检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2017年第11期39卷 912-915页

作者：陈嘉常继涛王建发杨颗粒武瑞于力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立一种leachii支原体的检测方法,本研究根据leachii支原体LPPA外膜蛋白编码基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。结果显示,该方法仅对leachii支原体扩增出539 bp的目的片段,而与牛支原体、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体... 详细信息

为建立一种leachii支原体的检测方法,本研究根据leachii支原体LPPA外膜蛋白编码基因序列设计一对引物,建立了PCR检测方法。结果显示,该方法仅对leachii支原体扩增出539 bp的目的片段,而与牛支原体、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、丝状支原体丝状亚种小菌落型、山羊支原体山羊肺炎亚种等其它支原体无交叉反应,具有良好的特异性;该方法对leachii支原体的最低检测浓度为105 ccu/m L,敏感性较高。采用该方法可以在乳汁和关节液等病料样品中检测到leachii支原体,与分离培养的结果相符。上述结果表明,本研究建立的leachii支原体PCR检测方法具有特异性强、敏感性高的特点,可实现准确、高效检测leachii支原体的目的。

关键词： leachii支原体 PCR 检测

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表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白重组LaSota疫苗株的构建

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中国预防兽医学报 2017年第5期39卷 407-411页

作者：赵雯刘瑞菊孙军峰刘怀然韩宗玺刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队黑龙江哈尔滨150069 山东省寿光市畜牧兽医局山东寿光262700

基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)为我国NDV的主要流行病毒株,而经典疫苗株LaSota不能对鸡群起到有效的免疫保护。为研发针对NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遗传操作技术,将LaSota的F基因编码区(CDS)替换为基因Ⅶ型流行病毒株CK/CH... 详细信息

基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)为我国NDV的主要流行病毒株,而经典疫苗株LaSota不能对鸡群起到有效的免疫保护。为研发针对NDV基因Ⅶ型流行病毒株的疫苗,本研究采用反向遗传操作技术,将LaSota的F基因编码区(CDS)替换为基因Ⅶ型流行病毒株CK/CH/LHLJ/1/06株的F基因CDS,并将替换后的F蛋白的裂解位点突变为LaSota的裂解位点,构建重组质粒pNDFLsp-mF。将pNDFLsp-mF与表达NP、P和L蛋白的辅助质粒共转染BSR-T7/5细胞,拯救获得表达基因Ⅶ型NDV F蛋白的重组病毒(rLaSota-mF)。生长曲线结果显示,与LaSota相似,rLaSota-mF能够在鸡胚中有效复制,病毒滴度EID50为109.375/0.1 mL。生物学特性测定结果显示rLaSota-mF的MDT为144.6 h,表明其为低毒力病毒株。将拯救获得的病毒连续传15代后所替换的基因及突变的位点能够在r LaSota-mF中稳定存在。本研究为研究与开发针对NDV不同基因型流行病毒株的疫苗奠定基础。

关键词：新城疫病毒基因VII型 F蛋白裂解位点

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猪传染性胃肠炎病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验原位检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2017年第3期39卷 237-239页

作者：朱蕴暖张鑫朱向东陈建飞时洪艳石达冯力黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150069

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为... 详细信息

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的原位检测方法,本研究以TGEV N蛋白的单克隆抗体为一抗,羊抗小鼠IgG-HRP为二抗,AEC过氧化物酶底物为显色液,建立了TGEV的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测方法。检测结果显示,一抗的最佳使用浓度为0.5 ng/μL,二抗的最佳稀释倍数为1∶2 000倍,经AEC显色,TGEV感染的阳性细胞呈红棕色;对常见的猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好特异性;同时该方法能够在普通显微镜下观察到病毒在细胞中的分布情况。本研究建立的方法为TGEV的实验室鉴定及TGEV在感染细胞中的定位和动态分布提供有效的检测手段。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 N蛋白过氧化物酶单层试验

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新城疫弱毒活疫苗中FAdV-4的分离鉴定及分子特征

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微生物学通报 2017年第12期44卷 2773-2781页

作者：刘亮亮王娟李慧昕刘胜旺马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd ... 详细信息

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd V污染,探讨国内鸡群中FAd V感染和流行的可能原因。【方法】应用本实验室建立的FAd V PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAd V分离鉴定。经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征。【结果】分离到一株禽腺病毒,命名为L160962。基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9%-100%,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3%,但与A、B、D和E种FAd V的相似性分别为79.0%-83.3%。系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9%以上,应划分为血清4型FAd V。基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近。【结论】我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAd V污染,这可能是我国鸡群中FAd V大面积感染和流行的原因之一。

关键词：禽腺病毒 La Sota疫苗分离鉴定

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我国农村电子商务发展探究

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黑龙江科学 2017年第15期8卷 20-21页

作者：李赞彭永刚石星明杨金雨中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

介绍我国农村电子商务的发展现状,对农村电子商务发展中存在的问题进行深入分析,并建议政府加大支持力度、扩大农村电子商务发展规模、完善农村物流体系。

关键词：农村电子商务发展现状存在的问题建议

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表达EGFP蛋白新型重组新城疫病毒疫苗载体的构建

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中国兽医科学 2017年第7期47卷 843-849页

作者：赵冉齐甜铭孙军峰刘怀然韩宗玺杨孝朴刘胜旺甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病研究团队黑龙江哈尔滨150069

为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达... 详细信息

为构建新型新城疫病毒(NDV)载体疫苗,前期我们将La Sota全长c DNA中的F基因编码区替换为基因Ⅶ型NDV的F基因编码区,并将其裂解位点突变为弱毒株的序列,构建获得了p NDFLSP-m F重组质粒。为探索p NDFLSP-m F是否能够作为载体有效地表达外源蛋白,在p NDFLSP-m F的P基因与M基因之间引入PmeⅠ酶切位点,并将EGFP基因编码区克隆至构建好的p NDFLSP-m F载体中,构建含有EGFP基因的重组质粒p NDFLSP-m F-EGFP。将p NDFLSP-m F-EGFP以及辅助质粒p CI-NP-K、p CI-P-K、p CI-LK共转染表达T7 RNA聚合酶的重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,拯救获得了重组病毒La Sota-m FEGFP。通过RT-PCR证明,被拯救的重组病毒中含有插入的外源基因EGFP。荧光观察和Western-blot分析结果表明,EGFP蛋白能在重组病毒中稳定表达。生物学特性测定结果显示,La Sota-m F-EGFP具有低毒力毒株特征,MDT为144 h,能够在鸡胚上有效地复制,EID50为1×108.75/0.1 m L。上述研究结果为研制和开发新型NDV载体疫苗奠定了基础。

关键词：新城疫病毒基因Ⅶ型绿色荧光蛋白

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HN蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及鉴定

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中国兽医科学 2017年第6期47卷 671-679页

作者：齐甜铭赵文钧陈玉秋孙军峰马得莹东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽呼吸道病研究团队黑龙江哈尔滨150069

新城疫病毒(NDV)是在世界范围内引发家禽发病和死亡的主要病因。HN作为重要的囊膜蛋白,在NDV吸附入侵过程中发挥重要作用。本研究利用反向遗传技术,在HN编码区的N端插入由6个氨基酸组成的TC标签(tetracysteine),成功转染细胞拯救获得TC... 详细信息

新城疫病毒(NDV)是在世界范围内引发家禽发病和死亡的主要病因。HN作为重要的囊膜蛋白,在NDV吸附入侵过程中发挥重要作用。本研究利用反向遗传技术,在HN编码区的N端插入由6个氨基酸组成的TC标签(tetracysteine),成功转染细胞拯救获得TC标记的重组病毒La Sota-HN-NTC,经鉴定La Sota-HN-NTC能够在鸡胚中有效复制,生长曲线与亲本病毒La Sota相似。Western-blot结果显示,La Sota-HN-NTC中HN蛋白的表达量与La Sota相比无明显变化。La Sota-HN-NTC的毒力稍低于La Sota,并且TC标签能够在重组病毒中稳定存在。La Sota-HN-NTC感染的细胞中能够观察到明显的绿色荧光,表明TC标记的HN蛋白能够正常表达并被双砷染料特异性染色。NDV吸附试验表明,La Sota-HN-NTC吸附细胞受体的能力没有因为TC标签发生改变。激光共聚焦监测到了La Sota-HN-NTC感染细胞中HN蛋白的动态分布。本研究为监测HN蛋白在NDV感染过程中的动态分布,阐明HN蛋白在NDV感染中的作用机制提供了工具和基础。

关键词：新城疫病毒 TC标签 HN蛋白

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SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒与宿主细胞互作分子网络的影响

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中国预防兽医学报 2017年第8期39卷 605-610页

作者：高琦李海闻晓波刘胜旺冉旭华黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探索SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的影响及调控机制,本研究应用鸡LMH细胞系感染ILTV LJS09株作为实验模型,测定了SU6656对ILTV增殖和毒力的影响,通过高通量RNA测序技术(RNA-Seq)在全基因组范围内检测宿主细胞基因转录谱表... 详细信息

为探索SU6656对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染的影响及调控机制,本研究应用鸡LMH细胞系感染ILTV LJS09株作为实验模型,测定了SU6656对ILTV增殖和毒力的影响,通过高通量RNA测序技术(RNA-Seq)在全基因组范围内检测宿主细胞基因转录谱表达,并利用荧光定量PCR对部分差异表达基因进行验证。进一步的GO功能分析显示,在宿主细胞应答ILTV感染过程中,SU6656所调控基因主要涉及氢离子跨膜运输、辅酶Q的结合、Fe^(2+)和S^(2+)聚集等功能。KEGG通路分析表明,氧化磷酸化通路在SU6656调控ILTV感染的过程中可能发挥重要作用。本研究为进一步解析ILTV感染及致病机制提供了重要依据。

关键词：传染性喉气管炎病毒 RNA-seq SU6656 病毒与宿主互作

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鸭瘟病毒在鸭胚脐带间充质干细胞上生物学特性的研究

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中国兽医科学 2017年第9期47卷 1094-1099页

作者：徐丽晶陆涛峰王怡平陈洪岩赵丽丽东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况。本试验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代至第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴... 详细信息

为了解鸭瘟病毒(DPV)在鸭胚脐带间充质干细胞上的适应性和增殖情况。本试验将DPV接种鸭胚脐带间充质干细胞,连续传代至第10代,通过CPE观察、病毒粒子电镜观察、核酸检测、间接免疫荧光检测等分析其生物学特性,并测定了连续10代的病毒滴度(TCID_(50))。结果显示,第一代DPV即在鸭胚脐带间充质干细胞上产生了明显的CPE,并且在连续传代的过程中CPE能够稳定出现。初步提纯的病毒悬浮液在电镜下可见到结构清晰的子代病毒。F1~F10代DPV均能扩增出大小为416 bp的UL6基因片段。间接免疫荧光又进一步证实DPV的阳性血清能够对染毒病灶产生特异性荧光染色。连续测定了10代的病毒滴度(TCID_(50))均不低于10^(-6.43),且在DEUCMSC上测定的DPV TCID_(50)明显高于DEF的。说明DPV能在鸭胚脐带间充质干细胞上稳定增殖。

关键词：鸭瘟病毒鸭胚脐带间充质干细胞生物学特性

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鸡HspHsp90α可溶性表达及与传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白亲和力的鉴定

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中国家禽 2017年第5期39卷 17-21页

作者：高祥李辉陈玉明刘爱晶吴甜甜王永强高立高玉龙李凯刘长军崔红玉张艳萍潘青王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证... 详细信息

热激蛋白90α(Heat shock protein 90,Hsp90α)在传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease,IBDV)的致病过程中发挥重要作用。蛋白互作及其亲和力均可能导致不同的信号转导和生物效应,鸡源Hsp90α与IBDV衣壳蛋白VP2的互作已经被证明,但两者之间的亲和力尚未被鉴定。研究通过表达和纯化鸡的Hsp90α和IBDV超强毒株的VP2蛋白,运用表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)技术,揭示Hsp90α和IBDV VP2蛋白两者互作的动态过程,并确定其亲和力((KD)为7.105×10^(-8)M),为强相互作用。研究结果对进一步揭示IBDV的致病机制有重要意义。

关键词： Hsp90α 传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白表面等离子共振亲和力

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