检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了研究。.将收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌

关键词：体内诱导抗原技术胸膜肺炎放线杆菌阳性克隆体内表达

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携带非典型cpb2基因牛源A型产气荚膜梭菌重组α毒素的免疫保护性研究

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中国预防兽医学报 2012年第7期34卷 563-567页

作者：德艳艳姜志刚牛思博孙刚于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省动物卫生监督所黑龙江哈尔滨150090

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带... 详细信息

为验证重组α毒素对携带非典型cpb2基因的A型产气荚膜梭菌的免疫保护性,本研究应用PCR技术,从某牛场牛源A型产气荚膜梭菌G1分离株中扩增出1 194 bp的α毒素编码基因(cpa)和795 bp的β2毒素编码基因(cpb2)。经BLAST分析显示,G1分离株携带的cpb2基因与14个菌株的非典型cpb2基因的氨基酸序列同源性为95.1%～98.9%,与典型cpb2基因(L77695)的氨基酸序列同源性为61.7%。这表明,G1的cpb2基因为非典型cpb2基因。同时分别将cpa和cpb2基因扩增产物克隆于原核表达载体中,构建重组表达质粒pET-a和pET-b2,重组菌经IPTG诱导表达重组蛋白,将其纯化后单独及联合免疫小鼠进行免疫保护试验。结果显示,单独免疫重组α毒素蛋白组以及联合免疫重组β2毒素蛋白组的小鼠,均可以抵抗至少6倍最小致死量(MLD)的G1外毒素(包含α毒素和非典型β2毒素)的攻击,也可以完全抵抗至少6 MLD的G2外毒素(不包含β2毒素)的攻击。表明,重组α毒素蛋白对含有及不含有非典型β2毒素的A型产气荚膜梭菌均具有良好的免疫保护作用。

关键词：非典型cpb2基因 A型产气荚膜梭菌重组α毒素重组非典型β2毒素

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细菌ghost疫苗的研究进展

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畜牧兽医科技信息 2008年第5期24卷 17-18页

作者：常月红刘思国王春来王勇刘建东宫强邵美丽郭设平东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

用死的病原微生物接种动物能使机体产生抵抗病原体的免疫反应。作为疫苗的制作原则，用死的传染性病原体替代活的病原体已经得到广泛应用。死疫苗易通过化学或物理方法灭活病原菌制得。完整的死菌苗与亚单位疫苗相比有一个优势，即向免... 详细信息

用死的病原微生物接种动物能使机体产生抵抗病原体的免疫反应。作为疫苗的制作原则，用死的传染性病原体替代活的病原体已经得到广泛应用。死疫苗易通过化学或物理方法灭活病原菌制得。完整的死菌苗与亚单位疫苗相比有一个优势，即向免疫系统提呈排列复杂的抗原决定簇。

关键词：死疫苗细菌微生物接种亚单位疫苗抗原决定簇病原体免疫反应物理方法

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内蒙古部分地区致奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究

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中国预防兽医学报 2017年第4期39卷 257-261页

作者：王秋东刘琪董志民杨桂连华欣张万江刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150069 内蒙古伊利实业集团股份有限公司内蒙古呼和浩特010080 天津市畜牧兽医研究所天津300112

为调查奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的流行病学和耐药性情况,本研究对采集自内蒙古部分地区3个规模化奶牛场的330份奶样进行了葡萄球菌的分离、鉴定、耐药表型分析及基因型的检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进... 详细信息

为调查奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌和产色葡萄球菌的流行病学和耐药性情况,本研究对采集自内蒙古部分地区3个规模化奶牛场的330份奶样进行了葡萄球菌的分离、鉴定、耐药表型分析及基因型的检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进行了亲缘性分析,多位点序列分型(MLST)法对金黄色葡萄球菌进行了基因分型分析。结果表明,从330份奶样共分离到14株金黄色葡萄球菌和23株产色葡萄球菌,两者的分离率分别为4.24%(14/330)和6.97%(23/330);PFGE分型共获得8种不同谱型的金黄色葡萄球菌和16种不同谱型的产色葡萄球菌,表明这些分离株中存在克隆传播现象;药敏试验结果显示,两种病原菌对林可霉素、青霉素、苯唑西林和红霉素耐药率较高,分别为66.67%(16/24)、66.67%(16/24)、37.5%(9/24))和25%(6/24);介导青霉素耐药的bla Z基因检出率最高,为54.17%(13/24),其次为介导林可霉素和红霉素耐药的Inu(A)和erm(B)基因,其检出率分别为33.33%(8/24)和20.83%(5/24)。本研究结果为控制该地区奶牛乳房炎的传播、蔓延及临床用药提供了实验依据。

关键词：金黄色葡萄球菌产色葡萄球菌分子流行病学耐药性

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胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 842-845页

作者：赵海玲刘思国刘慧芳王春来司微杜艳芬杨金国林靖凯中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 吉林农业大学吉林长春130118 广西大学广西南宁530004

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。... 详细信息

应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。

关键词：胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA) 原核表达纯化 ELISA

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比较蛋白组学分析两株不同基因型的结核分枝杆菌

比较蛋白组学分析两株不同基因型的结核分枝杆菌

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：亓英芳王春来刘思国杜艳芬林靖凯刘慧芳赫明雷司微尹录欧阳凤菊倪洪波中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

本文应用双向电泳技术，对来源于同一牛群的这2株不同基因的结核分枝杆菌的胞内蛋白进行了分离，挑选了26个有表达差异的蛋白进行解析，利用串联质谱技术鉴定出21个差异蛋白。其中，15个蛋白与生物体的多个关键代谢过程有关，包括小分... 详细信息

本文应用双向电泳技术，对来源于同一牛群的这2株不同基因的结核分枝杆菌的胞内蛋白进行了分离，挑选了26个有表达差异的蛋白进行解析，利用串联质谱技术鉴定出21个差异蛋白。其中，15个蛋白与生物体的多个关键代谢过程有关，包括小分子代谢、大分子代谢和细胞进程相关等;另外的6个蛋白仍是假想蛋白或者功能未知蛋白。依据基因型的差异，从蛋白水平上揭示了2株结核分枝杆菌的蛋白表达情况，为进一步开展蛋白质的差异与毒力、代谢差异以及结核分枝杆菌跨越种群屏障的机理研究奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌蛋白解析基因表达双向电泳技术比较蛋白组学

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胸膜肺炎放线杆菌relA基因缺失株的构建及其生物学特性的研究

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中国预防兽医学报 2017年第12期39卷 969-974页

作者：李婷婷李刚刘双红徐胜奎李大鹏王春来刘伟石东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000

为探究信号分子4或5磷酸鸟苷[(p)ppGpp]对胸膜肺炎放线杆菌(APP)适应性及致病性影响,本研究以APP血清7型S8为亲本株,通过同源重组、卡那抗性及蔗糖负向筛选的方法,将(p)ppGpp的合成调控基因relA敲除,构建缺失突变株S8△relA。生物学特... 详细信息

为探究信号分子4或5磷酸鸟苷[(p)ppGpp]对胸膜肺炎放线杆菌(APP)适应性及致病性影响,本研究以APP血清7型S8为亲本株,通过同源重组、卡那抗性及蔗糖负向筛选的方法,将(p)ppGpp的合成调控基因relA敲除,构建缺失突变株S8△relA。生物学特性鉴定结果表明,S8△relA具有良好的遗传稳定性,与亲本株增殖速度变化差异不显著,但平台期营养限制环境下,S8△relA存活能力降低,而且在Gly、Ile、Val营养缺失时,S8△rel生长能力显著抑制;S8△relA的持留菌形成能力、生物膜形成能力以及体外抗肺泡巨噬细胞(PAM)吞噬能力均有不同程度降低;对小鼠致病性试验结果显示,S8△relA相比亲本株S8毒力降低2.7倍。研究结果表明(p)ppGpp在环境胁迫下参与APP适应性调控,并对其毒力有一定的影响。本研究首次证明了(p)ppGpp作为一种信号分子,同样可以调控APP的生长,并且在宿主肺部弱营养环境条件下,APP与致病力相关的表型均受到影响,这为进一步阐明APP的致病机制提供实验依据。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 relA基因基因缺失株

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细菌ghost疫苗的研究进展

细菌ghost疫苗的研究进展

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：常月红郭设平刘思国王春来王勇刘建东宫强邵美丽迟磊赵昆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

噬菌体PhiX714的E基因在细菌内的表达能导致细菌裂解.它能使革兰氏阴性菌的胞膜产生跨膜通道从而形成无胞质成分的有完整胞膜结构的细菌菌影(Bacterial Ghost).通过E蛋白介导的细菌裂解已经成功地制备了大量的革兰氏阴性菌ghost,如大肠... 详细信息

噬菌体PhiX714的E基因在细菌内的表达能导致细菌裂解.它能使革兰氏阴性菌的胞膜产生跨膜通道从而形成无胞质成分的有完整胞膜结构的细菌菌影(Bacterial Ghost).通过E蛋白介导的细菌裂解已经成功地制备了大量的革兰氏阴性菌ghost,如大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌、肺炎克雷伯氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌.这些来源于侵害人或动物病原体的ghost曾被提议作为灭活疫苗的替代品,使其成为加热灭活或化学灭活细菌的替代物.在"重组ghost"中,外源蛋白(如病毒蛋白)在裂解前通过特异性N-,C-或N-和C-末端锚定序列插入到内膜.重组ghost作为抗原,其优点包括:(1)作为疫苗或抗原载体的ghost来说,其制作过程不涉及灭活所导致的抗原变性;(2)重组蛋白被整合在一个具有高度免疫原性的环境中;(3)不限制外源蛋白的大小,可同时提呈多价抗原决定簇;(4)Bacterial Ghost制备成本低,可大规模生产;(5)重组ghost稳定性好,无需冷链贮藏系统.

关键词：细菌ghost疫苗 E蛋白介导免疫反应佐剂

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重组截短型ELR1蛋白在昆虫表达系统中的分泌表达与结晶

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中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 427-430页

作者：孙佩龙郝飞飞吕淑霞刘新奇周建华林跃智沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 南开大学生命科学学院天津300071

为获得马传染性贫血病毒单一受体(ELR1)的结晶体,本研究通过PCR方法获得ELR1胞外区基因片段,利用基因重组技术构建包含ELR1胞外区基因的重组杆状病毒表达质粒(Bacmid-ELR1)。将其转染至昆虫细胞sf9中进行蛋白表达,western blot检测结果... 详细信息

为获得马传染性贫血病毒单一受体(ELR1)的结晶体,本研究通过PCR方法获得ELR1胞外区基因片段,利用基因重组技术构建包含ELR1胞外区基因的重组杆状病毒表达质粒(Bacmid-ELR1)。将其转染至昆虫细胞sf9中进行蛋白表达,western blot检测结果显示ELR1胞外区截短型重组蛋白在昆虫表达系统中获得表达。目的蛋白经亲和层析和凝胶过滤方法纯后化,通过多组结晶条件筛选获得了ELR1胞外区重组蛋白结晶体。本研究为ELR1立体结构和功能的解析提供了重要基础。

关键词：马传染性贫血病毒单一受体昆虫表达系统纯化结晶

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牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

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第二届全国人畜共患病学术研讨会

作者：杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligotyping,Spoligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(variable number tandem repeats-mycobacterial interspersed repetitive unit,VNTR-MIRU)基因分型法用于国内牛分枝杆菌的基因分型研究,初步了解我国牛分枝杆菌基因型种类、分布以及2种方法在我国应用的可行性,本研究收集东北、西北、华北、华南四个地区分离的10株牛分枝杆菌分离株,分别采用Spoligotyping和VNTR-MIRU对这些分离株进行基因分型,比较两种方法的分型效果,评价其在牛分枝杆菌基因分型中的应用。结果表明,使用Spoligotyping方法,10株牛分枝杆菌呈现出4种基因型,使用VNTR-MIRU方法,10株分离株也呈现4种基因型;当两种方法联合使用时,可以分为5种基因型,其中的2个菌株具有独特的基因型,显示来自不同地区的牛分枝杆菌存在主要的流行型为BCG家族。将Spoligotyping和VNTR-MIRU联合使用,将有效提高牛结核病的分子流行病学调查和病原学的监测效果。

关键词：牛分枝杆菌 Spoligotyping VNTR MIRU 基因分型

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