检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2010年第3期37卷 261-268页

作者：姜成刚马建高旭林跃智赵立平华育平刘娣周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院畜牧研究中心博士后工作站哈尔滨150086 东北林业大学博士后流动站哈尔滨150086 延边大学农学院动物医学系延吉133002

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了.研究发现,EIAV疫苗株EIAVFDDV12的跨膜蛋白gp45在马体内发生高频率261W位点翻译终止突变,使该蛋白质C端出现154个氨基酸的截短.为了探讨该截短对EIAV疫苗株... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)减毒疫苗是世界首例慢病毒疫苗,但其作用机理尚不明了.研究发现,EIAV疫苗株EIAVFDDV12的跨膜蛋白gp45在马体内发生高频率261W位点翻译终止突变,使该蛋白质C端出现154个氨基酸的截短.为了探讨该截短对EIAV疫苗株生物学特性的作用,以EIAV弱毒疫苗株感染性克隆为骨干,构建了gp45截短型感染性病毒株,检测该截短突变对EIAV疫苗株在体外培养的马外周血单核细胞由来的巨噬细胞(MDM)、驴MDM和驴胎皮细胞(FDD)中的复制.实验结果表明,gp45截短型毒株在马和驴MDM中复制能力比未截短型毒株显著降低(P<0.01),特别是在马MDM中此差异更明显.相反,截短型毒株在FDD中的复制能力则显著高于未截短型毒株(P<0.01).此外,结果显示gp45截短型毒株在马MDM中的低水平复制降低了EIAV对其靶细胞诱导的凋亡.以上结果提示,EIAV疫苗的gp45截短型毒株是适应在体外FDD细胞中传代致弱的变异,该变异导致疫苗株在EIAV体内主要靶细胞巨噬细胞中复制能力的降低,导致毒力进一步减弱.

关键词：马传染性贫血病毒跨膜蛋白截短突变体外复制细胞凋亡

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番鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2009年第9期39卷 786-789页

作者：张云陈晓丹李永锋刘明葛明魏萍东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以纯化复性的原核表达的番鸭呼肠孤病毒(MDRV)σB蛋白为抗原免疫BALB/c雌性小鼠,按常规方法制备单克隆抗体,通过间接ELISA、Western-blot和免疫组织化学试验进行筛选及鉴定。结果显示,获得4株能够稳定分泌抗σB蛋白单克隆抗体的杂交瘤... 详细信息

以纯化复性的原核表达的番鸭呼肠孤病毒(MDRV)σB蛋白为抗原免疫BALB/c雌性小鼠,按常规方法制备单克隆抗体,通过间接ELISA、Western-blot和免疫组织化学试验进行筛选及鉴定。结果显示,获得4株能够稳定分泌抗σB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(A3F、B2B、C3E和D2G),其亚型分别属于IgG2bI、gG2bI、gM和IgM。采用小鼠体内诱生法制备的腹水均能与MDRV的σB蛋白发生特异性反应,表明,制备的单克隆抗体能够识别天然构象的σB蛋白。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 σB蛋白单抗

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胎儿弯杆菌表面蛋白SapA抗原单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2009年第5期31卷 409-411页

作者：赵海玲林靖凯杜艳芬刘慧芳司微王春来王聃赫明雷彭玮杨金国刘思国内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

用原核表达的重组胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(rSapA-N)免疫小鼠,采用细胞融合技术,共获得2株抗rSapA-N的单克隆抗体(MAb),经Ig亚类鉴定,均为IgG1,轻链为κ链;Western blot证实这2株MAb均能与rSapA-N发生特异性反应,而与其它蛋白则不发... 详细信息

用原核表达的重组胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(rSapA-N)免疫小鼠,采用细胞融合技术,共获得2株抗rSapA-N的单克隆抗体(MAb),经Ig亚类鉴定,均为IgG1,轻链为κ链;Western blot证实这2株MAb均能与rSapA-N发生特异性反应,而与其它蛋白则不发生反应;以这2株MAb的杂交瘤细胞制备腹水,效价达到1∶100 000和1∶60 000。本研究制备的MAb,为研究和检测胎儿弯杆菌提供了一种重要的手段。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白SapA 免疫单克隆抗体

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新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 584-586,591页

作者：郭巍闫妍王英原刘霓虹戴伶俐李雪峰赵立平张春生贺磊周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830001

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马... 详细信息

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马流行性感冒病毒北美洲流行株的同源性较高,命名为A/equine/XinjiangFuyun/3/2007(H3N8)。

关键词：马流行性感冒流感病毒 H3N8

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猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析

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中国预防兽医学报 2006年第5期28卷 507-510页

作者：于敏曲娟娟郭巍赵立平相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF... 详细信息

本试验采用RT-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF1区与IV型HEV核苷酸的同源性为82.6%～83.6%,氨基酸同源性为93.5%。ORF2区与IV型HEV核苷酸的同源性为87.0%～88.4%,氨基酸同源性为95.8%～97.4%。ORF3区与IV型HEV核苷酸的同源性为94.4%～96.5%,氨基酸同源性为90.3%～96.5%。其结果表明DQ1HEV株为IV型HEV。

关键词：猪戊型肝炎病毒克隆序列分析

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禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达

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中国兽医科学 2008年第10期38卷 856-859页

作者：迟磊刘思国王春来宫强赵昆刘建东王勇云孟克刘慧芳赵福广中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130118

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重... 详细信息

以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明,表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA。

关键词：禽分枝杆菌副结核亚种 map0862基因 map2154c基因重叠延伸剪接技术重组表达

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噬菌体展示技术与病毒抗原表位研究

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中国预防兽医学报 2009年第3期31卷 241-246页

作者：于永忠李集临徐香玲于力哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

噬菌体展示技术（Phage display technology）始创于1985年，Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了该技术。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合... 详细信息

噬菌体展示技术（Phage display technology）始创于1985年，Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因，使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面，从而创建了该技术。1988年Parmley等将已知抗原决定簇与PⅢ的N端融合呈现在噬菌体表面，可特异性地被抗体选中，因此提出了通过构建随机肽库了解抗体识别的抗原表位的设想。

关键词：噬菌体展示技术抗原表位 display 病毒基因插入丝状噬菌体 Smith 抗原决定簇

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结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结晶及其对分枝杆菌致病性的影响

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黑龙江畜牧兽医 2022年第11期 16-20,25,134页

作者：唐阳阳李华芳邵明珠藏鑫鑫崔子寅陈利苹党光辉刘思国吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队哈尔滨150069

为了研究结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结构、黏附途径及其在分枝杆菌致病过程中的作用,试验通过亲和层析法纯化Rv0394c蛋白,然后使用蛋白结晶筛选试剂盒筛选蛋白质结晶条件,通过亚细胞定位确定Rv0394c蛋白在分枝杆菌中的定位;通过激... 详细信息

为了研究结核分枝杆菌黏附蛋白Rv0394c的结构、黏附途径及其在分枝杆菌致病过程中的作用,试验通过亲和层析法纯化Rv0394c蛋白,然后使用蛋白结晶筛选试剂盒筛选蛋白质结晶条件,通过亚细胞定位确定Rv0394c蛋白在分枝杆菌中的定位;通过激光共聚焦显微镜观察Rv0394c蛋白与A549细胞的黏附情况;随后进行重组耻垢分枝杆菌(Rv0394c_Ms和pMV262_Ms)与A549细胞的黏附和黏附阻断试验并计数肺脏荷菌数;用重组耻垢分枝杆菌(Rv0394c_Ms和pMV262_Ms)滴鼻感染小鼠,在不同感染时间分别摘取肺脏观察病理变化并进行荷菌数计数。结果表明:成功获得Rv0394c蛋白。Rv0394c蛋白浓度为8 mg/mL时,在0.15 mol/L二水氯化钙-0.1 mol/L三水醋酸钠-pH值为4.6-15%异丙醇条件下,Rv0394c蛋白出现单晶生长。Rv0394c蛋白为胞外蛋白且能通过透明质酸(HA)黏附于A549细胞表面;与pMV262_Ms相比,Rv0394c_Ms黏附于A549细胞的数量极显著增加(P<0.01),用Rv0394c蛋白、HA和兔抗Rv0394c多克隆抗体处理的Rv0394c_Ms在A549细胞中的荷菌数极显著高于Rv0394c_Ms在A549细胞中的荷菌数(P<0.01)。在感染小鼠第4,8,14天,Rv0394c_Ms组在肺脏中的荷菌数极显著高于pMV262_Ms组(P<0.01);在第8天,Rv0394c_Ms组荷菌数极显著高于Rv0394c_Ms+HA组(P<0.01)。Rv0394c蛋白能诱导小鼠肺脏的病理损伤。说明黏附蛋白Rv0394c是通过透明质酸黏附于肺脏上皮细胞参与分枝杆菌致病过程的。

关键词：分枝杆菌黏附蛋白 Rv03914c 结晶致病性细胞黏附

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牛支原体双重PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2010年第8期32卷 599-602页

作者：刘洋李媛董惠张美晶姜海芳陈维辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150001

为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(*** *** SC),本实验通过优化***特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别***和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法能够分别由***和MmmSC扩增得... 详细信息

为鉴别牛支原体(Mycoplasma bovis)与丝状支原体丝状亚种SC(*** *** SC),本实验通过优化***特异性引物pMB81-1/pMB81-2s和MmmSC特异性引物SC1/SC2的退火温度,建立了鉴别***和MmmSC的双重PCR检测方法。该方法能够分别由***和MmmSC扩增得到528bp和270bp片段。敏感性试验结果显示该方法检测***和MmmSC培养物的最低浓度分别为106cfu/mL和105cfu/mL。特异性试验结果显示,该方法对无乳支原体代表株PG2、丝状支原体丝状亚种LC型代表株Y-goat、山羊支原体山羊肺炎亚种Mccp、绵羊支原体Y-98、猪鼻支原体BST-7、巴氏杆菌以及结核分枝杆菌扩增结果均为阴性。应用该方法对临床病料的检测结果与培养鉴定结果的符合率为100%,表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于临床检测。

关键词：牛支原体丝状支原体丝状亚种SC 双重PCR

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3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 448-451页

作者：刘洋陈维宋志强孙文静李媛邹小辉辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为比较3种抗牛支原体(***)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测***血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的... 详细信息

为比较3种抗牛支原体(***)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测***血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测。结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%。一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性。此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性。因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于***检测和开展流行病学调查。

关键词：牛支原体 ELISA试剂盒诊断

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