检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2023年

作者：李雪雯李婷婷李长尧焦爽郑君荣俊翁长江长江大学生命科学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队黑龙江省兽医免疫学重点实验室

本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）E184L蛋白（pE184L），并制备单克隆抗体（mAb），为其功能研究提供物质基础。首先，构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白，使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化，用纯化后... 详细信息

本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）E184L蛋白（pE184L），并制备单克隆抗体（mAb），为其功能研究提供物质基础。首先，构建出了原核表达质粒pET21a-E184L并表达重组pE184L-His蛋白，使用镍亲和层析的方法对pE184L进行纯化，用纯化后的蛋白对小鼠进行免疫，随后将阳性小鼠进行迫杀并取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合，经间接ELISA方法筛选出能稳定分泌pE184L mAb的杂交瘤细胞。Western blot结果该抗体能够特异性识别过表达的外源pE184蛋白以及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞（PAMs）表达的内源pE184蛋白。IFA结果表明该株mAb能特异性标记过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。Co-IP试验结果表明该株mAb能特异性结合过表达的pE184L蛋白及在ASFV感染的PAMs细胞中表达的内源pE184L蛋白。本研究成功表达并纯化了可溶性E184L蛋白，并制备了一株pE184L mAb，该mAb与pE184L蛋白具有良好的反应性，这为ASFV pE184L的生物学功能研究奠定了基础。

关键词： ASFV E184L 原核表达单克隆抗体

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一种检测蛋白酶活性的荧光素酶报告基因系统的构建及应用

引用

中国预防兽医学报 2023年第5期45卷 535-539页

作者：周仕君宋洁李帅刘佳李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省免疫学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为建立一种检测蛋白酶活性的方法,本研究将IL-1β前体基因和荧光素酶基因融合,克隆至p CAGGS真核载体,构建了基于荧光素酶的报告基因系统(iGLuc),同时构建GLuc真核表达质粒作为对照。以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶为检测对象,利用该... 详细信息

为建立一种检测蛋白酶活性的方法,本研究将IL-1β前体基因和荧光素酶基因融合,克隆至p CAGGS真核载体,构建了基于荧光素酶的报告基因系统(iGLuc),同时构建GLuc真核表达质粒作为对照。以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶为检测对象,利用该报告基因系统对病毒蛋白酶活性进行检测,将iGLuc中蛋白酶酶切位点(FVCDAN)相对应的基因序列替换为Kpn I酶切位点,构建重组质粒Kpn I-iGLuc,然后分别将PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶切割位点对应的核酸序列插入至报告基因Kpn I-iGLuc中的Kpn I位点,构建重组质粒nsp4-iGLuc和S273R-i GLuc。分别将报告基因质粒(iGLuc、GLuc、Kpn I-i GLuc、nsp4-i GLuc和S273R-iGLuc)与不同剂量的相应蛋白酶真核表达质粒共转染HEK293T细胞,24 h后检测上清中荧光素酶GLuc的活性。结果显示,转染i GLuc、nsp4-iGLuc或S273R-iGLuc质粒的上清中荧光信号随着相应蛋白酶的剂量增加而升高,呈现剂量依赖性,而缺失蛋白酶切位点的对照质粒无该现象,表明构建的荧光素酶报告基因能够特异性地检测细胞蛋白酶和病毒蛋白酶的活性。本研究首次建立了一种检测蛋白酶活性的方法,并以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶验证了该方法的应用价值,为后续开展高通量化筛选抗PRRSV、ASFV等药物的研究奠定了基础。

关键词：蛋白酶活性荧光素酶报告基因病毒蛋白酶检测方法

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伪狂犬病毒gB蛋白纯化及单克隆抗体的制备

引用

中国动物传染病学报 2023年

作者：焦爽李长尧张朝霞翁长江熊涛长江大学生命科学学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江省兽医免疫重点实验室

本研究利用昆虫杆状病毒表达系统对伪狂犬病毒(PRV)gB基因中富含抗原表位区段进行融合表达及纯化，并将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠以制备单克隆抗体(mAb)。小鼠经三次免疫后，利用iELISA检测其血清中抗gB蛋白的抗体效价，并将抗体效... 详细信息

本研究利用昆虫杆状病毒表达系统对伪狂犬病毒(PRV)gB基因中富含抗原表位区段进行融合表达及纯化，并将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠以制备单克隆抗体(mAb)。小鼠经三次免疫后，利用iELISA检测其血清中抗gB蛋白的抗体效价，并将抗体效价达到2×104以上的小鼠进行细胞融合。随后通过iELISA和IFA实验对阳性杂交瘤细胞进行筛选。经3-4次亚克隆筛选后，得到了一株可以稳定分泌gB mAb的杂交瘤细胞株293。同时，对其进行亚类鉴定发现该株细胞分泌的抗体类型为IgM型。本研究为建立新型ELISA检测试剂盒、新型疫苗的开发以及后续中和抗体的研究提供了良好的生物材料。

关键词：伪狂犬病毒 gB基因昆虫杆状病毒单克隆抗体

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Annexin蛋白家族调控病毒复制和抗病毒天然免疫反应的研究进展

引用

中国预防兽医学报 2022年第9期44卷 1014-1019页

作者：薛梦迪黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所/兽医生物技术国家重点实验室基础免疫创新团队/黑龙江省兽医免疫学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和... 详细信息

病毒复制一般包括吸附、穿入、脱壳、生物合成及装配与释放5个阶段,Annexin蛋白能够与流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病毒编码的蛋白相互作用进而影响病毒吸附、穿入及脱壳等复制过程。天然免疫是机体针对各种病原微生物和异物的侵袭而介导抗病毒免疫反应的第一道防线,其激活依赖于模式识别受体(Pattern-recognition receptors,PRRs)识别病原体保守的分子结构称病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),以激活下游相关信号通路,发挥抵御病原体侵入的功能。

关键词：病毒吸附模式识别受体病毒复制复制过程病原相关分子模式第一道防线病原微生物流感病毒

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猪源GSDMA蛋白多克隆抗体的制备与初步应用

引用

中国预防兽医学报 2022年第12期44卷 1311-1316,1331页

作者：李帅宋洁周仕君刘佳李江南翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/基础免疫创新团队黑龙江哈尔滨150069 黑龙江省免疫学重点实验室黑龙江哈尔滨150069

Gasdermin A(GSDMA)作为Gasdermin(GSDM)蛋白家族的一员,参与细胞的炎症反应,其经切割产生的片段可以诱导细胞焦亡。为制备猪GSDMA(pGSDMA)多克隆抗体,本研究构建了重组表达质粒pET-21apGSDMA,转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导,表... 详细信息

Gasdermin A(GSDMA)作为Gasdermin(GSDM)蛋白家族的一员,参与细胞的炎症反应,其经切割产生的片段可以诱导细胞焦亡。为制备猪GSDMA(pGSDMA)多克隆抗体,本研究构建了重组表达质粒pET-21apGSDMA,转化BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导,表达并纯化了重组pGSDMA蛋白。将纯化的该重组蛋白免疫小鼠制备pGSDMA多克隆抗体(pAb),并进行western blot和间接免疫荧光试验鉴定。结果显示,pGSDMA pAb能够特异性地识别外源表达的pGSDMA蛋白和猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中内源表达的pGSDMA蛋白。利用该pAb检测猪主要组织器官中pGSDMA蛋白的表达,结果显示其能识别猪不同组织器官中的pGSDMA蛋白,且pGSDMA在猪心脏中的表达量最低,在肝、脾、肺和肾中的表达量较高。利用该pAb检测不同剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染PAMs中p GSDMA的表达,结果显示pGSDMA蛋白的表达量随着病毒感染剂量的增加而降低,表明pGSDMA在HP-PRRSV感染过程中发挥相关生物学作用。本研究首次制备了pGSDMA pAb,为深入探究pGSDMA生物学功能奠定了基础。

关键词： GSDMA 原核表达多克隆抗体高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒

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