检索结果-内蒙古大学图书馆

实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 240-243页

作者：牛银杰刘柏含赵丽丽孙畅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blo... 详细信息

目的制备鹅细小病毒(GPV)VP3衣壳蛋白的兔抗血清,在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPVH分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a-VP3,诱导纯化VP3蛋白,皮下注射免疫新西兰白兔,收集和纯化VP3抗血清,经Western blotting检测VP3抗血清与VP3蛋白的反应性。GPVH株鹅胚尿囊液接种SPF绍兴麻鸭胚和其成纤维细胞,通过PCR反应和间接免疫荧光方法,检测GPV在鸭胚及其成纤维细胞中的增殖。结果成功制备了VP3的兔抗血清,同时GPV在鸭胚及其成纤维细胞中进行良好增殖。结论 VP3抗血清的制备及GPV在绍兴麻鸭鸭胚及成纤维细胞中的增殖实验为GPV分子生物学特性及致病机制的研究奠定基础。

关键词：鹅细小病毒(GPV) VP3基因 VP3抗血清增殖

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抗原处理相关转运体基因多态性与疾病相关性的研究进展

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实验动物与比较医学 2017年第3期37卷 252-256页

作者：王兴童陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室实验动物与比较医学创新团队哈尔滨150069

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机... 详细信息

抗原处理相关转运体(TAP)是一种异二聚体跨膜转运蛋白,具有高度多态性,主要功能是将胞质中加工产生的抗原肽转运到内质网腔,与主要组织相容复合体(MHC)Ⅰ类分子组装形成抗原肽-MHCI复合物后转运至细胞表面,被CD8^+T淋巴细胞识别,诱导机体产生细胞免疫应答。某些特定的人类疾病同TAP的多态性相关,包括多种肿瘤疾病、自身免疫疾病和传染性疾病等。本文就实验动物的TAP基因在与疾病相关性方面的比较医学研究进展做一综述。

关键词：抗原处理相关转运体(TAP) 多态性疾病相关性

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兽用疫苗中替代方法的研究进展

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实验动物科学 2018年第1期35卷 67-71页

作者：王兴童韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

本文介绍了兽用疫苗效力检验和安全检验中替代方法的应用及研究进展,并提出适合建立替代方法的兽用疫苗,以期为我国兽用疫苗替代方法研究提供思路。

关键词：兽用疫苗安全性检验效力检验替代

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CAV-1感染MDCK中各IFN及受体分子表达谱的差异

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实验动物科学 2020年第3期37卷 1-5页

作者：孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方... 详细信息

目的分析犬肾细胞系(MDCK)感染犬腺病毒1型(CAV-1)后各种干扰素(IFN)亚型及其受体分子转录水平的表达情况。方法建立犬IFN-β、IFN-β受体(IFNAR1)、IFN-λ1、IFN-λ1受体(IFN-λ1R)、IFN-λ3和IFN-λ3受体(IFN-λ3R)的染料法定量PCR方法,分析了MDCK在PolyⅠ∶C处理和接种CAV-1后细胞内各IFN及受体分子转录水平的相对含量。结果正常MDCK细胞内存在较高含量的IFN-λ3R且含量显著高于其他IFN及受体分子的转录水平;用PolyⅠ∶C处理MDCK细胞24 h后,IFN-λ1R、IFN-λ3和IFN-λ3R的表达量均显著性上调,而IFN-β、IFN-λ1和IFNAR1几乎没变化;接种CAV-1后,IFN-α的含量急剧上升至6倍。结论MDCK细胞存在不同水平浓度的IFN分子及其受体转录产物,且在PolyⅠ∶C刺激和腺病毒感染时受体分子的表达谱不同。

关键词：犬肾细胞系干扰素受体转录表达水平

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弓形虫RH株感染比格犬动物模型的建立

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实验动物科学 2022年第3期39卷 6-10,32页

作者：问婉欣陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室国家禽类实验动物资源库哈尔滨150069

目的建立实验用犬人工感染人源强毒力型弓形虫的发病模型。方法将3只76日龄人工哺乳、正压隔离器内生长的实验用比格犬腹腔注射1.5×10^(7)个RH株速殖子,每日2次检测直肠体温、采集口腔拭子、直肠拭子,感染8 d后(8 dpi)安乐死所有... 详细信息

目的建立实验用犬人工感染人源强毒力型弓形虫的发病模型。方法将3只76日龄人工哺乳、正压隔离器内生长的实验用比格犬腹腔注射1.5×10^(7)个RH株速殖子,每日2次检测直肠体温、采集口腔拭子、直肠拭子,感染8 d后(8 dpi)安乐死所有动物。利用PCR检测拭子和血液中的弓形虫B1基因,利用荧光定量法检测8 dpi犬主要组织脏器中弓形虫529 bp重复片段的拷贝数,并对主要脏器进行组织病理学检测。结果结果表明3只实验犬在4~5 dpi均出现了一过性体温升高,轻微腹泻;2~6 dpi的咽拭子或肛拭子中能检测到弓形虫B1基因的核酸,且肛拭子阳性率高于咽拭子;8 dpi剖检后,均产生较多腹水;肝组织均出现明显的炎性变化;盲肠和肝中的弓形虫529 bp片段的核酸拷贝数最高。结论利用SPF级比格犬腹腔接种弓形虫RH株,主要引起一过性体温升高和短时腹泻,可导致肝组织变性和坏死,发病模型较温和。

关键词：刚地弓形虫比格犬发病模型

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基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α的结合能分析

基于分子对接方法的玉米赤霉烯酮和β-雌二醇分别与雌激素受体α...

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：张圆圆周妍刁晨曦陆涛峰赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室/实验动物与比较医学团队

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结... 详细信息

目的为玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）类雌激素作用的机理提供理论依据。方法利用绘图软件和对接软件考察ZEN和β-雌二醇（beta estradiol,E2）与鼠雌激素受体α（Estrogen Receptor alpha,ERα）的分子对接情况,分析两者与ERα的结合能。结果 E2和ZEN与ERα的结合能分别为-11.5 kcal·mol和-8.6 kcal·mol;两者都位于疏水性较强的活性口袋中,苯环都与Phe-404和Arg-394形成了CH-π和阳离子-π的相互作用;E2的羟基分别5个氨基酸形成氢键,其中一个羟基与水分子形成了保守的氢键。结论分子对接提供了E2和ZEN分别与ERα结合的相互作用力的可视化分析结果,证明了ZEN与ERα具有亲和力,但低于E2。

关键词：玉米赤霉烯酮雌激素受体α 分子对接结合能

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MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

MHC单倍体型SPF鸭的遗传学检测技术的优化

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队兽医生物技术国家重点实验室黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理... 详细信息

目的优化无特定病原体(SPF)主要组织相容性复合体(MHC)单倍型鸭HBW-SPF的遗传学稳定性检测技术。方法以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(国家禽类实验动物种子中心)培育并保存的F1至F5世代HBW-SPF鸭为基础,根据位于MHC区域的鸭抗原处理相关转运体分子(Tap)基因,分别基于Tap1基因组序列的短串联重复序列(STR)、Tap2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列,分析F1-F3代HBW-SPF鸭的遗传稳定性。结果 F0鸭的STR技术,在F1代完全稳定;F1代约2 kb的编码区序列存在多个变异点,且都有2个等位基因,根据STR标记确定的单倍型与毗邻的Tap2基因未完全连锁;利用基因组序列对F2代的遗传学检测中,B1和B2群鸭完全保守,B3鸭出现24个变异点,且皆为2个等位基因。利用Tap2基因组1-714和1-663 nt的核苷酸序列与F0代进行比对,结果 1-663 nt检测序列完全纯合。结论根据Tap2基因组的1-663 nt的核苷酸序列区域建立的分型技术,适合MHC单倍型SPF鸭的遗传学质量监测。

关键词：主要组织相容性复合体无特定病原体单倍体型鸭抗原处理相关转运体

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鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体的制备及其初步应用

鸭抗原处理相关转运体单克隆抗体的制备及其初步应用

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2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：王兴童孟兴佟相慧陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,... 详细信息

为制备鸭抗原处理相关转运体（TAP）肽结合区（PBD）特异性单克隆抗体（mAb）并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达鸭截短的TAP2蛋白（TAP2PBD）,并对表达的TAP2PBD进行纯化免疫BAIB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合,以原核表达纯化的TAP2PBD蛋白为检测抗原,采用ELISA的检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗TAP2PBD的mAb杂交瘤细胞系（1A6）。该mAb亚型鉴定为IgM型,轻链为k链。免疫组化试验显示1A6可以特异性识别真核组织表达的TAP蛋白。通过截短表达TAP2PBD蛋白鉴定该mAb的抗原表位为NARHQMLQQAVLDATAGTGMVAQEAI,序列分析表明该抗原表位在鸭中保守。本研究制备的mAb首次利用鸭TAP蛋白特异性单抗检测到TAP蛋白在亚细胞水平的表达,为进一步研究鸭TAP同免疫遗传的关系奠定了基础。

关键词：鸭抗原处理相关转运体原核表达单克隆抗体

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兽用疫苗中实验动物替代方法的研究进展

兽用疫苗中实验动物替代方法的研究进展

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第八届北京实验动物科学国际论坛

本文介绍了兽用生物制品中非动物替代方法的应用及研究进展,并从兽用疫苗效力检验、安全检验方面介绍了部分兽用疫苗的非动物替代方法.同时对适合建立替代方法的兽用疫苗进行分析,以期为兽用疫苗替代方法研究提供参考.

关键词：兽用疫苗效力检验安全检验非动物实验

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原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

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实验动物科学 2017年第3期34卷 1-5页

作者：王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 详细信息

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词：鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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