检索结果-内蒙古大学图书馆

结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

中国预防兽医学报 2023年第1期45卷 51-59页

作者：蔡珠明党光辉臧鑫鑫邵明珠唐阳阳鹿萍崔莹莹崔子寅刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(M... 详细信息

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0×10^(3)cfu/mL~1.0×10^(0)cfu/mL)的27份牛抗凝血和12份牛淋巴结组织样品,确定该方法对3种菌的检测限,结果显示该方法对3种菌的检测限均为1.0 cfu/mL~10.0 cfu/mL。将浓度为1.0×10^(6)cfu/mL的MB、MAP和MAA菌液分别单一、两两混合、三种菌混合感染BALB/c小鼠,5 d后,剖杀各组小鼠并取各组织及血液样品,同时采用该方法、常规单一PCR及细菌分离培养方法检测,比较三者的检测结果。结果显示,多重荧光定量PCR方法对不同感染组小鼠的各组织样品检出率为98.1%(212/216),常规单一PCR方法的检出率为81.5%(176/216),细菌分离培养的检出率为52.8%(114/216),多重荧光定量PCR与常规单一PCR的阳性符合率均为100.0%(176/176),与细菌分离培养鉴定结果的阳性符合率均为100.0%(114/114)。本研究首次建立了能够同时检测MTBC、MAP和MAA的Taq Man多重荧光定量PCR方法,其特异性强、敏感性高、重复性及稳定性好,检测性能强,可以用于临床各种样品的检测,为这3种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。

关键词：结核分枝杆菌复合群副结核分枝杆菌禽分枝杆菌禽亚种多重Taq Man荧光定量PCR

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马Viperin的抗EIAV功能初步研究及其重组腺病毒的构建

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 346-349页

作者：朱春辉汤艳东那雷付丽华王雪峰林跃智杜承周建华徐方宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

Viperin是一种细胞内抗病毒蛋白,可以被I型干扰素、多聚I:C、脂多糖及多种病毒诱导表达,在细胞内主要定位在内质网和脂滴,具有广谱的抗病毒功能。为研究马Viperin(eViperin)在抗病毒感染中的作用,本研究应用RT-PCR从马巨噬细胞中扩增eVi... 详细信息

Viperin是一种细胞内抗病毒蛋白,可以被I型干扰素、多聚I:C、脂多糖及多种病毒诱导表达,在细胞内主要定位在内质网和脂滴,具有广谱的抗病毒功能。为研究马Viperin(eViperin)在抗病毒感染中的作用,本研究应用RT-PCR从马巨噬细胞中扩增eViperin基因,并将其克隆于真核表达载体pDC315中构建重组质粒pDC-eViperin-Flag,将重组质粒转染293T细胞,western blot检测结果表明eViperin在293T细胞中正确表达。将该重组表达质粒与表达马传染性贫血病毒(EIAV)Gag前体蛋白(Gag precursor,Pr55gag)的表达质粒共转染293T细胞,转染48 h后western blot检测,结果显示实验组细胞培养上清中的Pr55gag含量显著低于空白对照组,表明eViperin具有抑制EIAV释放的作用。此外,将该重组表达质粒与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1,E3Cre共转染HEK293细胞,进一步构建拯救出表达eViperin的重组腺病毒,为研究eViperin的抗病毒功能研究奠定了基础。

关键词： Viperin 马马传染性贫血病毒重组腺病毒

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基于牛分枝杆菌新型重组蛋白的间接ELISA方法及其应用

基于牛分枝杆菌新型重组蛋白的间接ELISA方法及其应用

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2006中国科协年会

作者：郭设平刘思国王春来邵美丽宫强张秀华郭洋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室

牛结核病是一种严重危害奶牛业和人类健康的人兽共患传染病,控制和消灭牛结核病是消灭人结核病的前提和基础,而快速有效的诊断是控制牛结核病的关键。PPD皮试诊断方法作为OIE法定的方法具有无可比拟的优越性。但该方法不能有效区分其他... 详细信息

牛结核病是一种严重危害奶牛业和人类健康的人兽共患传染病,控制和消灭牛结核病是消灭人结核病的前提和基础,而快速有效的诊断是控制牛结核病的关键。PPD皮试诊断方法作为OIE法定的方法具有无可比拟的优越性。但该方法不能有效区分其他分枝杆菌致敏、卡介苗(BCG)免疫和牛分枝杆菌感染;在机体因结核病情严重或混合感染免疫抑制疾病时,PPD皮试则容易出现假阳性的结果;另外,它还必须在活体上试验,不便于大规模的流行病学调查,也不能应用于回顾性的流行病学分析。因此,它需要一种高特异性和高敏感性的血清学诊断方法来弥补这些不足。ELISA方法因其快速、简

关键词：牛结核病融合蛋白间接ELISA

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结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0827c(KmtR)调控靶点的初步研究

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中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 823-830页

作者：王慧崔莹莹唐祎依吕明月党光辉崔子寅曹俊宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 潍坊医学院生命科学与技术学院山东潍坊261053

结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化,从而形成持续感染,但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况,明确Rv0827c与已确定基因rv... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化,从而形成持续感染,但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况,明确Rv0827c与已确定基因rv3616c启动子结合的影响因素,本研究利用PCR从MTB H37Ra株基因组DNA中扩增rv0827c基因后构建重组质粒pET-22b-rv0827c,经IPTG诱导表达和纯化后获得重组蛋白Rv0827c(rRv0827c),同时以MTB H37Ra株基因组为模板扩增23种基因的启动子。通过体外凝胶迁移试验(EMSA)和体内染色质免疫共沉淀试验(ChIP)对rRv0827c与这23种基因启动子的相互作用及其互作区域进行检测,结果显示,rRv0827c与23种启动子DNA均能结合,且rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA,并结合于其大沟区域;通过EMSA对影响rRv0827c和rv3616c启动子DNA结合的金属离子进行筛选显示,Ni^(2+)、Co^(2+)在体外抑制rRv0827c与rv3616c启动子的结合,而Cr^(3+)则促进二者的结合;表面等离子共振试验(SPR)也进一步验证rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA;利用MEME软件分析23种启动子DNA核苷酸序列的保守性,结果显示,4G和10G为rv3616c启动子DNA与rRv0827c互作的关键核苷酸位点。本研究首次揭示了rRv0827c与多基因启动子DNA结合的广泛性,且直接调控rv3616c的表达,进而可能影响MTB的毒力。这对完善Rv0827c的调控网络及深入解析Rv0827c的调控功能奠定了理论基础。

关键词：结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0827c rv3616c

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结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324调控rv3597c的初步研究

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 691-698页

作者：唐祎依崔莹莹吕明月王慧党光辉崔子寅刘思国宋宁宁中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 潍坊医学院生命科学与技术学院山东潍坊261053

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET22b-rv0324重组表达载体,转化至*** BL21后经诱导表达获得蛋白Rv0324;同时以BCG(Tokyo-172)基因组为模板扩增获得rv3597c启动子(p/o rv3597c)。通过体外凝胶迁移实验(EMSA)和体内染色质免疫沉淀(Ch IP)实验对Rv0324与p/o rv3597c的相互作用进行检测,结果显示Rv0324可与p/o rv3597c结合,且Rv0324结合于p/o rv3597c的大沟;通过EMSA对影响Rv0324和p/o rv3597c结合的小分子进行筛选,结果显示二者的结合均能够被Trp、Fe^(3+)、Cu^(2+)、V_(B1)、V_(C)和贝达喹啉小分子抑制。在利用tr Rosetta软件对Rv0324蛋白结构分析的基础上,通过Rv0324和小分子的对接实验进一步分析它们间可能的互作模式,结果显示主要是位于Rv0324环区结构域的Asp203和Asp204氨基酸残基参与了与小分子的互作。综上所述,本研究首次证实MTB Rv0324通过直接调控rv3597c的表达,参与调控MTB的氧耗和代谢水平的变化,同时发现了影响Rv0324和rv3597c互作的小分子及其作用模式,为临床治疗的药物筛选提供了一定的参考依据。

关键词：结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324 rv3597c

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S2基因失活突变马传染性贫血病毒感染性克隆的构建及感染性研究

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中国预防兽医学报 2010年第7期32卷 499-502页

作者：耿庆华郭巍赵立平吕晓玲相文华周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 沈阳出入境检验检疫局辽宁沈阳110016

为研制马传染性贫血病毒(EIAV)标记疫苗株,本研究在EIAV驴胎皮肤(FDD)细胞弱毒疫苗株感染性克隆pEIAVFDDV3-8的S2基因内部引入两个终止密码子,致使S2基因终止表达,构建了一株S2基因突变的感染性克隆pEIAVFDDV3-8△S2。用该重组质粒转染... 详细信息

为研制马传染性贫血病毒(EIAV)标记疫苗株,本研究在EIAV驴胎皮肤(FDD)细胞弱毒疫苗株感染性克隆pEIAVFDDV3-8的S2基因内部引入两个终止密码子,致使S2基因终止表达,构建了一株S2基因突变的感染性克隆pEIAVFDDV3-8△S2。用该重组质粒转染FDD细胞,盲传至第4代时,转染细胞病变明显,电镜下可见细胞内的典型病毒颗粒。反转录酶活性检测和Real-time PCR对病毒拷贝数的检测均证明,获得了EIAVS2基因终止表达的感染性克隆毒株,命名为EIAVFDDV3-8△S2。

关键词：马传染性贫血病毒感染性克隆 S2基因缺失

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猪链球菌2型05ZYH33菌株具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性蛋白的鉴定及功能研究

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中国预防兽医学报 2019年第5期41卷 462-467页

作者：陈平刘冉黄萌萌朱金鲁谢芳倪宏波刘思国张跃灵黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株是否具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)及同工酶,本研究通过同源蛋白比对,发现05ZYH33菌株表面蛋白SSU050630 C端Ss GH20结构域与肺炎链球菌(***)的NAG Str H的GH20-1结构域具有60%的同源性;经基因克... 详细信息

为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株是否具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)及同工酶,本研究通过同源蛋白比对,发现05ZYH33菌株表面蛋白SSU050630 C端Ss GH20结构域与肺炎链球菌(***)的NAG Str H的GH20-1结构域具有60%的同源性;经基因克隆、蛋白表达及纯化后的酶活性分析表明Ss GH20具有NAG活性,且其活力为371 U/mg蛋白;其最适反应温度为50℃、最适p H为5.5;其Km值为0.69。通过构建SS2 ssu050630基因缺失株及全菌酶活性测定,显示SS2 05ZYH33菌株具有NAG活性,而ssu050630基因缺失后的菌株则失去了NAG活性,表明SSU050630是SS2 05ZYH33菌株唯一具有NAG活性的蛋白。本研究为进一步探究Ss GH20在SS2致病中的作用及SS2逃避宿主免疫反应的机制奠定了基础。

关键词：猪链球菌2型 N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 SSU05_0630 基因缺失同工酶

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猪戊型肝炎诊断方法的研究进展

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中国预防兽医学报 2007年第12期29卷 981-984页

作者：曲娟娟于婧王滨于敏赵立平相文华李柱刚黑龙江省农业科学院生物技术研究所黑龙江省生物与家畜分子育种重点实验室中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室青岛市动物卫生监督所山东青岛266071

戊型肝炎（Hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis Evirus，HEV）感染引起的一种急性、自限性疾病，病毒经粪．口途径传播，其暴发和流行主要分布在发展中国家，常因饮用水被污染而引起，散发病例呈全球分布。1997年，发现了动... 详细信息

戊型肝炎（Hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis Evirus，HEV）感染引起的一种急性、自限性疾病，病毒经粪．口途径传播，其暴发和流行主要分布在发展中国家，常因饮用水被污染而引起，散发病例呈全球分布。1997年，发现了动物源性的戊型肝炎病毒，随后，各发达国家及印度等国陆续都有猪HEV的相关报道，确定戊型肝炎为一种人畜共患病，并成为各国密切关注的公共卫生问题。最新研究结果表明人的戊型肝炎病毒的感染主要来源于猪。猪常常作为人类食物的重要来源和器官移植的供体，因此存在着普通人群、器官移植者及其家人、医务人员感染戊肝的风险。伏丽萍等对全国22个省、市、地区的血清学检测研究表明，几乎所有被检地区都或多或少存在猪戊型肝炎病毒（SHEV）的污染。

关键词：戊型肝炎病毒诊断方法猪公共卫生问题器官移植发展中国家人畜共患病血清学检测

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马传染性贫血病毒强毒株gag和gp45基因的体内进化分析

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动物医学进展 2012年第7期33卷 1-7页

作者：刘强王雪峰王珊珊韦华冕杜承林跃智马建周建华王凤龙内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和gp45基因,经克隆后进行序列分析。结果显示,与接种前EIAVLN40相比较,p15基因核苷酸和氨基酸平均差异率分别为1.8%(0～2.9%)和1.7%(0～3.6%);p9分别为2.5%(0.3%～3.8%)和2.9%(0～4.8%);gp45-Ⅰ分别为1.3%(0.3%～2.1%)和1.8%(0～3.2%),gp45-Ⅱ分别为2.1%(0～3.4%)和2.6%(0～4.7%)。在EIA发热期,每个基因核苷酸和氨基酸差异率最小;在亚临床阶段,每个基因平均差异率总体上相对较高。氨基酸变异位点分析发现,发病期(2-2、3-1)各基因氨基酸序列回复到亲本株EIAVLN40,其余时期p15基因氨基酸稳定变异位点16N/S、88T/S和112M/E;p9基因115E/G和122K/M;gp45-Ⅰ基因9T/F/L;gp45-Ⅱ基因21E/K和29G/S。此外,p15基因进化树结果显示,发热期(2-2、3-1)p15基因序列与EIAVLN40序列处于同一分支上,亚临床阶段大多数p15基因序列处于另一个大分支上;其他基因进化情况与p15基因类似。对EIAV p15、p9、gp45基因体内进化分析,有助于对EIAV在马体内感染进程的研究,为进一步研究EIAV持续感染和逃避免疫监视的机制提供参考。

关键词：马传染性贫血病毒 p15基因 p9基因 gp45基因差异率变异分析

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我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G10P型牛轮状病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 755-759页

作者：常继涛崔久辉李建军郭德瑞王治才于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 海拉尔农垦集团有限责任公司内蒙古海拉尔021000 新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830000

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样... 详细信息

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型,新疆另一牛场的4份样品属于G6型。对所有阳性样品进行病毒分离,获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株,经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒,命名为HM26。G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次。

关键词：牛轮状病毒检测分离鉴定

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