检索结果-内蒙古大学图书馆

第三届免疫学博士生论坛

作者：曹俊陈利苹鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究团队

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）已造成全球超过10亿人的无症状感染,每年新增数百万的活动病例,病死率达到25%0%。***最重要的一个特点是:***能够阻断巨噬细胞中具有降解功能吞噬溶酶体的成熟,从而在感染的细胞内持续... 详细信息

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）已造成全球超过10亿人的无症状感染,每年新增数百万的活动病例,病死率达到25%0%。***最重要的一个特点是:***能够阻断巨噬细胞中具有降解功能吞噬溶酶体的成熟,从而在感染的细胞内持续存活。***的这一能力通常被归纳为三种效应结果,即抑制吞噬体和溶酶体的融合、阻断吞噬溶酶体成熟或抑制吞噬溶酶体的生成。事实上,潜伏感染是***的首选,因而在上十亿的病人体内呈现无症状的感染状态。免疫系统的各个成员,尤其是IFN-γ、TNF-α和T细胞的有效协作,控制感染水平,绝大部分病人不会表现出临床症状。参与其中的T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞和非常规T细胞。***对很多杀菌作用具有抵抗力,但自噬能有效清除胞内寄生的***。自噬是一个保守的生物过程,胞浆内的物质被双层膜结构包裹,形成自噬体;随后与溶酶体融合,形成自噬溶酶体,其中包裹的物质便会被降解。***等胞内寄生病原体已进化出自己独特的免疫逃避能力,成为生物机体内的漏网之鱼,而自噬可以被看做是机体进化出的查漏补缺之措施。因而,以自噬抵抗***感染为模型,无论是揭示自噬这一生物学过程,还是制定出结核病的有效防治措施都有着重要意义。有实验数据表明,在捕获胞内的泛素、泛素化蛋白或其聚集体之后,自噬通过水解蛋白的反应产生泛素片段,在自噬体发展成熟为自噬溶酶体的过程中,泛素片段直接或间接被运送至细胞内从而增强对***的杀灭作用。脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）一直被认为是***的重要毒力因子,Shui等对不同分枝杆菌来源LAM刺激宿主细胞后细胞器蛋白表达的差异进行了分析,发现唯有高毒力菌株来源的LAM会抑制自噬泡的形成与累积,表明LAM干扰自噬是***致病力的一个重要因素。在自噬系统进化的晚期,为了更有效控制胞内病原的感染,细胞因子网络也获得了调控自噬的能力。细胞因子对自噬的调控体现在以下两个方面,Th1型细胞因子正调控自噬,Th2型细胞因子负调控自噬,这与Th1型细胞因子抵抗胞内病原感染的免疫保护效应,以及Th2型细胞因子在抵抗胞内菌感染方面的负面效应相一致。综上所述,在自噬抵抗胞内病原体——***感染的相关领域,已经取得的研究结果和未来可以进一步获得的信息,定会丰富我们对自噬作为天然免疫反应这一生理过程的认识,对严重威胁全球公共卫生事业的结核病的防治提供新的思路和途径。

关键词：结核分枝杆菌自噬结核病

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牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

牛分枝杆菌Spoligotyping和VNTR-MIRU的基因分型研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：杜艳芬林靖凯刘思国王春来刘慧芳司微王聃赵海玲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室细菌病研究室

为了探讨间隔区寡核苷酸分型(Spacer oligo-typing,Spiligotyping)和数目可变串联重复序列-结核分枝杆菌散在分布重复单元(Variable number tan-dem repeats-mycobacterial interspersed repetitive unit,

关键词：牛分枝杆菌 VNTR-MIRU Spoligotyping 基因分型

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应用毛发PCR法检测猕猴TRIM5基因序列CypA转座子插入的TRIMCyp嵌合基因型

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中国预防兽医学报 2010年第11期32卷 908-910页

作者：汤艳东于长青刘晓明崔多英那雷饶军华季芳吕晓玲郑永辉周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室广东省昆虫研究所华南灵长类研发中心北京动物园东北农业大学生命科学学院 Microbiology and Molecular Genetics Michigan State UniversityMI48824USA

为检测猕猴TRIM5基因序列CypA转座子插入TRIMCyp突变基因型个体,本研究建立了应用毛发PCR方法,在基因组水平初步检测猕猴属中TRIMCyp基因型方法,并从猕猴属食蟹猴中初步筛选出TRIMCyp突变基因杂合和纯合子个体。实验以平顶猴为阳性对照,... 详细信息

为检测猕猴TRIM5基因序列CypA转座子插入TRIMCyp突变基因型个体,本研究建立了应用毛发PCR方法,在基因组水平初步检测猕猴属中TRIMCyp基因型方法,并从猕猴属食蟹猴中初步筛选出TRIMCyp突变基因杂合和纯合子个体。实验以平顶猴为阳性对照,无CypA插入的PCR扩增产物片段大小约为2 343 bp,纯合体为3 110 bp,而杂合突变体则为2 343 bp和3 110 bp。与从血液中提取基因组方法检测结果一致。该方法的建立,为进一步调查TRIMCyp嵌合基因型猕猴在中国的分布,以及研究逆转录病毒跨种间传播和建立HIV-1易感猕猴属动物模型提供了实验手段和平台。

关键词：毛发PCR 猕猴 TRIM5α 基因突变 HIV-1

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禽肠炎沙门氏菌Lon/CpxR双基因缺失株的构建及其特性研究

禽肠炎沙门氏菌Lon/CpxR双基因缺失株的构建及其特性研究

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2013年中国微生物学会学术年会

作者：司微于申业陈利苹王秀梅张万江刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

禽沙门氏菌病是影响养鸡业的重要疾病之一,它够引起鸡腹泻病,严重影响生产性能,甚至引起死亡.相对于灭活疫苗,弱毒疫苗对预防肠炎沙门氏菌的肠道定殖和全身性感染有更好的效果.

关键词：

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Asial型口蹄疫病毒感染性克隆的建立

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 915-919页

作者：王海伟涂亚斌周国辉杨德成张亚科于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建Asial型口蹄疫病毒Asial/YS/CHA/05株的感染性克隆,根据该毒株的全基因组序列,将其分为6段进行RT-PCR扩增,并拼接克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中,构建了全长基因组的cDNA克隆pAsi。用NotⅠ将质粒线性化后体外转录并转染BHK-21细... 详细信息

为构建Asial型口蹄疫病毒Asial/YS/CHA/05株的感染性克隆,根据该毒株的全基因组序列,将其分为6段进行RT-PCR扩增,并拼接克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中,构建了全长基因组的cDNA克隆pAsi。用NotⅠ将质粒线性化后体外转录并转染BHK-21细胞,转染细胞中出现明显的细胞病变。RT-PCR结合序列分析表明,拯救病毒中作为人工设计的分子标记PstⅠ酶切位点被消除,因此,排除了亲本病毒污染的可能。该感染性克隆的构建,为深入探讨Asia1型口蹄疫病毒的致病机理以及新型疫苗的研制奠定了基础。

关键词： DNA 互补/遗传学感染基因组口蹄疫病毒逆转录聚合酶链反应遗传学技术质粒转染人类

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重排的PhiX174噬菌体裂解基因E能增强溶菌效率

重排的PhiX174噬菌体裂解基因E能增强溶菌效率

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会

作者：于申业彭玮司微尹录刘思国王春来常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中... 详细信息

菌蜕是通过调控PhiXl74噬菌体裂解基因E的表达而形成的，其为灭活疫苗的研究提供了新的途径。本文利用基因重排技术，构建了PhiXl74噬菌体裂解基因E的基因重排文库。通过与原核非融合表达载体DBV220进行重组，筛选到两个溶菌质粒。其中一个含有新奇的E基因突变体(命名为mE)，由5`端74-bp非编码序列和201bp的△E基因组成，能明显提高对大肠杆菌和沙门氏菌的溶菌效率。而且，溶菌细菌的OD600值最高可达到1.0(109cfu)，解决了菌蜕研究和生产中菌液浓度低和菌蜕数量少等技术瓶颈问题。本结果对于加快菌蜕疫苗的研制具有重要的意义。

关键词：革兰氏阴性菌菌蜕疫苗裂解基因基因重排突变体溶菌效率

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利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放杆菌体内表达基因

利用体内诱导抗原技术检测胸膜肺炎放杆菌体内表达基因

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：刘慧芳刘思国王春来司微王聃杜艳芬赫明雷常月红中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨 150001

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究.首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的.APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附... 详细信息

本研究利用体内诱导抗原技术(IVIAT)对胸膜肺炎放线杆菌体内表达的基因进行了研究.首先将我们收集到的5份感染了APP1的猪血清混合,分别吸附体外培养的.APP1和大肠杆菌DE3的全菌及全菌的裂解物,以充分去除体外表达蛋白的抗体,经过该吸附过程后OD405分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078,表明混合血清得到了很好的吸附.同时,将APP1 基因组DNA以Bsp1431进行酶切,回收500bp-2000bp的片段,与经过BamHI酶切的ET30a/b/c进行连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量为2.0×105CFU,用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交来筛选该基因组表达文库,筛选了3000个菌落初步获得16个阳性克隆,通过再次筛选最后确定获得12个阳性克隆.本研究为抗病原菌药物、疫苗乃至新的诊断试剂的开发提供依据.

关键词：猪病胸膜肺炎放线杆菌体内诱导抗原技术菌落原位免疫杂交

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牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-esat-6(简称为pCE6)和pCDNA-mpb70-mpb83-esat-6(简称为pC70-83-E6).体外转染SP2/0细胞,间接免疫荧光检测目的基因的表达情况.然后进行动物免疫,实验动物分四组即:pCE6组、pC70-83-E6组、pCDNA3.1(+)组和PBS组,每组10只BALB/c小鼠,pCE6组、pC70-83-E6组和pCDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量(胫前肌)免疫,PBS组每只小鼠胫前肌免疫100μl 1 ×PBS,各组均进行了三次免疫,每次间隔两周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,两种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,而pCDNA3.1(+)组和PBS组的血清抗体始终维持在较低水平,且pC70-83-E6组抗体水平高于pCE6.经PPD(5 μg/ml)刺激后,pCE6组和pC70-83-E6组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05),而两重组质粒免疫组差异不显著(P＞0.05);PPD刺激后两重组质粒免疫的小鼠脾细胞产生的IFN～γ均显著高于两对照组产生的IFN～γ(P＜0.05),且pC70-83-E6组明显高于其他三组(P＜0.05),pCE6组只分泌很低的IFN～γ,而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.本试验成功构建了牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83-esat-6融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制提供了理论依据.

关键词：牛分枝杆菌 esat-6基因 mpb70基因 mpb83基因 DNA疫苗免疫应答

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信号标签诱导技术的研究进展

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畜牧兽医科技信息 2008年第9期24卷 5-7页

作者：赫明雷刘思国东北农业大学动物医学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

Signature-tagged mutagenesis(STM)信号标签突变技术是一种有效的负向选择方法,主要用来鉴定能使病原体在宿主体内成功存活和复制的决定性基因。问世十几年以来,STM技术已经应用于31种细菌中,筛选了大量的转座插入突变体,有大约1700多... 详细信息

Signature-tagged mutagenesis(STM)信号标签突变技术是一种有效的负向选择方法,主要用来鉴定能使病原体在宿主体内成功存活和复制的决定性基因。问世十几年以来,STM技术已经应用于31种细菌中,筛选了大量的转座插入突变体,有大约1700多种细菌的基因得到认识和鉴定,包括毒力因子。由于在信号标签和鉴定方法的改进,使得STM技术有了很大发展,增加其多样性和灵活性,扩大了其应用范围。本文就STM技术中关键步骤的改进进行综述。

关键词：信号标签诱导转座突变负向筛选体系

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增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制研究

增强猪传染性胸膜肺炎灭活苗对小鼠的保护力及其机制研究

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

作者：王勇李广兴刘思国王春来邵美丽刘建东宫强迟磊赵昆郭设平中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 东北农业大学哈尔滨150030 东北农业大学哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP.设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和... 详细信息

为了提高猪传染性胸膜肺炎灭活苗的保护力,本研究利用基因重组技术表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要致病因子蛋白:rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP.设立试验Ⅰ组(灭活苗),试验Ⅱ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP),试验Ⅲ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApxⅣ),试验Ⅳ组(灭活苗、rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rApfa)和空白对照组(PBS),每组26只BALB/c小鼠,分3次免疫,每次间隔2周,每周检测血清抗体水平,在免疫后第2周、第4周和第5周,MTT法检测脾脏T细胞增殖水平及ELISA法测定IFN-γ分泌水平.在第3次免疫后的第7天,将每组剩余20只小鼠平均分成2组,分别以APP1型菌(5×109 cfu)和APP7型菌(1011cfu)进行攻毒保护试验.结果表明,向灭活苗中添加重组亚单位成分可以提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,并能提高灭活苗的交叉保护率;试验Ⅱ组的ApxI和OMP抗体水平以及细胞免疫水平均显著高于其它各组(p＜0.05),对于APP1和APP7型菌的攻毒也提供了明显优于其它各组的保护结果,试验Ⅲ、Ⅳ组的细胞、体液免疫水平及保护率较试验Ⅰ组也有所提高.结果显示出ApxⅠ、OMP抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率之间存在着正相关性,向灭活苗中加入重组蛋白成分可以提高疫苗的交叉保护,试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对两个血清型APP的攻击提供了很好的保护作用,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考.

关键词：猪胸膜肺炎重组亚单位菌苗保护力细胞增殖 IEN-γ 灭活疫苗

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