检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2013年第3期35卷 197-201页

作者：赵云胡森乔祖建刘文兴覃晓琳步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)... 详细信息

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)作为标记,筛选缺失突变株(M28-ΔB0107)。M28-ΔB0107经过20余代传代培养,Kanr表达稳定。将M28-ΔB0107与M28以106cfu剂量腹腔接种小鼠,进行体内致病性试验。结果显示,M28-ΔB0107感染组小鼠脾脏荷菌量显著低于亲本M28株感染组,感染6周时,前者低于后者近10倍(p<0.05);而且M28-ΔB0107感染组脾脏重量也显著低于M28强毒株组(p<0.05);小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)感染能力试验结果表明,突变株与亲本株无明显差异(p>0.05)。

关键词：布鲁氏菌 O抗原聚合酶 B0107

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表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 267-270页

作者：张翠云赵晶陈韬孙恩成刘霓红杨涛徐青元王文世魏鹏吴东来湖南农业大学动物医学学院湖南长沙410128 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经PmeⅠ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经Pac... 详细信息

为构建表达西尼罗病毒(WNV)E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,经PmeⅠ酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组,构建重组质粒pAd-WNV-E;将其经PacⅠ酶切线性化后通过脂质体介导转染于人胚肾细胞Ad-293细胞,制备重组腺病毒rAd-WNV-E;经western blot以及间接免疫荧光鉴定表明WNV E蛋白在Ad-293细胞中获得有效表达。病毒滴度测定试验结果显示,该重组腺病毒与野毒型腺病毒复制能力相近。该重组腺病毒的构建为进一步研制表达WNV E蛋白的重组腺病毒的疫苗奠定了基础。

关键词：西尼罗病毒 E蛋白重组腺病毒

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鸭坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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畜牧与兽医 2013年第10期45卷 6-9页

作者：林源柳金雄陈普成姜永萍华荣虹邬丽李奇蒙丁蕾蕾刘毅刘道新陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128 湖南省动物疫病预防与控制中心湖南长沙410007

用原核表达并纯化的鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,筛选到1株分泌针对DTMUV的E蛋白的单抗融合细胞,并命名为LY12。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)分析表明,所获得细... 详细信息

用原核表达并纯化的鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,筛选到1株分泌针对DTMUV的E蛋白的单抗融合细胞,并命名为LY12。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)分析表明,所获得细胞分泌的抗体只与DTMUV的E蛋白发生特异性反应,与日本脑炎病毒(JEV)和西尼罗病毒(WNV)无交叉反应。进一步鉴定该单抗的抗体亚类为IgG1,轻链为κ链。抗E蛋白单克隆抗体的制备为DTMUV的诊断和相关基础研究奠定了基础。

关键词：鸭坦布苏病毒 E蛋白单克隆抗体鉴定

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表达羧基端融合HA表位N蛋白的重组小反刍兽疫病毒的拯救及鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第6期35卷 456-459页

作者：殷倩倩陈伟业胡倩倩温志远葛金英王喜军步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100 南京农业大学动物医学院江苏南京210095

为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码H A表位(YPYD VPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cD N A N基因的3'末端构建感染性克隆质粒pN g75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGG... 详细信息

为构建小反刍兽疫(PPR)标记疫苗,本研究以PPR病毒(PPRV)反向遗传操作系统为基础,将编码H A表位(YPYD VPDYA)的序列融合连接于PPRV感染性全长cD N A N基因的3'末端构建感染性克隆质粒pN g75/1-GFP/NHA,将其与辅助质粒pCAGGS-N、pCAGGS-P、pCAGGS-L共转染V ero细胞救获表达融合H A表位N蛋白的重组病毒rPPRV/GFP/NHA。W estern blot和间接免疫荧光试验表明融合H A表位的N蛋白获得正确表达;体外生长动力学试验分析表明rPPRV/G FP/N H A的生长最高滴度可达106.2TCID50/m L,能够满足标记疫苗的使用要求。本研究结果为进一步研制PPRV标记疫苗奠定基础。

关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白 HA表位标记疫苗

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实验用巴马小型猪的遗传多样性研究

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黑龙江畜牧兽医 2013年第8期 43-46,192页

作者：武永淑张海燕杨柳杨超李海超廉传江韩建林曲连东韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物研究室/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730070 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业部畜禽遗传资源与利用重点开放实验室北京100193 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

为了研究屏障环境下小规模保存实验用巴马小型猪的遗传学背景,试验运用19个微卫星基因座,对长期在屏障环境下封闭饲养的同世代、同父本但不同母本的3窝巴马小型猪(BM/HVRI猪)进行分子群体遗传学检测,计算平均等位基因数(Na)、平均观察... 详细信息

为了研究屏障环境下小规模保存实验用巴马小型猪的遗传学背景,试验运用19个微卫星基因座,对长期在屏障环境下封闭饲养的同世代、同父本但不同母本的3窝巴马小型猪(BM/HVRI猪)进行分子群体遗传学检测,计算平均等位基因数(Na)、平均观察杂合度(Ho)和平均期望杂合度(He),检验Hardy-Weinberg平衡并进行遗传分化分析。结果表明:该群体的Na、Ho和He分别为3.05±0.71,0.703 7±0.019 2和0.574 6±0.023 1,3窝仔猪的He分别为0.558 3±0.029 3,0.552 0±0.037 3和0.549 2±0.030 8,且差异不显著(P>0.05);经完全枚举法检验,A窝和C窝分别有3个和5个基因座偏离Hardy-Weinberg平衡;经U检验,A窝和C窝分别有4个和6个基因座存在杂合子过剩,仅C窝1个基因座表现出杂合子缺失现象。说明该猪群遗传多样性较低,处于低度杂合状态,窝系之间不存在遗传分化。

关键词：屏障环境实验用巴马小型猪遗传多样性

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7株H3亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析

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畜牧与兽医 2013年第12期45卷 6-10页

作者：黄建龙邓国华谭丹王昌建朱春霞范仲鑫何世成汪洪冰张菁邱立新鲁杏华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南省动物卫生监督所湖南长沙410007

采用RT—PCR技术对近年来洞庭湖区分离的H3亚型禽流感毒株的HA基因进行扩增、克隆和测序，并对所得全序列进行同源性和遗传演化分析。结果显示：本试验分离到的7株H3亚型禽流感病毒的HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入，属于低... 详细信息

采用RT—PCR技术对近年来洞庭湖区分离的H3亚型禽流感毒株的HA基因进行扩增、克隆和测序，并对所得全序列进行同源性和遗传演化分析。结果显示：本试验分离到的7株H3亚型禽流感病毒的HA裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入，属于低致病性病毒；7株H3亚型毒株之间HA基因核苷酸同源性在87．6％～98．4％之间，推导氨基酸序列的同源性在93．7％～99．1％之间；从HA基因遗传演化关系来看，7株病毒毒可分为三大分支，与以往从蒙古、韩国、越南、西伯利亚及我国香港、广西、三江等地分离的H3亚型毒株关系密切，提示其HA基因来源非常复杂。

关键词： H3亚型禽流感 HA基因同源性遗传演化

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环洞庭湖区鸭场低致病性禽流感监测分析

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中国家禽 2013年第17期35卷 58-60页

作者：黄建龙王昌建王卫国邓国华谭丹范仲鑫朱春霞何世成汪洪冰刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410129 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为了解环洞庭湖区鸭场低致病性禽流感隐性带毒情况,2011~2012年先后3次对东洞庭湖、南洞庭湖和西洞庭湖区的149个鸭场进行监测,在40个鸭场检测到低致病性禽流感病毒,场间阳性率为26.8%,其中有2个鸭场混合感染多种低致病性禽流感病毒。... 详细信息

为了解环洞庭湖区鸭场低致病性禽流感隐性带毒情况,2011~2012年先后3次对东洞庭湖、南洞庭湖和西洞庭湖区的149个鸭场进行监测,在40个鸭场检测到低致病性禽流感病毒,场间阳性率为26.8%,其中有2个鸭场混合感染多种低致病性禽流感病毒。在鸭拭子和环境拭子中共分离到有H3、H4、H6、H9、H10、H11和H12等7种亚型的低致病性禽流感病毒,其中H3和H4亚型的分离率较高,拭子的病毒分离率为3.88%,表明在洞庭湖区鸭场低致病性禽流感隐性带毒情况较为严重。

关键词：环洞庭湖区低致病性禽流感场间阳性率分离率监测

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禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

禽流感病毒M2e多表位疫苗的构建和免疫原性检测

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2013新型疫苗、重组蛋白及多肽药物研发注册与质量评价研讨会

作者：刘明张新涛刘春国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感参考实验室

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱... 详细信息

为进行禽流感病毒M2蛋白胞外功能区M2e表位疫苗的免疫效果,通过PCR技术构建了M2e表位多拷贝串联基因片断,将其克隆到原核表达载体,经酶切鉴定和DNA测序鉴定正确后,获得重组表达质粒pMAL-3M2e。重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导后经SDS-PAGE和Western blot鉴定得到与预期值相符的重组融合蛋白。融合蛋白得到高效可溶性表达,表达量约占菌体表达量的60%。间接ELISA表明,通过MBP树脂柱分离纯化的重组蛋白具有较好的免疫原性,该试验为M2e亚单位疫苗研究的进一步开展奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 M2e表位疫苗免疫原性

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长沙市活禽批发市场鸡鸭禽流感病毒H5抗体监测

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动物医学进展 2013年第5期34卷 131-133页

作者：黄建龙范仲鑫邓国华王辉王昌建何世成汪洪冰邱立新鲁杏华刘道新湖南省动物疫病预防控制中心湖南长沙410007 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 长沙市畜禽产品质量检测中心湖南长沙410013

为了解批发市场活禽禽流感病毒H5抗体水平,对长沙市2家批发市场活禽禽流感病毒H5抗体进行了监测。结果显示,2008年-2011年从长沙市活禽批发市场所采集的禽血清禽流感病毒H5抗体水平比较低,鸭血清抗体合格率为50.4%,鸡血清抗体合格率为58... 详细信息

为了解批发市场活禽禽流感病毒H5抗体水平,对长沙市2家批发市场活禽禽流感病毒H5抗体进行了监测。结果显示,2008年-2011年从长沙市活禽批发市场所采集的禽血清禽流感病毒H5抗体水平比较低,鸭血清抗体合格率为50.4%,鸡血清抗体合格率为58.1%。12月～3月份家禽血清禽流感病毒H5抗体平均水平比较低,这与禽流感易发于冬春季节这一流行病学特征一致,表明家禽的抗体水平与发病有一定的相关性。

关键词：活禽市场禽流感病毒 H5抗体

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我国2009-2013年H3亚型禽流感病毒表面基因分子特征

我国2009-2013年H3亚型禽流感病毒表面基因分子特征

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛

作者：关立峥邓国华李文辉谭丹崔鹏飞张曦朱占松王晶张芳陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨 150001

不同亚型间的禽流感病毒的多基因重组增加了我国南方家鸭中循环存在着的流感病毒的遗传多样性,有研究表明,H3 亚型禽流感病毒是家鸭中普遍存在着的流感亚型,而家鸭作为天然基因库与家禽之间的重要桥梁,其存在促进了流感病毒的传播与新... 详细信息

不同亚型间的禽流感病毒的多基因重组增加了我国南方家鸭中循环存在着的流感病毒的遗传多样性,有研究表明,H3 亚型禽流感病毒是家鸭中普遍存在着的流感亚型,而家鸭作为天然基因库与家禽之间的重要桥梁,其存在促进了流感病毒的传播与新型流感病毒的产生。

关键词：禽流感家鸭生物学特性

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