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畜牧兽医学报 2006年第12期37卷 1323-1327页

作者：程宇邓小芸高玉龙高宏雷林欢王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病实验室哈尔滨150001

用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4... 详细信息

用纯化的原核表达的IBDVVP3蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDVVP3抗体的4株（HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E）杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDVVP3蛋白反应，细胞上清EuSA效价均在5．0×10^2以上，腹水EuSA效价为6．4×10^6以上；相加ELISA及肽扫描结果表明，4株中仅HRB-7C和HRB-10E2株单抗针对的抗原表位相近，并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。

关键词：传染性法氏囊病病毒单克隆抗体抗原表位

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传染性腔上囊病病毒VP3蛋白模拟表位的筛选

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中国兽医科学 2006年第10期36卷 791-794页

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐程宇王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩... 详细信息

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗,从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑,通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测,共选出13个单克隆噬菌斑,经噬菌体gⅢ部分基因的核苷酸序列测定,确定了8个15肽为IBDV抗原表位。这8个15肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与IBDV Gx(Gen-Bank登录号:AY444873)VP3的氨基酸序列相同,但二级结构上均以β折叠为主,并且与单抗的结合可被VP3蛋白有效地抑制。证实,筛选的是IBDV VP3的模拟表位。

关键词：传染性腔上囊病病毒 VP3蛋白抗原表位噬菌体随机15肽库筛选

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传染性法氏囊病病毒非结构蛋白VP5的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国生物工程杂志 2006年第10期26卷 30-35页

作者：张宁高宏雷高玉龙李俊山冉多良王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学乌鲁木齐830052

利用PCR技术,从传染性法氏囊病病毒(IBDV)Gx、Gt毒株中分别扩增出VP5基因,将其克隆到表达载体pET30a、pET28a中。经PCR、酶切和序列分析鉴定获得重组质粒命名为pET28a-GtVP5、pET30a-GxVP5。将pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主菌... 详细信息

利用PCR技术,从传染性法氏囊病病毒(IBDV)Gx、Gt毒株中分别扩增出VP5基因,将其克隆到表达载体pET30a、pET28a中。经PCR、酶切和序列分析鉴定获得重组质粒命名为pET28a-GtVP5、pET30a-GxVP5。将pET30a-GxVP5、pET28a-GtVP5分别转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功表达了约24kDa的Gx-VP5及23kDa的Gt-VP5融合蛋白,它们都以包涵体形式存在。将Gx-VP5纯化后的蛋白免疫8周龄BALB/c雌鼠,ELISA分析表明制备的抗血清效价在1∶25600以上,Westernblot分析VP5表达产物能与抗6×HismAb及抗IBDV多克隆抗血清发生反应,具有良好的免疫反应特异性。

关键词：传染性法氏囊病病毒非结构蛋白 VP5 克隆表达多克隆抗体

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NDV F_(48) E_9和La Sota毒株F蛋白B细胞抗原优势表位区段的鉴定和免疫原性比较

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中国生物工程杂志 2006年第9期26卷 24-31页

作者：张海玲刘培欣曹殿军闫丽辉孙建宏冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 新疆农业大学乌鲁木齐830052

对预测的NDVF48E9强毒株和LaSota疫苗株F蛋白优势表位进行比较分析。根据预测结果设计克隆了两个毒株F蛋白各4段表位区,分别将每个毒株的4段表位区连接到原核表达载体上进行了体外表达,鉴定得到4段多肽的大小分别是P1∶8.0kDa、P2∶10.8... 详细信息

对预测的NDVF48E9强毒株和LaSota疫苗株F蛋白优势表位进行比较分析。根据预测结果设计克隆了两个毒株F蛋白各4段表位区,分别将每个毒株的4段表位区连接到原核表达载体上进行了体外表达,鉴定得到4段多肽的大小分别是P1∶8.0kDa、P2∶10.8kDa、P5∶13.5kDa、P6∶10.5kDa。应用F48E9和LaSota特异性抗血清对表达各肽段进行了抗原性鉴定,P1、P2、P5、P6段均呈阳性反应,表明其中含有线性B细胞表位。其中F48E9P5(FP5)和LaSotaP5(LP5)与血清反应时有明显差异。FP5和LP5与鸡IL-18成熟肽(mChIL-18)蛋白以不同组合免疫SPF鸡,ELISA检测各组的免疫活性,结果发现FP5与mChIL-18蛋白联合免疫组的抗体水平高于LP5与mChIL-18蛋白联合免疫组、FP5、LP5单独免疫组;用NDVF48E9株攻毒结果显示FP5具有20%的保护率,说明P5段与F蛋白免疫原性相关,而LaSotaP5不能抵抗强毒的攻击,证明该表位区域在两个毒株之间存在着免疫原性差异。

关键词：新城疫病毒融合蛋白抗原表位肽段

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猪γ干扰素基因真核重组表达质粒的构建及活性测定

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北京林业大学学报 2006年第S2期28卷 101-104页

作者：张立娜刘培欣曹殿军闫丽辉贾竞波危艳武东北林业大学野生动物资源学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN... 详细信息

以含有全长猪γ干扰素基因的质粒为模板,通过PCR方法扩增猪γ干扰素并引入酶切位点,酶切后与PCI真核表达载体连接在一起,测序后经比较,所扩增序列同Genebank报道的IFN-γ序列同源性为99·8%.将重组质粒转染PK细胞,检测所转染的pIFN-γ的抗病毒活性.试验结果表明,转染pIFN-γ试验组与正常细胞接毒对照组比较有显著差异,说明所构建的重组质粒转染后具有抗病毒作用.

关键词：猪γ干扰素真核表达活性测定

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

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中国兽医科学 2006年第11期36卷 880-884页

作者：谭斌刘长明危艳武张超范刘永刚冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比... 详细信息

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒免疫过氧化物酶单层细胞试验

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鹅细小病毒vp基因片段的原核表达及抗血清的制备

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中国病毒学 2006年第6期21卷 581-584页

作者：卲昱昊王静王懂帅韩宗玺刘胜旺冉多良孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 甘肃省商业科技研究院甘肃兰州730020 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-... 详细信息

以鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3’端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-TSimple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1。筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和HindⅢ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-30a,阳性重组质粒经确证性序列测定,证明外源片断插入到pET-30a的预期位置。将其转入大肠杆菌BL21,经终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE表明外源基因获得表达,融合蛋白分子量约为34kDa。将诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,经超声处理后离心,利用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。用纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗该融合蛋白的抗血清。Westernblotting结果表明制备的兔抗血清与该融合蛋白及亲本病毒的结构蛋白都具有反应性。结合前期工作进展对GPVVP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位。

关键词：鹅细小病毒 vp基因片断原核表达抗血清

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利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位

利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位

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2006中国科协年会

作者：邓小芸高玉龙高宏雷祁小乐程宇王晓艳王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

传染性法氏囊病(Infectous bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的以侵害雏鸡中枢免疫器官——法氏囊为主要特征的传染病。IBDV属双RNA 病毒科,基因组包括大(A)小(B)两个节段,编码5... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectous bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的以侵害雏鸡中枢免疫器官——法氏囊为主要特征的传染病。IBDV属双RNA 病毒科,基因组包括大(A)小(B)两个节段,编码5种病毒蛋白:VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。VP1由B节段编码,具有依赖RNA的RNA聚合酶活性。其他4种病毒蛋白由A节段编码,VP4为病毒自身蛋白酶,VP5的功能尚不明确,VP2和VP3是病毒的主要结构蛋白,构成病毒衣壳。虽然VP2是IBDV主要的毒力基因,也是构象表位的集中区,但越来越多的证据佐证了VP3也是IBDV重要的毒力

关键词：传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP3 抗原表位噬菌体随机15肽库

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传染性法氏囊病病毒超强毒株Gx与致弱株Gt多聚蛋白的原核表达

传染性法氏囊病病毒超强毒株Gx与致弱株Gt多聚蛋白的原核表达

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2006中国科协年会

作者：高宏雷高玉龙李俊山张宁王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)属于双RNA病毒科禽双RNA病毒属,单层衣壳,无囊膜,呈20面体立体对称,其直径55～65 nm。IBDV的基因组由A、B两个片段的双链RNA组成,基因组中小片段(B)编码VP1,大片段(A)编码两... 详细信息

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)属于双RNA病毒科禽双RNA病毒属,单层衣壳,无囊膜,呈20面体立体对称,其直径55～65 nm。IBDV的基因组由A、B两个片段的双链RNA组成,基因组中小片段(B)编码VP1,大片段(A)编码两个开放阅读框,大阅读框编码病毒蛋白前体NH2—VPX—VP4—VP3—COOH,本文写为VP243,VPX进一步加工为VP2,VPX、VP2和VP3形成病毒衣壳。小阅读框编码非结构蛋白VP5。VP1是病毒RNA聚合酶,VP2和VP3是IB-

关键词：传染性法氏囊病病毒多聚蛋白表达

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传染性法氏囊病病毒非结构蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

传染性法氏囊病病毒非结构蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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2006中国科协年会

作者：张宁高宏雷高玉龙王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种危害鸡的急性、高度接触性、病毒性的传染病,尤其是B淋巴细胞是主要的靶细胞,法氏囊是受影响最大组织。IBD能... 详细信息

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种危害鸡的急性、高度接触性、病毒性的传染病,尤其是B淋巴细胞是主要的靶细胞,法氏囊是受影响最大组织。IBD能引起雏鸡严重的、长期的免疫抑制及多种疫苗的免疫失败,增加病原体感染的易感性,降低幸存鸡的生长率,是目前影响世界养禽业中的一种非常重要的疾病。IBDV是双链RNA病毒,属于双RNA病毒科(Bironviridae)禽双RNA病毒属(Avibincvirus),其基因组由A、B两个节段组成,B节段(约2.8kb)编码VP1蛋白,为RNA依赖的RNA聚合酶。A节段

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP5 克隆表达多克隆抗体

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