检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2010年第2期40卷 150-157页

作者：张美晶王亮李媛董慧姜海芳陈超曹培丽郭丹辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最... 详细信息

以大肠杆菌表达的pET-30a-P97C重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备针对猪肺炎支原体P97C末端蛋白的单克隆抗体,并将其与截短表达的P97C末端蛋白进行免疫印迹分析,初步鉴定了P97C末端蛋白的抗原表位。进一步采用肽探针扫描技术确定最小抗原决定区域,并通过生长抑制试验及抗黏附特性试验对抗原表位进行了分析。结果显示,获得2株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株A3C9和B4D5,并成功鉴定出P97C末端蛋白的2个独立线性表位F905PMAFSY911和G991TPNQGKKAE1000。2株单抗对猪肺炎支原体的生长均有一定的抑制作用,但对其黏附特性没有显著抑制作用。

关键词：猪肺炎支原体单克隆抗体抗原表位肽扫描生长抑制试验

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牛支原体套式PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2009年第9期31卷 709-711页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛... 详细信息

为建立牛支原体检测方法,本研究采用牛支原体的oppD/F基因的两对特异性引物,建立了牛支原体的套式PCR检测方法。该套式PCR可以从100ccu/mL(color change unit颜色变化单位)的牛支原体培养物中检出目的片段;同时还可以从病牛肺脏、病牛鼻拭子中扩增出目的片段,而且结果与病原分离结果一致。特异性试验结果表明,该方法与其它支原体无交叉反应,是一种特异性强、敏感性高的牛支原体检测方法。

关键词：牛支原体无乳支原体牛传染性胸膜肺炎套式PCR

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牛霉形体PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2009年第5期39卷 416-420页

作者：李媛董惠张美晶陈超曹培丽郭丹姜海芳辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体... 详细信息

参考GenBank中牛霉形体和无乳霉形体P81基因的序列差异,设计了针对牛霉形体P81基因的PCR引物,建立了牛霉形体PCR检测方法,并对该方法进行了敏感性和特异性试验。该方法可以从100ccu/mL(ccu:color change unit,颜色变化单位)的牛霉形体培养物中检出目的片段;经对丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)PG1株、丝状霉形体丝状亚种LC型(MmmLC)Y-goat株、山羊霉形体山羊亚种(Mccp)87001株、无乳霉形体(***)PG2株、绵羊肺炎霉形体Y-98株等亲缘关系相近的霉形体纯培养物检测,结果证实该方法具有良好的特异性。利用建立的PCR检测方法可以从人工感染牛的鼻拭子和临床发病牛肺中扩增出目的片段,与分离培养结果完全符合,本方法为国内首次建立的敏感、特异、快速的牛霉形体PCR检测方法。

关键词：牛霉形体牛传染性胸膜肺炎聚合酶链式反应

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牛支原体双重PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2010年第8期32卷 599-602页

作者：刘洋李媛董惠张美晶姜海芳陈维辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150001

为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(*** *** SC),本实验通过优化***特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别***和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法能够分别由***和MmmSC扩增得... 详细信息

为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(*** *** SC),本实验通过优化***特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别***和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法能够分别由***和MmmSC扩增得到528bp和270bp片段。敏感性试验结果显示该方法检测***和MmmSC培养物的最低浓度分别为106cfu/mL和105cfu/mL。特异性试验结果显示,该方法对无乳支原体代表株PG2、丝状支原体丝状亚种LC型代表株Y-goat、山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp、绵羊支原体Y-98、猪鼻支原体BST-7、巴氏杆菌以及结核分枝杆菌扩增结果均为阴性。应用该方法对临床病料的检测结果与培养鉴定结果的符合率为100%,表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于临床检测。

关键词：牛支原体丝状支原体丝状亚种SC 双重PCR

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牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2012年第3期34卷 184-187页

作者：宋志强李媛孙文静刘洋邹晓辉陈维周玉梅辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多... 详细信息

牛支原体(***)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前***粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,***表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多个***基因,最终获得了一个表达纤溶酶原结合蛋白的新基因,并命名为P18。该基因表达大小约为67ku的重组蛋白。通过western blot鉴定,重组表达的P18蛋白可以被***抗体识别。进一步的试验表明,P18蛋白还具有纤溶酶原结合活性,从而推测该基因表达的蛋白可能是***的一个粘附相关因子。

关键词：牛支原体亚克隆表达粘附相关因子

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3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 448-451页

作者：刘洋陈维宋志强孙文静李媛邹小辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为比较3种抗牛支原体(***)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测***血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的... 详细信息

为比较3种抗牛支原体(***)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测***血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%。一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性。此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性。因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于***检测和开展流行病学调查。

关键词：牛支原体 ELISA试剂盒诊断

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中国西部和北部边境4省区牛支原体血清流行病学调查及分析

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 717-721页

作者：李媛闫磊刘桐辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130018

为了解我国边境地区牛支原体的流行情况,本研究利用间接ELISA对2017年~2018年间收集自我国西部和北部4个省区的8 832份临床健康牛血清样品进行了牛支原体血清抗体的检测,并从地区、年份、季节、牛的品种及不同生长阶段牛对结果做了统计... 详细信息

为了解我国边境地区牛支原体的流行情况,本研究利用间接ELISA对2017年~2018年间收集自我国西部和北部4个省区的8 832份临床健康牛血清样品进行了牛支原体血清抗体的检测,并从地区、年份、季节、牛的品种及不同生长阶段牛对结果做了统计分析。结果显示,两年各地牛支原体血清抗体阳性率平均为8.37%(396/4 416,2017)、15.67%(760/4 416,2018),其中两年阳性率最高的省份均为云南(15.76%2017,36.32%2018),其次依次是内蒙古(9.15%2017,18.3%2018)、新疆(8.96%2017,12.22%2018)、西藏(1.99%2017,1.99%2018)。对检测数据按季节分析结果显示,春季牛支原体抗体阳性率最高,达18.31%(809/4 416),高于夏季的7.86%(347/4 416)。对检测数据从牛的品种因素分析显示,黄牛和奶牛血清抗体阳性率较高,分别为13.3%(183/1 375)和15.6%(159/1 021),显著高于水牛的3.85%(20/520)和牦牛的1.99%(22/1 104)(p<0.01)。从不同生长阶段牛的分析显示,与青年牛和成年牛相比较,犊牛牛支原体抗体的阳性率更高为19.90%(195/980)(p<0.01),犊牛对牛支原体更易感。本研究结果表明这几个地区均存在牛支原体抗体阳性牛,且2018年比2017年牛血清抗体阳性率大幅度增加(p<0.01)。本研究首次检测并分析了我国北部和西部边境地区牛支原体的血清流行病学状况,为明确牛支原体在我国的流行状况及制定有效防治措施提供了参考依据。

关键词：牛支原体抗体水平调查与分析 ELISA

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牛霉形体免疫相关性蛋白P51的筛选与鉴定

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中国兽医科学 2011年第5期41卷 490-495页

作者：李媛陈维呼太飞刘洋宋志强孙文静辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省勃利县动物卫生监督所黑龙江勃利154500

为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示... 详细信息

为了筛选免疫原性蛋白,建立牛霉形体的快速诊断方法,利用二维凝胶(2-D)电泳、Western-blot分析及蛋白质谱分析,筛选出一个免疫相关性蛋白P51。以牛霉形体中国分离株Hubei-1为模板,扩增了p51基因,并克隆到原核表达载体pET32a上。结果显示,重组蛋白pET32a-p51与牛霉形体阳性血清的Dot-blotting试验结果为阳性,而Western-blotting试验结果为阴性。以pET32a-p51重组蛋白为包被抗原的ELISA试验表明其能与自然感染和人工感染牛霉形体的阳性血清发生特异性反应,而与灭活疫苗免疫的阳性血清不发生特异性反应,与牛传染性胸膜肺炎的阳性血清没有交叉反应。表明P51可能是牛霉形体特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白,是一种有前景的诊断用抗原。

关键词：牛霉形体牛传染性胸膜肺炎二维凝胶电泳质谱

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牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的特性研究

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中国预防兽医学报 2013年第4期35卷 255-258页

作者：邹晓辉李媛汪洋宋志强孙文静周玉梅白帆吴金迪刘素丽辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

牛支原体(***)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌B... 详细信息

牛支原体(***)是牛支原体肺炎的病原体,能够引起犊牛肺炎等多种疾病。研究表明,牛支原体粘附蛋白可能在牛支原体致病过程中起关键作用。本研究选取了牛支原体的一个假定膜蛋白,对其基因进行PCR扩增,并连接到pET-28a载体,转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导获得了以可溶形式表达的重组蛋白,该重组蛋白大小约为36 ku,将其命名为P33。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。重组蛋白与胎牛肺细胞(EBL)作用,通过激光共聚焦显微镜观察到了明显的粘附作用,而ELISA试验证明该蛋白的这种粘附为特异性粘附,从而证明该蛋白是牛支原体的一个粘附相关蛋白。

关键词：牛支原体原核表达 ELISA

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牛支原体的α烯醇化酶的功能研究

牛支原体的α烯醇化酶的功能研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：李媛宋志强刘洋孙文静邹晓辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室／国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室，黑龙江哈尔滨 150001 东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150000

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重... 详细信息

牛支原体是牛支原体相关疾病的病原。最近的研究表明很多细菌表面存在的可结合纤溶酶原的结构能够加强细菌在宿主体内的侵袭力与传播。烯醇化酶是一种普遍存在与生物体内的糖酵解酶并存在在不同的原核以及真核生物的细胞表面作为一种重要的纤溶酶原结合蛋白从而与细菌粘附宿主细胞的能力相关。我们第一次证明了牛支原体细胞表面具有结合纤溶酶原的能力。并且我们在大肠杆菌中以可溶性形式表达出重组的牛支原体烯醇化酶。通过抗牛支原体烯醇化酶抗血清应用western blot与EusA方法牛支原体中烯醇化酶被证明同时存在于细胞的胞浆部分与胞膜部分。同时，牛支原体烯醇化酶被证明是牛支原体膜蛋白组分中的最主要的一种纤溶酶原结合蛋白。所有的实验数据表明与表面相关的牛支原体烯醇化酶能够加强牛支原体粘附宿主细胞的能力。

关键词：牛支原体 α烯醇化酶功能分析细菌粘附宿主细胞

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