西尼罗热是由西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)引起的,通过蚊子传播的一种急性人畜共患传染病。此病毒可对人和动物构成严重威胁,并可导致严重的公共卫生问题。因此迫切需要研制一种高效、安全、廉价的新型疫苗来控制该病的流行。腺病...
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西尼罗热是由西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)引起的,通过蚊子传播的一种急性人畜共患传染病。此病毒可对人和动物构成严重威胁,并可导致严重的公共卫生问题。因此迫切需要研制一种高效、安全、廉价的新型疫苗来控制该病的流行。腺病毒载体以其安全高效,宿主范围广的特点,成为一种广泛应用的病毒载体,近年来在活载体疫苗的研制中得到了广泛的应用,并已获得良好的免疫效果。WNV膜蛋白(Envelope,E)是WNV主要的抗原结构蛋白,能诱导机体产生中和抗体,是决定病毒毒力的主要因素。为构建表达西尼罗病毒E蛋白的重组腺病毒,本实验将WNV-E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化到含有人5型缺陷腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞中,通过细菌内同源重组构建含有WNV-E基因pAD-WNV-E质粒的重组腺病毒,经PacⅠ酶切线性化后通过脂质体介导转染入人胚肾细胞AD-293细胞,获得重组腺病毒rpAD-WNV-E经PCR、Western blot及IFA鉴定,WNV-E蛋白在AD-293细胞中成功表达。经病毒滴度测定、一步生长曲线等实验发现该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低。本实验成功构建了表达WNV-E蛋白的重组腺病毒,可为后续研制WNV-E重组腺病毒疫苗奠定基础。
为鉴定禽流感病毒(AIV)感染状态下的差异表达蛋白,本研究将H5N1亚型AIV感染组与对照组小鼠肺组织蛋白样品分别进行双向电泳分离,并采用ImageMaster 2D Platinum 6.0软件进行分析。在AIV感染72h后,共有9个表达差异显著的蛋白点(ratio>2,p<0.05),而且该蛋白在感染组均呈上调表达。将差异蛋白进行串联质谱分析,并对其中7个蛋白进行鉴定,包括:interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 3(IFIT-3)、ATP依赖的干扰素反应蛋白1(ADIR1)、γ干扰素诱导的p47鸟苷三磷酸酶(IRG)、T细胞受体a TA27、气味受体S86、胞苷单磷酸激酶2(Cmpk2)和肌球蛋白。将前3个蛋白基因采用荧光定量PCR方法进行mRNA水平的验证,所获得的结果与双向电泳结果一致。本研究为在蛋白质组水平进一步分析H5N1亚型AIV与宿主相互作用奠定了基础。
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