vv IBDV)30%的免疫保护,部分鸡中能检测到血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体,但整体水平较低,IBD抗体未检测到;r DEV-VP2/HA最高仅诱导对vv IBDV 40%的免疫保护,不能诱导对同源AIV强毒的免疫保护,HI抗体和IBD抗体均未检测到。结果显示,以IRES串联基因构建鸭瘟载体禽流感传染性法氏囊病二联疫苗的策略不可行。本研究为以DEV为载体构建在鸡中使用的多联疫苗的研究提供参考资料。

关键词：禽流感(AI) 传染性法氏囊病(IBD) 鸭瘟病毒(DEV) 活载体疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一株低致病性H5N3亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性

引用

农业生物技术学报 2017年第7期25卷 1170-1177页

作者：关立峥孔兴天韩舒雨谷文丽刘驰煌陈思崔鹏飞胡永浩邓国华陈化兰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室

H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。为了解H5N3亚型AIV的生物... 详细信息

H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)随着其不断进化、变异及对宿主的适应,部分毒株已经稳定存在并获得对其自然宿主的高致病力,这不仅严重危害到养禽业的发展,更对人类的公共卫生安全构成潜在威胁。为了解H5N3亚型AIV的生物学特性,本研究对2015年江苏省分离的一株低致病性H5N3亚型AIV(A/Duck/Jiangsu/S1665/2015)进行遗传演化分析、小鼠(Mus musculus)感染性实验和受体结合特异性实验。遗传演化分析结果表明,该病毒的8个基因片段(血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)、碱性聚合酶蛋白1(polymerase basic protein 1,PB1)、PB2、酸性聚合酶蛋白(polymerase acid protein,PA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)、基质蛋白(matrix protein,M)和非结构蛋白(nonstructural protein,NS))来源均不相同,具有明显的遗传多样性。小鼠感染性实验结果显示,这株病毒可以在小鼠的肺脏和鼻甲内进行有效复制,仅引起小鼠的体重出现阶段性下降,对小鼠呈现低致病性。受体结合特异性分析结果表明,这株病毒同时具有与唾液酸(sialic acid,SA)α2,3-Gal和SAα2,6-Gal受体结合的能力,具有感染人类的潜在风险。本研究通过对这株低致病性的H5N3亚型AIV的生物学特性的系统性分析,发现此株病毒的基因来源具有野鸟源性,且具有感染哺乳动物的潜在风险。研究结果对于H5N3亚型AIV的综合防控具有重要的指导意义。

关键词：禽流感病毒(AIV) H5N3 生物学特性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型的建立

引用

中国兽医科学 2017年第10期47卷 1257-1263页

作者：王伟尹海畅吕兴峰刘思国陈洪岩孟庆文中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)是引起人类食源性疾病的重要革兰阴性菌之一,可引起禽、家畜等动物较为严重的感染症状。本研究为了建立肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型,标准菌株SE 50336分别以1×10~8、1×10~7、1×0~6... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)是引起人类食源性疾病的重要革兰阴性菌之一,可引起禽、家畜等动物较为严重的感染症状。本研究为了建立肠炎沙门菌感染ICR小鼠模型,标准菌株SE 50336分别以1×10~8、1×10~7、1×0~6、1×10~5、1×10~4CFU/mL的剂量通过口腔灌注方式感染6周龄ICR雌鼠,每组10只,以接种PBS的10只小鼠作为对照组,测定肠炎沙门菌对ICR小鼠的半数致死量(LD_(50))。将40只ICR雌鼠随机分成两组,以测定的LD_(50)剂量接种肠炎沙门菌,通过临床症状、体重变化、组织病理学、组织中细菌载量以及TNF-α与IL-6表达水平评价肠炎沙门菌对小鼠的致病性。结果,标准菌株SE 50336对ICR小鼠的LD_(50)为1×10^(5.67)CFU/mL。感染后第3天,小鼠出现采食量下降、活动减少、皮毛色泽变暗、畏寒扎堆等症状;感染后第5天,小鼠的平均体重较对照组呈现下降趋势,后期开始恢复。组织病理学结果显示,肝脏出现灶状坏死,形成血栓,出现坏死细胞;脾脏先后出现纤维素性坏死性脾炎,白髓内淋巴细胞减少,呈小空泡状,出现坏死灶。菌落载量分析发现,细菌载量随着感染进程而升高,在脾脏中繁殖速度最快,载量也最高,肝脏次之。定量PCR结果显示,TNF-α表达水平呈升高趋势,而IL-6表达水平降低。上述结果表明,本试验成功建立了肠炎沙门菌标准菌株SE50336感染ICR小鼠的模型,为肠炎沙门菌感染与致病机制的研究提供了有价值的动物模型,也为表达抗菌肽转基因小鼠抗肠炎沙门菌的评价奠定了基础。

关键词：肠炎沙门菌 ICR小鼠感染模型炎性细胞因子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

稳定表达马属动物SAMHD1蛋白的U937细胞系的建立及其抗病毒活性初步研究

引用

中国预防兽医学报 2017年第10期39卷 831-835页

作者：郭苗苗尹鑫姚秋成胡哲王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究马属动物SAMHD1的抗病毒活性,本研究构建了稳定表达马SAMHD1(eqSAMHD1)、驴SAMHD1(doSAMHD1)的U937细胞系。利用pLPCX慢病毒表达载体构建重组质粒pLPCX-doSAMHD1-HA和pLPCX-eqSAMHD1-HA。将重组质粒和假病毒包装重组质粒(pCgp和pVSV-G)共转染于293T细胞中,制备表达SAMHD1的假病毒,将其感染人急性单核细胞白血病细胞系U937,利用嘌呤霉素筛选,建立了稳定表达doSAMHD1和eqSAMHD1的U937细胞系。经western blot鉴定,该细胞系能够稳定表达doSAMHD1和eqSAMHD1蛋白。将人类免疫缺陷病毒(HIV)和马传染性贫血病毒(EIAV)的假病毒感染该细胞系,结果显示表达eqSAMHD1和doSAMHD1的细胞系均能够显著抑制HIV假病毒复制,限制倍数分别为17~19倍和14~18倍;两种细胞系也能够抑制EIAV假病毒复制,限制倍数分别为3~4倍和2~3倍。该细胞系的建立为进一步评价和研究马属动物SAMHD1的抗病毒机制奠定了基础。

关键词：马驴 SAMHD1 U937细胞系 HIV-1 EIAV

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

1株猪源2009/H1N1流感病毒反向遗传系统的建立

引用

畜牧与兽医 2017年第1期49卷 61-64页

作者：许榜丰孟沙沙吴运谱陈艳杨焕良乔传玲陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明... 详细信息

为建立1株猪源2009/H1N1流感病毒A/swine/Heilongjiang/44/2009(HLJ44)的反向遗传系统,利用双向表达质粒p HW2000,分别构建了该病毒株8个基因节段的重组质粒,将其共转染于293T和MDCK混合培养的细胞,拯救出重组病毒R-HLJ44。测序结果表明,R-HLJ44与亲本病毒HLJ44的核苷酸序列完全一致;二者在细胞上具有相似的增殖特性;抗原性未发生变化;分别以106TCID50的剂量鼻腔感染BALB/c小鼠,结果显示R-HLJ44与亲本HLJ44在小鼠脏器中的复制滴度也基本一致。以上结果表明拯救的重组病毒保持了与亲本病毒一致的生物学特性。该病毒反向遗传系统的建立,为进一步研究H1N1亚型流感病毒的致病分子机制及新型疫苗研制等奠定了基础。

关键词：流感病毒猪 2009/H1N1 反向遗传系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

2016年～2017年我国华北地区某规模化猪场经典美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

引用

中国预防兽医学报 2017年第9期39卷 691-696页

作者：刘春晓张洪亮张文立相丽润李真冷超粮陈家锃彭金美王倩安同庆童光志蔡雪辉田志军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 南阳师范学院河南南阳473061 山东信得生物科技有限公司山东青岛266100 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了解近期我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究对该地区某猪场采集33份2016年~2017年疑似患PRRS猪病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行病毒分离,并从分离株中选择两株病毒(SD158和SD192)进行全基因的序... 详细信息

为了解近期我国华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及变异情况,本研究对该地区某猪场采集33份2016年~2017年疑似患PRRS猪病料样品进行PCR检测,对阳性样品进行病毒分离,并从分离株中选择两株病毒(SD158和SD192)进行全基因的序列扩增及分析。结果显示,检测到13份PRRSV阳性病料样品,病原为经典美洲型PRRSV,但仅分离到11株病毒(4株感染MARC-145细胞,另外7株感染PAM细胞)。SD158和SD192株与Resp PRRS MLV株(疫苗株)的核苷酸同源性最高,分别为99.7%和99.4%。对这两株PRRSV与VR-2332、Resp PRRS MLV的各基因的推导氨基酸序列进行分析,结果显示在VR-2332与Resp PRRS MLV株22处差异氨基酸中,SD158株有15处、SD192株有14处氨基酸和Resp PRRS MLV株相同,但二者仅各有6处及7处氨基酸与VR-2332株一致,在鉴别PRRSV VR-2332株与Resp PRRS MLV株的7处可能与毒力相关的氨基酸位点时发现,SD158与SD192株各有5处基酸与VR-2332株相同。根据以上结果推测SD158与SD192株可能来源于PRRSV Resp PRRS MLV株,具有上述分子变化特征的PRRSV在我国的流行状况值得关注。

关键词：经典猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒分离鉴定流行病学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猫疱疹病毒Ⅰ型US3基因剪接异构体的鉴定

引用

中国预防兽医学报 2017年第2期39卷 103-106页

作者：孙雪田进刘大飞吴红霞祖少坡曲连东东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为鉴定猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)US3基因的编码产物,本研究以提取FHV-1感染细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增US3基因转录产物,测序结果显示除了全长US3基因(1 056 bp)外,还出现了一个825 bp的片段(US3-X1)。该片段是由全长US3基因在22... 详细信息

为鉴定猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)US3基因的编码产物,本研究以提取FHV-1感染细胞的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增US3基因转录产物,测序结果显示除了全长US3基因(1 056 bp)外,还出现了一个825 bp的片段(US3-X1)。该片段是由全长US3基因在226 bp^458 bp位置发生了自我剪接,导致234 bp DNA缺失而产生,但ORF并没有改变。此外,通过重叠延伸PCR将US3基因226 bp处碱基"A"突变为"G"(m US3),改变自我剪接位点。将全长US3基因、m US3和US3-X1基因分别克隆至p3×Flag-CMV-10中,转染F81细胞,经western blot检测表明FHV-1 US3可以表达两种不同分子量的异构蛋白,大小约为45 ku和50 ku。这种US3基因的剪接异构体现象在猪伪狂犬病毒和人单纯疱疹病毒中已有报道,而FHV-1 US3基因的剪接异构体的鉴定尚属首次。该研究结果为进一步研究FHV-1 US3异构体蛋白的功能奠定了基础。

关键词：猫疱疹病毒I型 US3基因剪接异构体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

弓形虫翻译控制肿瘤蛋白促进组胺释放活性的研究

引用

中国预防兽医学报 2017年第2期39卷 119-122页

作者：陈亚萍郑君贾洪林鲁承延边大学农学院动物医学系吉林延吉133000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为研究弓形虫感染后产生炎性反应的分子机制,本研究将预测的弓形虫翻译控制肿瘤蛋白(TgTCTP)基因进行原核表达,并且利用竞争性ELISA检测方法鉴定重组TgTCTP蛋白(r TgTCTP)促进小鼠腹腔细胞释放组胺的活性反应。研究结果显示,TgTCTP定位... 详细信息

为研究弓形虫感染后产生炎性反应的分子机制,本研究将预测的弓形虫翻译控制肿瘤蛋白(TgTCTP)基因进行原核表达,并且利用竞争性ELISA检测方法鉴定重组TgTCTP蛋白(r TgTCTP)促进小鼠腹腔细胞释放组胺的活性反应。研究结果显示,TgTCTP定位于弓形虫速殖子的胞浆内,以多聚体的形式存在;原核表达的r TgTCTP诱导小鼠腹腔细胞释放组胺的活性(22.225±2.358 ng/m L),显著高于GST蛋白组(10.956±2.819 ng/m L),结果表明表达的r TgTCTP能够促进小鼠腹腔细胞组胺的释放(p<0.01)。本研究为TgTCTP功能进一步的鉴定和弓形虫引起炎症反应的分子机制研究奠定了基础。

关键词：弓形虫 TCTP 重组蛋白组胺

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：